利用重组系统构建大容量噬菌体抗体库

噬菌体抗体库技术是获得人源抗体的重要方法,此文探讨大容量天然噬菌体抗体库在筛选人源抗体中的实际应用价值。从正常人外周血分离淋巴细胞,通过基因工程方法获得抗体基因并且构建到含有重组位点的载体pDF中获得初级噬菌体抗体库,初级库在重组系统中重组之后获得了容量为9×1010的天然Fab噬菌体抗体库,通过序列测定和重组蛋白筛选来对抗体库的质量进行初步鉴定。对随机挑取的96个克隆测序序列分析表明各种型别比例基本合适;用四种抗原筛选有明显的富集,并且获得了针对其中一种抗原的阳性抗体克隆。

汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达

目的 构建融合基因pcDNA3 1/His B IL 2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础。方法采用PCR从含有人源IL 2的质粒中扩增出IL 2片段 ,将人源IL 2插入真核表达载体pcDNA3 1/His B中 ,构建的质粒命名为pcDNA3 1/His B IL 2。同样采用PCR扩增汉坦病毒H82 0 5株G1基因片段 ,将回收的G1片段经双酶切插入到pcD NA3 1/His B IL 2 ,构建成新的质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1。采用脂质体介导包裹 ,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达 ;采用原位杂交观察细胞内的基因表达 ,SDS PAGE法作重组质粒pcDNA3 1/His B IL 2 G1瞬时表达产物的鉴定。结果 融合基因可转录并表达一分子量为 78kD左右的蛋白 ,对照组则未见电泳条带出现。结论 成功构建pcDNA3 1/His B IL 2 G1融合基因 。

SARS-CoV核蛋白和宿主细胞相互作用的初步研究

寻找与SARS-CoV核蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,从而探索SARS-CoV的致病机理。可溶性表达SARS-CoV核蛋白,利用His标签和离子交换层析对表达的蛋白进行了纯化,获得较纯的可溶性核蛋白。再将SPR/BIA技术与MALDI-TOF MS技术结合起来,使用SPR生物传感芯片作为亲和吸附的表面,分别捕获2BS细胞和A549细胞裂解液中与SARS-CoV核蛋白相互作用的细胞蛋白,收集足够量的相互作用蛋白,再利用MALDI-TOF-MS分析获得蛋白的性质。结果鉴定出与SARS-CoV核蛋白相互作用的蛋白:26S蛋白酶调节亚单位S10B(蛋白酶体亚单位p42)(蛋白酶体26S亚单位ATPase 6)(P62333),属于泛素/蛋白酶体系统;目前国内外尚未见类似报道。此研究初步发现了一种与SARS-CoV核蛋白在细胞外相互作用的蛋白,但这种相互作用在SARS-CoV感染及SARS的发生发展中发挥的作用还有待于深入研究和探索。

抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立

制备抗登革病毒NS1蛋白单克隆抗体，建立检测NS1的ELISA方法。表达1～4型登革病毒NS1蛋白，将1型NS1蛋白纯化后免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。经ELISA、Western blotting、间接免疫荧光筛选和鉴定单克隆抗体，进行纯化和HRP标记。通过鉴定每两株单抗之间是否存在竞争作用，选择非竞争单抗组合并建立NS1捕获法ELISA。结果获得7株高滴度抗NS1单抗，捕获法ELISA可以检出10ng／mLNS1。原核表达登革病毒NS1蛋白制备的单抗可以和天然病毒抗原反应，NS1捕获法ELISA可以用于登革病毒感染检测。

新发和烈性传染病的防控与生物安全

近几十年来,SARS冠状病毒、埃博拉病毒、高致病性禽流感H7N9等新发和烈性传染病接连出现,严重影响人类健康。新发和烈性传染病病原由于没有有效的疫苗和药物,具有传染性强、传播速度快、传播范围广等特点,现代生物学技术的发展使得这些病原有可能作为生物武器,威胁我国生物安全。文章分析国内外新发和烈性传染病流行现状,阐述新发和烈性传染病与生物安全的关系以及可能带来的生物恐怖威胁,探讨新发和烈性传染病防控研究的前沿技术,提出了我国新发和烈性传染病防控中存在的问题,同时针对武汉国家生物安全实验室的落成对新发和烈性传染病的防控和生物安全的防护进行了展望。

提升生物安全治理能力

生物安全风险是我国面临的重大风险挑战,事关国家安全和发展。习近平总书记在主持召开中央全面深化改革委员会第十二次会议时发表重要讲话指出,要从保护人民健康、保障国家安全、维护国家长治久安的高度,把生物安全纳入国家安全体系,系统规划国家生物安全风险防控和治理体系建设,全面提高国家生物安全治理能力。《中华人民共和国生物安全法》于2021年4月15日起施行,为国家生物安全治理能力建设提供了有力支撑。

RNA修饰在病毒复制中的功能

早在60多年前科学家已经发现RNA化学修饰的存在,但直到近年来关于RNA修饰功能的研究才得到广泛关注及蓬勃发展,其中病毒RNA修饰的功能成为了病毒学研究领域新的热点。目前已有150多种RNA修饰被发现,这些修饰在调控RNA结构、剪接、核运输、翻译、稳定性等多种生物过程中发挥重要作用。目前病毒RNA修饰中最受关注的7种化学修饰包括N6-甲基腺苷(m6A)、5-甲基胞苷(m5C)、N1-甲基腺苷(m1A)、N7-甲基鸟苷(m7G)、N4-乙酰胞苷(ac4C)、假尿苷(Ψ)和核糖甲基化(Nm)。本文介绍了细胞中的修饰系统,讨论了当前各种修饰的检测方法并对这些修饰在病毒复制中的功能进行了归纳总结。此外,我们提出了病毒RNA修饰未来可能的一些研究方向。

乙型肝炎病毒polyA形成与调节因素研究进展

乙型病毒性肝炎（乙肝）是全球范围的重大公共卫生问题之一,其病原体乙型肝炎病毒（HBV）可通过多种途径感染人体,引起急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌。HBV感染是全球十大死因之一,世界上30%的人感染过或者成为HBV的携带者。据统计[1],全球共有3.5亿HBV慢性感染者,每年因HBV慢性感染所致的肝纤维化或者肝癌感染致死的人数有100万左右。