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柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬 被引量:10
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作者 关月宏 刘桂梅 +3 位作者 刘雨思 兰琳博 郑蕊 刘晓斌 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第19期5278-5284,共7页
该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响... 该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响;分别设置对照组(0μmol·L^(-1))、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L^(-1))和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L^(-1)),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响;采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响;采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-3)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及分布的影响。结果显示,与对照组相比,柴胡皂苷D显著抑制Panc-1细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性;柴胡皂苷D作用后细胞克隆形成率显著降低。与对照组相比,柴胡皂苷D处理组细胞萎缩变小,并伴有凋亡小体形成;细胞凋亡率显著升高,自噬小泡堆积显著增多;Bax、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著升高,Bcl-2、caspase-3、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR的表达显著降低,均主要分布在细胞质中。因此,柴胡皂苷D可通过抑制Akt/mTOR通路抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡及自噬。 展开更多
关键词 柴胡皂苷D 胰腺癌 凋亡 自噬 AKT/MTOR
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