TACI-Fc融合蛋白的基因构建、原核表达及生物活性鉴定

目的:构建sTACI胞外区与人IgG1 Fc的重组基因,并进行原核表达和纯化具有生物活性的融合蛋白。方法:通过普通PCR和重叠PCR法,获得sTACI-Fc重组基因,进而构建重组子pET28a-sTACI-Fc,并转入E.coli BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达,采用蛋白A凝胶亲和柱进行纯化以及ELISA法检测其生物活性。结果:成功获得了sTACI-Fc的重组基因,pET28a-sTACI-Fc重组子,通过表达和纯化得该融合蛋白,且其能够与BAFF特异性结合,结合活力呈现剂量依赖性,浓度5ng/μl时,两者的吸附达饱和。结论:成功构建了基因大小为1 000bp的sTACI-Fc重组基因,并在原核系统中进行了可溶性表达,得大小约为40kDa的融合蛋白sTACI-Fc,体外实验证实在其浓度为5ng/μl时与BAFF的结合达饱和,为下一步的研究工作奠定了基础。

滤泡辅助性T细胞

滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)是新发现的一类CD4+T细胞亚群,在生发中心(germinal center,GC)形成和B细胞分化中起重要作用。Tfh细胞参与了机体免疫,对维持机体免疫平衡起重要作用,Tfh细胞失调将会导致严重的免疫性疾病。因此,机体内存在一系列复杂的调控机制,以保证Tfh细胞的正常发育、分化和功能。本文主要对Tfh细胞分化、特征性细胞标记、功能、调控以及Tfh细胞功能失常引起的疾病等方面做一综述。