猪轮状病毒G9P[7]型云南株的分离鉴定及VP4和VP7基因测序分析

为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性样品处理后接种至MA-104细胞进行PoRV分离;对分离毒株进行间接免疫荧光、电镜观察、胶体金检测和VP4、VP6、VP7基因测序及遗传进化分析。结果显示,仔猪肠道组织样品经终浓度20μg/mL的胰酶在37℃孵育2h,能在MA-104细胞上增殖传代,第3代出现稳定的细胞病变,盲传20代,每隔5代进行PoRV的检测;间接免疫荧光试验可见特异性荧光,胶体金和RT-PCR检测均为PoRV阳性,电镜观察可见病毒粒子直径约为65nm,呈车轮状,符合PoRV粒子典型形态特征,将该分离株命名为PoRV YN-A株。基因同源性比较和遗传进化树分析显示,YN-A株的VP6基因序列与国内A群GD株的同源性为99.93%,VP7与中国G9型NJ2012株的同源性为99.12%,VP4与美国P[7]型OSU株的同源性为98.91%,确定该分离株为猪A群轮状病毒G9P[7]型。YN-A株VP7序列在9个氨基酸位点存在点突变,即aa9(I→V)、aa16(V/T→I)aa44(A→V)、aa100(D/E→N)、aa212(T/A→K)、aa221(N→S)、aa225(V→A)、aa271(I>V)、aa267(D>E)。首次从云南地区的腹泻仔猪小肠组织中成功分离到1株G9P[7]型的新基因型PoRV毒株,为PoRV的致病性、分子生物学特性研究及PoRVG9优势基因型新疫苗研发奠定了基础。

一例集约化猪场伪狂犬的诊断及防控

笔者团队开展了一个猪场暴发伪狂犬病(Pseudorabies,PR)后的确诊和防控实践。通过发病情况调查、观察临床症状和剖解组织病变,初步判断某集约化猪场暴发了伪狂犬病。采集2头典型病猪的病料经PCR鉴定为伪狂犬病毒(PRV)阳性,采集10头病猪的血清经PRVg E-ELISA检测为阳性(9/10),确诊该猪场流行和暴发的为猪伪狂犬病。确诊后对该场猪群采取了隔离、消毒和紧急接种等综合防控措施,快速制止了该猪场PR的流行,取得显著的防控效果。

科学防控猪腹泻提高经济效益

猪发生腹泻的病因有很多种,可分为传染性和非传染性病因两大类。传染性病因包括病毒性、细菌性和寄生虫性病因,非传染性病因包括舍内环境因素、营养因素、饲养管理不当等。大多数情况下,猪场是两种及以上病原和病因混合叠加引起猪只腹泻。猪场中发生腹泻是比较常见的,尤其是仔猪。