溃疡性结肠炎患者血清Lnc RNA TUG1和mi R-142-5p表达与疾病活动度及预后的关系

目的分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因1(long noncoding RNA taurine upregulated gene 1,LncRNA TUG1)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-142-5p表达水平与UC疾病活动度及预后的关系。方法选取2017年1月~2020年5月期间海南省第三人民医院收治的UC患者108例为UC组,根据改良Mayo评分将UC患者分为缓解期组(Mayo评分在2分及以下而且无单个分项评分在1分,n=42)、轻度活动组(3分≤Mayo评分≤5分,n=21)、中度活动组(6分≤Mayo评分≤10分,n=24)和重度活动组(11分≤Mayo评分≤12分,n=21)。对UC患者随访2年,记录其复发情况。另选取同期体检健康者108例为健康组。实时荧光定量PCR法测定血清LncRNA TUG1和miR-142-5p表达水平;比较UC组和健康组、不同疾病活动度UC患者、不同预后UC患者血清LncRNA TUG1和miR-142-5p表达水平;分析UC患者血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p的相关性及影响UC患者预后的因素。结果与健康组相比,UC组患者血清LncRNA TUG1表达水平(0.45±0.15 vs 1.04±0.35)降低,miR-142-5p表达水平(1.76±0.32 vs 1.01±0.18)升高,差异均有统计学意义(t=16.102,21.229,均P<0.05)。UC患者血清LncRNA TUG1表达水平与miR-142-5p呈负相关(r=-0.558,P<0.05);缓解期组、轻度活动组、中度活动组和重度活动组血清LncRNA TUG1表达水平依次降低(0.68±0.23,0.48±0.16,0.29±0.09,0.13±0.05),miR-142-5p表达水平依次升高(1.48±0.27,1.55±0.28,1.97±0.36,2.30±0.42),差异有统计学意义(F=59.475,35.716,均P<0.05)。108例UC患者随访2年,复发51例(复发组),未复发57例(未复发组),与未复发组相比,复发组UC患者血清LncRNA TUG1表达水平(0.38±0.13 vs 0.51±0.17)降低,miR-142-5p表达水平(1.93±0.35 vs 1.61±0.29)和有肠外表现患者占比(21/30 vs 9/48)升高,差异均有统计学意义(t=4.424~8.647,均P<0.05);肠外表现(OR=2.366,95%CI=1.558~3.592,P<0.001)和miR-142-5p(OR=2.563,95%CI=1.649~3.984,P<0.001)是影响UC患者预后的危险因素,而LncRNA TUG1(OR=0.680,95%CI=0.557~0.830,P<0.001)是影响UC患者预后的保护因素。结论UC患者血清LncRNA TUG1呈低表达而miR-142-5p呈高表达,均与UC疾病活动度、预后密切相关,测定二者水平有助于临床评估UC患者病情及预后。

长链非编码RNA OSER1-AS1对缺氧环境下胃癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(LncRNA OSER1-AS1)对缺氧诱导的胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:缺氧组(Hypoxia)、对照组(Hypoxia+NC)细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1-NC,实验组(Hypoxia+si)细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1后,Hypoxia、Hypoxia+NC、Hypoxia+si组细胞的培养基中添加CoCl2构建缺氧微环境;另取细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1-NC后,常规培养,为正常组(control)细胞。qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA OSER1-AS1、E-cadherin和α-SMA mRNA表达,检测各组细胞形态的改变,CCK-8法检测细胞的增殖能力;Transwell侵袭检测各组细胞的侵袭能力;免疫荧光和Western blot检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA以及对应蛋白的表达水平。结果:与control组相比,Hypoxia、Hypoxia+NC、Hypoxia+si组细胞中LncRNA OSER1-AS1的表达、E-cadherin的mRNA和蛋白的表达以及细胞中E-cadherin与α-SMA荧光强度的比值明显降低,细胞中发生EMT细胞比例、细胞增殖性能、侵袭能力、α-SMA的mRNA和蛋白表达明显升高,与Hypoxia+NC组相比,Hypoxia+si组细胞中LncRNA OSER1-AS1的表达、E-cadherin的mRNA和蛋白表达以及细胞中E-cadherin与α-SMA荧光强度的比值明显降低,细胞中发生EMT细胞比例、细胞增殖性能、侵袭能力、α-SMA的mRNA和蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:LncRNA OSER1-AS1在胃癌组织中呈低表达,沉默其表达RNA能明显增强其侵袭能力,推动肿瘤细胞的EMT过程。

miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4表达对胃癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。方法选取人胃癌细胞MKN-45、SNU-1、MKN-7、KTAO3、N87及人正常胃黏膜细胞GES-1为研究对象,将MKN-45细胞分为对照组、miR-578 NC组、miR-578 mimic组、miR-578 mimic+pc-ACSL4组,测定各组MKN-45细胞活力及凋亡、侵袭、迁移能力,测定细胞中miR-578、ACSL4、凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Bcl-2)、侵袭相关蛋白(MMP-9、MMP-2)的表达,验证miR-578与ACSL4的靶向关系。结果miR-578在人胃癌细胞中低表达;与对照组相比,miR-578 mimic组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与miR-578 mimic组相比,miR-578 mimic+pc-ACSL4组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);荧光素酶实验结果显示,miR-578与ACSL4存在靶向调节关系。结论miR-578可抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖及迁移能力,可能是通过抑制ACSL4表达实现的。

胃癌组织中高表达的miR-504通过TP53INP1调控胃癌细胞BGC-823的生物学行为

目的:探究微小RNA-504(miRNA-504)在胃癌(GC)组织中的表达水平及其对GC细胞生物学行为的调控机制。方法:收集2020年6月至2020年12月期间三亚中心医院外科收治的48例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qPCR检测组织中miR-504、肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(tumor protein 53-induced nuclear protein 1,TP53INP1)mRNA的水平,WB法检测TP53INP1水平。体外培养人胃癌细胞BGC-823,分为对照组(正常培养的BGC-823细胞)、miR-504 mimic组、mimic-NC组、miR-504 inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-504 inhibitor+si-NC组、miR-504 inhibitor+si-TP53INP1组,qPCR检测细胞中miR-504和TP53INP1 mRNA的表达,MTT法、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,WB法检测各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白(Cyclin D1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9)以及TP53INP1的表达。双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-504与TP53INP1 mRNA的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-504的表达显著升高(P<0.05),而TP53INP1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),miR-504和TP53INP mRNA两者的表达呈负相关(P<0.01)。与对照组相比,miR-504 mimic组BGC-823细胞中miR-504的表达显著升高(P<0.05)、TP53INP1 mRNA和蛋白的表达显著降低(均P<0.05),且细胞增殖率、划痕愈合率、侵袭入Transwell小室下层的细胞数量,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达均显著增加,细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。转染miR-504 inhibitor能显著下调BGC-823中miR-504的表达、上调TP53INP1 mRNA和蛋白的表达,抑制细胞的增殖、迁移与侵袭能力而促进细胞凋亡(均P<0.05);而下调TP53INP1的表达可明显减弱miR-504下调对BGC-823细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用(P<0.01)。miR-504高表达能明显抑制野生型TP53INP1质粒的荧光素酶活性(P<0.05)。结论:miR-504在胃癌组织中呈高表达,下调miR-504可抑制胃癌BGC-823细胞的恶性生物学行为而促进其凋亡,其作用机制可能与靶向调控TP53INP1的表达有关。

胃癌患者实验室指标与胃癌病理分级的相关性

目的探讨胃癌患者实验室指标与胃癌病理分级的相关性。方法选取胃癌患者80例,采用胃癌病理TNM分期将患者分为Ⅰ期16例,Ⅱ期28例,Ⅲ期30例,Ⅳ期6例,其中Ⅰ、Ⅱ期为轻度组(44例),Ⅲ~Ⅳ期为重度组(36例);分析凝血功能[D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原降解产物(FDP)]、营养指标[白蛋白(ALB)、血红蛋白(Hb)]、胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ、胃蛋白酶原比值(PGR)、促胃液素(G)-17、血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖链抗原(CA)125、CA199、CA153]等指标和胃癌TNM分期、严重程度的相关性,采用Logistic回归分析进行实验室指标和胃癌严重程度的多因素分析。结果D-D、FDP、CEA、CA199、CA125与胃癌分期有统计学意义(P<0.05),随着病理分期升高,D-DC、CEA、CA199、CA125水平显著升高,FDP水平显著下降(P<0.05)。D-D、PGⅠ、CEA、CA199、CA125与胃癌TNM分期呈正相关(r=0.451,0.351,0.412,0.482,0.372;均P<0.05),与FDP呈负相关(r=-0.388,P<0.05)。两组D-D、FDP、PGⅠ、CEA、CA199、CA125差异有统计学意义(P<0.05),D-D、CEA、CA199是胃癌分级的独立危险因素(P<0.05)。结论D-D、CEA、CA199等实验室指标能够预测胃癌患者肿瘤发生发展、侵袭及迁移变化,应早期进行监测各指标变化,以便早期诊断和治疗,改善胃癌患者预后。

海南黎族胃癌患者血清P53蛋白、sFas的检测及临床意义

[目的]探讨海南黎族胃癌患者血清P53蛋白、可溶性Fas蛋白(sFas)的检测及临床意义。[方法]选取2017年1月～2018年4月我院收治的海南地区黎族慢性浅表性胃炎患者82例、慢性萎缩性胃炎患者82例、胃癌患者82例为研究对象,分别采集3组患者的血液标本,应用ELISA法分别检测3组患者血清P53蛋白和sFas浓度,探讨其表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,并分析胃癌患者血清P53蛋白与sFas的相关性。[结果]胃癌组患者血清P53蛋白浓度明显高于慢性浅表性胃炎组和慢性萎缩性胃炎组(P<0.05);胃癌组患者血清sFas浓度明显低于慢性浅表性胃炎组和慢性萎缩性胃炎组(P<0.05);血清P53蛋白和sFas与胃癌TNM分期、浸润程度及淋巴结转移密切相关(P <0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理分型及分化程度无明显关系(P>0.05);Pearson相关性分析结果显示,胃癌患者血清P53蛋白与sFas呈负相关(P<0.05)。[结论]海南黎族胃癌患者血清中P53蛋白呈高表达,而sFas呈低表达,P53蛋白和sFas与胃癌的发生、发展存在相关性,或将成为胃癌早期诊断及预后评价的新指标。

胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞评分的构建及与预后的关系

目的:构建胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)评分,并探讨其与患者预后的关系。方法:选取2015年3月—2016年3月进行胃切除手术的患者523例,收集胃癌组织标本,采用免疫组化方法对胃癌组织标本的组织芯片中的6种淋巴细胞的特征进行分析,依据淋巴细胞特征及其比值分为高表达组和低表达组,通过ROC曲线分析不同TIL浸润情况患者的生存状态。使用6种淋巴细胞的特征及其比值,根据淋巴因子的表达水平构建TIL评分,并对其一致性和可靠性进行评估。523例患者采用计算机产生随机数法以3∶1的比例分为训练集(n=393)和测试集(n=130),将训练集患者TIL评分分为高、低2组,探究TIL评分与胃癌患者临床病理特征的相关性。对患者进行5年随访,通过Logistic回归法对训练集患者的独立预后因素进行探讨,构建列线图预测模型,并对模型进行验证。结果:CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD20^(+)、CD57^(+)、FOXP3^(+)浸润免疫细胞和部分临床病理特征之间呈显著负相关性,浸润程度越大,患者的生存率越高。构建的TIL评分与胃癌患者临床病理特征之间存在相关性,高TIL评分的患者肿瘤相对较小,肿瘤浸润深度相对较浅,淋巴结转移相对较少以及TNM分期相对更早,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素和多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度和TIL评分均为胃癌患者预后的影响因素(P<0.05),基于训练集独立预后因素构建的列线图模型具有良好的预测准确性。结论:CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD20^(+)、CD57^(+)、FOXP3^(+)浸润免疫细胞和部分临床病理特征之间呈显著负相关性,通过单一的TIL的特征及其比值建立的综合性指标TIL评分可用于预测胃癌患者的预后,整合TIL评分和临床危险因素构建的列线图预测模型对于胃癌患者的预后具有较高的预测价值。