水稻是我国主要的粮农作物,是否含有转基因成分与粮食和食品安全息息相关。本试验基于出入境检验检疫行业标准SN/T 2584-2010《水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法》设计转基因成分花椰菜花叶病毒35S启动子(Promoter of cauli...水稻是我国主要的粮农作物,是否含有转基因成分与粮食和食品安全息息相关。本试验基于出入境检验检疫行业标准SN/T 2584-2010《水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法》设计转基因成分花椰菜花叶病毒35S启动子(Promoter of cauliflower mosaicvirus 35S,pCaMV35S)、胭脂碱合成酶基因终止子(Terminator of nopaline synthase gene,tNOS)和水稻内源基因蔗糖磷酸合酶基因(Sucrose phosphate synthase,SPS)的引物及探针,建立水稻转基因成分的定性检测方法,并深入研究此方法的检出限、定量能力以及灵敏度。结果表明:此方法具有较强特异性、较低检出限(0.1ng,1ng)以及较高灵敏度(0.1%),并且此方法具有较好的定量能力(扩增效率:100%,95%;相关系数R2:0.9874,0.9881)。综上所述,此方法不仅具有灵敏的定性能力还具有定量潜能。展开更多
目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线...目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线判断该方法的定量能力,通过相对模拟掺假试验测定方法的灵敏度。结果特异性试验的检测结果显示此系统具备较强的特异性,能够区分含有上述两种调控元件的转基因植物和非转基因植物。此方法中,pCaMV35S基因的检测限为1 ng,tNOS基因的检测限为10 ng。依托此方法建立的标准曲线的扩增效率分别为96%和87%,r2均大于0.99,方法具有较好地定量能力,相对灵敏度达到1%,满足混合样品中转基因成分的检测要求。结论建立的双重实时荧光PCR方法表现出较强的特异性和较高的灵敏度,有高通量、低成本以及定量检测的能力。展开更多
文摘目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线判断该方法的定量能力,通过相对模拟掺假试验测定方法的灵敏度。结果特异性试验的检测结果显示此系统具备较强的特异性,能够区分含有上述两种调控元件的转基因植物和非转基因植物。此方法中,pCaMV35S基因的检测限为1 ng,tNOS基因的检测限为10 ng。依托此方法建立的标准曲线的扩增效率分别为96%和87%,r2均大于0.99,方法具有较好地定量能力,相对灵敏度达到1%,满足混合样品中转基因成分的检测要求。结论建立的双重实时荧光PCR方法表现出较强的特异性和较高的灵敏度,有高通量、低成本以及定量检测的能力。