黄芩苷对GBS诱导小鼠乳腺炎症反应的干预作用及机制

为明确黄芩苷对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,GBS)诱导的小鼠乳腺组织炎症反应的干预作用及机制,本研究将分娩后7 d~10 d的40只健康BALB/c泌乳小鼠随机分为阴性对照组、感染组、高中低剂量黄芩苷治疗组(20 mg/kg、40 mg/kg和80 mg/kg)。感染组和治疗组以GBS感染BALB/c小鼠,治疗组于感染24 h后每6 h经乳导管灌注相应剂量的黄芩苷一次,连续4次,最后一次给药6 h后摘取乳腺组织,HE染色后观察乳腺组织病理变化;利用RT-q PCR和间接ELISA检测各组小鼠乳腺组织中炎症因子及NLRP3炎症小体通路相关因子m RNA的相对转录水平及分泌水平;利用免疫组化试验检测各组小鼠乳腺组织中NLRP3蛋白的定位及含量的变化。组织病变观察可见,GBS感染可导致小鼠乳腺上皮细胞坏死、脱落,乳腺腺泡腔固有结构消失;与感染组相比,各治疗组不同浓度的黄芩苷均可减轻小鼠乳腺组织病理损伤。RT-q PCR检测结果显示,感染组小鼠乳腺组织中IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA的相对转录水平显著或极显著高于阴性对照组小鼠(P<0.05或P<0.01);与感染组相比,各治疗组显著或极显著(P<0.05或P<0.01)下调IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、Caspase-1、NLRP3和ASC基因m RNA的相对转录水平。ELISA检测结果显示,与感染组相比,各治疗组小鼠灌注不同浓度的黄芩苷可极显著(P<0.01)下调乳腺组织中IL-1β、Caspase-1和NLRP3蛋白的分泌水平,且免疫组化试验结果显示各治疗组小鼠乳腺组织中NLRP3蛋白分布减少。综上所述,40 mg/kg黄芩苷降低小鼠乳腺炎症反应效果最好,可更有效下调NLRP3炎症小体通路相关基因m RNA相对转录水平,抑制NLRP3炎症小体活化,降低乳腺组织炎症因子m RNA相对转录和分泌水平,缓解GBS诱导的小鼠乳腺组织炎性损伤。本研究为应用黄芩苷治疗GBS感染导致的奶牛乳腺炎提供了参考依据。

十溴二苯乙烷暴露诱导小鼠氧化应激反应

研究旨在明确十溴二苯乙烷(DBDPE)对小鼠氧化应激的影响。将60只小鼠随机分为5组,连续28 d暴露于0 (D0组,即空白对照组)、5 (D5组)、50 (D50组)、500 mg/(kg·d) bw的DBDPE (D500组)及50 mg/(kg·d) bw DBDPE联合50 mg/(kg·d) bw十溴联苯醚(B50+D50组)中。结果显示,与D0组相比,D500组和B50+D50组小鼠血清中丙二醛(MDA)含量均极显著下降(P<0.01),D50组小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性显著下降(P<0.05);D50组小鼠肝脏组织中MDA含量极显著升高(P<0.01),D5组与D500组肝脏MDA含量显著下降(P<0.05)。与D0组相比,D5组、D500组与B50+D50组小鼠肝脏中过氧化氢酶(CAT)活性均显著降低(P<0.01);D50组、D500组与B50+D50组小鼠肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性均极显著升高(P<0.01),D500组与B50+D50组小鼠肝脏中微量还原型谷胱甘肽(GSH)含量均极显著升高(P<0.01);D500组小鼠肝脏中谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)活性极显著升高(P<0.01)。与D0组相比,D500组小鼠肾脏组织中MDA含量极显著升高(P<0.01);各染毒组小鼠肾脏组织中CAT活性均极显著下降(P<0.01);D50组和D500组小鼠肾脏中SOD活性均极显著升高(P<0.01);B50+D50组小鼠肾脏中GSH含量极显著升高(P<0.01);D5组和D500组小鼠肾脏中GSH-ST活性显著升高(P<0.05)。研究表明,DBDPE暴露可通过下调CAT活性和上调SOD活性破坏小鼠体内氧化还原稳态,诱导小鼠肝脏和肾脏氧化应激损伤,导致肝肾毒性作用,其中500 mg/kg DBDPE对机体氧化还原系统影响较大。

A型产气荚膜梭菌诱导黄羽肉鸡肠道氧化应激和炎性损伤研究

【目的】研究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)感染对黄羽肉鸡肠道氧化应激和炎症反应的影响及初步机制,为产气荚膜梭菌致病机制的研究和防控药物的开发提供理论依据。【方法】将100羽1日龄健康黄羽肉鸡随机分为4组,即对照组和高、中、低剂量感染组,每组5个重复,每个重复5羽。试验全期,各组肉鸡饲喂基础饲粮,于14~16日龄,对照组肉鸡灌服PBS,高、中、低剂量感染组肉鸡分别灌服1×109、1×108和1×107 CFU产气荚膜梭菌,连续灌服3 d。测定感染1和3 d的肉鸡血液生化指标、空肠和回肠氧化应激和炎症相关因子水平,观察空肠和回肠组织病理损伤。【结果】与对照组相比,不同剂量感染组肉鸡的炎性相关因子和氧化应激指标呈不同程度变化,其中高剂量组感染1 d显著提高了肉鸡血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及空肠丙二醛(MDA)含量、空肠和回肠白细胞介素8(IL-8)水平(P<0.05),并降低了空肠和回肠超氧化物歧化酶(SOD)活性、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)含量、空肠白细胞介素10(IL-10)含量(P<0.05);高剂量组感染3 d肉鸡血清AKP、ACP和LDH酶活性显著升高(P<0.05),空肠MDA、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MCP-1、IL-10、半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)的含量及caspase-1、IL-1β和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),回肠MDA、GSH、TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-8和IL-10含量及caspase-1、IL-1β、NLRP3和Gasdermin A的mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。中剂量组感染1 d显著提高了肉鸡血清中AKP酶活性和显著降低了空肠SOD酶活性(P<0.05),感染3 d显著提高血清中ACP和AKP酶活性(P<0.05)和回肠GSH含量(P<0.05)。低剂量组感染1和3 d显著提高血清中ACP和AKP酶活性(P<0.05),感染1 d能显著降低空肠SOD酶活性和IL-18含量(P<0.05)。高剂量组肉鸡空肠和回肠黏膜出血,肠黏膜上皮细胞坏死脱落,炎性细胞浸润。中剂量组和低剂量组的空肠和回肠肠绒毛有轻微断裂,对照组的空肠和回肠组织结构正常。【结论】1×109 CFU产气荚膜梭菌连续3 d感染14日龄黄羽肉鸡,可能通过过度激活NLRP3炎性小体信号通路,提高雏鸡空肠和回肠组织炎性因子的表达水平、降低雏鸡的抗氧化能力、破坏空肠和回肠肠道组织结构,诱发鸡坏死性肠炎。

棉/氨纶基柔性应变传感器的制备及其性能研究

传统传感器笨重坚硬,不易穿着佩戴。采用多巴胺(PDA)对棉/氨纶织物进行改性,从探究导电性能出发,以导电高分子材料聚吡咯为导电介质通过化学氧化法制备PPy@棉/氨纶柔性应变传感器,又通过原位还原法以银为导电材料改进,制备灵敏度更高、信号稳定性更好的Ag/PPy@棉/氨纶柔性应变传感器。研究柔性织物基材上涂覆导电材料后的导电性能,并采用红外光谱、扫描电镜和X射线衍射对Ag/PPy@棉/氨纶织物基本化学性质、表面形貌和晶面结构进行分析。结果表明:在不同拉伸形变量和频率下,电阻变化率循环曲线稳定、重复性好,因此该棉氨织物有望应用于柔性可穿戴电子器件和传感器等领域。

百色地区罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及耐药性研究

本研究旨在明确广西百色地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性,分析该地区无乳链球菌耐药情况,为罗非鱼健康养殖提供科学依据。2022年7月-10月,采集广西百色市部分罗非鱼养殖场病鱼的肝脏、肾脏、脾脏和脑组织,进行细菌分离培养。观察分离菌株菌落和菌体形态特征,测定分离菌株生化特性和16S rDNA序列,检测分离菌株药物敏感性和致病性。结果显示,从患病鱼的组织器官中分离到15株优势病原菌,并分别将这些分离菌株命名为GBSH1~15。这些分离菌株在绵羊血琼脂平板上形成乳白色、圆形、表面光滑、具有溶血环的小菌落;菌体革兰氏染色呈阳性、短链状;分离菌株不运动、过氧化氢酶阴性,山梨醇、乳糖、甘露醇、棉子糖和七叶苷生化反应均为阴性,GBSH1~GBSH15的16S rDNA序列与NCBI已知的无乳链球菌序列高度同源。药敏试验结果显示15株分离菌株对氟苯尼考、恩诺沙星、大观霉素、复方新诺明、氨曲南和阿米卡星不敏感,对阿莫西林、头孢曲松、头孢吡肟、链霉素、妥布霉素和卡那霉素的耐药率达86.6%以上,对克林霉素、克拉霉素、万古霉素、环丙沙星、多粘菌素B、头孢呋辛、头孢西叮、氧氟沙星、庆大霉素的耐药率达60%以上,对青霉素、氯霉素、米诺环素、呋喃妥因、头孢唑林、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢噻肟敏感性达80%以上。多重耐药检测结果表明,15株分离菌株均至少对12种药物表现耐药;分离菌株感染罗非鱼死亡率高达60%。本结果表明,百色地区罗非鱼养殖场的罗非鱼感染病原为无乳链球菌,具有多重耐药性、致病力强等特点,头孢噻吩等药物可用于百色地区罗非鱼无乳链球菌病的防治。

辣蓼黄酮长循环纳米脂质体的制备

研究旨在优化辣蓼黄酮长循环纳米脂质体制备条件。试验首先以包封率为评价指标,筛选辣蓼黄酮长循环纳米脂质体制备方法。确定改良乙醇注入法后,采用单因素试验考察磷胆比、药脂比、生理盐水体积、超声时间、表面活性剂用量因素对包封率的影响;再通过Box-Behnken响应面法进行3因素3水平优化,选取磷胆比、药脂比、生理盐水体积等3个因素进一步优化;确定最佳的脂质体制备条件后,通过后插入法将DSPEMPEG 2000插入辣蓼黄酮纳米脂质体上,制成辣蓼黄酮长循环纳米脂质体并进行表征。结果显示,改良乙醇注入法制备辣蓼黄酮长循环纳米脂质体最优条件是:磷胆比(质量比)6.8∶1、药脂比(质量比)1∶10.3、生理盐水体积9.5 mL。选择摩尔比为5%的DSPE-MPEG 2000制备长循环纳米脂质体,在最优条件下制备的辣蓼黄酮长循环纳米脂质体平均包封率为(72.60±2.44)%,脂质体粒径为(80.93±0.30)nm,多分散性指数(PDI)为0.14±0.01,Zeta电位(-1.70±0.29)mV。

黄酮类化合物对PRV感染小鼠的保护作用研究

为了明确黄酮类化合物(槲皮素、木犀草素和山奈酚)对感染猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)小鼠的保护作用,试验将60只昆明小鼠随机分为6组(对照组、PRV组和4个药物组),每组10只(雌雄各半),除对照组外,其余组小鼠肌肉注射1×10^(2)TCID_(50)PRV,100μL/只;感染后1小时灌胃给药,药物组小鼠分别按体重灌胃100 mg/kg槲皮素、木犀草素、山奈酚或阿昔洛韦,对照组和PRV组小鼠灌胃给予生理盐水,0.3 mL/只,连续给药7 d。试验期间,观察小鼠临床症状,统计小鼠死亡率,观察小鼠脏器组织病理学变化,并于试验第7天或小鼠濒死时采血,测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,评价槲皮素、木犀草素和山奈酚对感染PRV小鼠的保护作用。结果表明:黄酮类化合物有效缓解了PRV感染导致的小鼠抓挠、啃咬皮肤和被毛脱落、皮肤破损等临床症状;PRV组小鼠存活率为20%,槲皮素、山奈酚、木犀草素和阿昔洛韦组小鼠存活率分别为40%、60%、50%和60%,均显著高于PRV组(P<0.05);黄酮类化合物有效减轻了感染PRV小鼠的各器官水肿、充血、出血和细胞坏死等病理损伤;与PRV组相比,槲皮素组和阿昔洛韦组血清中TNF-α和IL-6含量极显著升高(P<0.01),木犀草素组和山奈酚组血清中TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.05)。说明黄酮类化合物(槲皮素、木犀草素和山奈酚)能通过提高血清中炎症因子水平增强小鼠免疫功能,减轻感染PRV小鼠的临床症状和病理损伤,并提高小鼠的存活率,发挥抗PRV感染的作用。

吡啶改性膨润土对直接耐晒翠蓝染料废水脱色性能研究

为了解决日益严重的水污染问题,用吡啶作改性剂,对膨润土进行有机改性,制得一种新型水处理剂,用于直接耐晒翠蓝染料废水的处理。研究了处理废水的最佳工艺条件。结果表明,投土量为10 g/L,pH=3.5,搅拌速度为175 r/min,搅拌时间25 min,离心时间为2 min,吡啶改性土对直接耐晒翠蓝染料废水的脱色率可达80%。改性土对直接耐晒翠蓝的吸附过程可用准二级速率方程较好地描述。

十溴二苯乙烷对小鼠肝脏和肾脏的毒性研究

为探讨作为传统溴系阻燃剂十溴二苯醚(BDE-209)替代品的新型阻燃剂十溴二苯乙烷(DBDPE)暴露对小鼠肝肾功能的影响,将60只雄性小鼠随机分为5组,每天分别给予低、中、高剂量(5、50、500 mg/kg体重)的DBDPE,对照组给予相同体积的玉米油,联合染毒组每天给予50 mg/kg体重的DBDPE和BDE-209,每天灌胃1次,连续暴露60 d。试验期间观察小鼠的一般体征,测量小鼠体质量,末次染毒后测定小鼠血清生化指标、肝脏和肾脏系数,通过苏木素-伊红(HE)、油红O和刚果红染色观察小鼠肝脏和肾脏组织病理学变化。结果显示,与对照组相比,染毒组小鼠临床体征未见异常,体质量无显著变化;高剂量组小鼠肝脏系数显著升高(P<0.05),中剂量组小鼠肾脏系数极显著降低(P<0.01)。高剂量组小鼠血清中尿素(UA)含量极显著升高(P<0.01),中剂量组小鼠血清中白蛋白(ALB)含量和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著升高(P<0.01),甘油三酯(TG)含量降低(P<0.05)。组织病理学结果可见,各攻毒组小鼠肝脏细胞均发生不同程度的脂肪变性和坏死,高剂量组小鼠肾脏间质有大量淀粉样物质沉着。结果表明,每天500 mg/kg体重DBDPE暴露导致小鼠肝肾组织结构改变,诱导小鼠肝肾组织细胞代谢紊乱和功能障碍,对肝肾具有毒性效应。

猪圆环病毒3型的分离与鉴定

为分离获得猪圆环病毒3型(PCV3),对疑似PCV感染死亡的仔猪病料进行PCR检测,将检测呈PCV3阳性的样品利用PK-15细胞进行病毒分离,同时利用原核表达的Cap蛋白制备多克隆抗体,通过IFA、免疫电镜和序列测定分析对分离株进行鉴定。结果显示,分离获得1株PCV3流行毒株,IFA检测有特异性荧光;电镜下可见圆形、直径约为20 nm的病毒粒子;与PCV1、PCV2的同源性分别为22.2%、22.1%,属于3a亚型,将其命名为LJ0603株。LJ0603株繁殖至第72小时病毒含量最高,且能稳定传代至第13代。PCV3 LJ0603株的获得为其结构功能和致病机制及免疫预防等研究奠定了基础。

乳酸乳球菌表达重组牛乳铁蛋白肽的抑菌活性分析

牛乳铁蛋白肽是由牛乳铁蛋白经消化酶水解产生的一类具有广谱抑菌活性的短肽;乳酸乳球菌作为食品级微生物,既有天然的益生作用,又是理想的表达牛乳铁蛋白肽的载体。【目的】探究重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFcinBA/MG1363表达牛乳铁蛋白肽的抑菌活性。【方法】利用牛乳铁蛋白肽标准品绘制定量标准曲线来确定重组牛乳铁蛋白肽的含量,利用牛津杯法及微量肉汤稀释法测定重组牛乳铁蛋白肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等35株细菌的抑菌活性及最小抑菌浓度,利用扫描电镜、透射电镜、荧光显微镜、凝胶阻滞试验、黏附试验来探究重组牛乳铁蛋白肽对菌体结构、细菌DNA及黏附力的影响,利用CCK-8检测其对RAW 264.7细胞的毒性作用,并对小鼠红细胞溶血率进行测定。【结果】重组乳酸乳球菌上清中牛乳铁蛋白肽的浓度为24.39μg/mL,重组牛乳铁蛋白肽对测试的25株致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌浓度范围在16–128μg/mL,但对9株乳酸菌以及粪肠球菌没有明显的抑制作用,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门菌的菌体完整性具有不同程度的破坏作用,其主要作用靶点为细菌的细胞膜,可以与细菌DNA结合并抑制细菌对Caco-2、IPEC细胞的黏附作用,重组牛乳铁蛋白肽对小鼠红细胞及RAW 264.7细胞没有明显的细胞毒性。【结论】乳酸乳球菌表达重组牛乳铁蛋白肽的抑菌活性与牛乳铁蛋白肽标准品相一致,通过直接作用于细菌细胞膜、胞内核酸或抑制细菌对正常细胞的黏附作用等多方面实现抑制或杀死细菌,发挥广谱的抗菌活性,且对真核细胞没有明显的细胞毒性作用。