转hrpZPsta大豆株系的分子检测和抗性分析

为考察转基因大豆株系JN27-119-21后代中hrpZPsta外源基因的遗传稳定性、检测JN27-119-21后代的抗病能力,从而为培育抗疫霉根腐病的大豆新品种提供理论参考,以转hrpZPsta基因大豆株系JN27-119-21的T7、T8代为供试材料,通过PCR和Southern Blot分子生物学检测方法和下胚轴侵染法鉴定转基因株系后代抗疫霉菌能力。研究结果表明:外源hrpZPsta基因在高世代转基因株系中能够稳定遗传,hrpZPsta基因已被成功整合到大豆受体吉农27的基因组中,且整合方式为单拷贝,整合位点不同。hrpZPsta基因在转化株系的根、茎、叶中均有表达,T7代平均相对表达量分别为2.877,1.336和7.734,T8代平均相对表达量分别为3.612、1.746和8.627,2个世代相对表达量水平均为叶>根>茎。转基因株系后代对疫霉根腐病的抗病级别为抗性,而受体株系为中抗,抗病能力明显提高。

大豆E3连接酶基因GmPLR-2的克隆及抗旱功能鉴定

PEG模拟干旱胁迫条件下E3连接酶GmPLR-2基因在大豆根茎叶中呈上调表达,推测其可能参与大豆抗旱调节。本研究克隆GmPLR-2基因,构建植物过表达载体pCAMBIA3301-GmPLR-2、RNA干扰表达载体pCAMBIA3301-GmPLR-2-RNAi并转化到吉农38中,对T2转基因植株进行分子检测,连续7 d不浇水后测定转基因叶片中相关生理生化指标。结果表明:共获得T2过表达阳性植株12株,RNA干扰阳性植株11株。干旱胁迫7 d后过表达植株中相对含水率、POD活性、SOD活性、Pro含量均高于未转化植株,而RNA干扰植株中则低于未转化植株;另一方面过表达植株中相对电导率、MDA含量均低于未转化植株而RNA干扰植株中含量则高于未转化植株,且差异极显著,说明GmPLR-2基因的表达与大豆中相关抗旱指标的变化有关。

抗病基因hrpZ_(Psta)转大豆‘吉农18’后代对疫霉根腐病的抗性分析

本试验以T7、T8代转基因株系JN18-hrpZ_(Psta)-45为试验材料,运用常规PCR技术、Southern杂交及qRT-PCR技术对T7、T8代大豆株系进行分子检测和稳定性鉴定,随即以下胚轴侵染法为理论依据完成疫霉根腐病抗性鉴定,同时分析其抗病性。结果表明:终止子Nos、启动子35S、筛选标记Bar的目的条带和转化的目的基因在T7、T8代转基因株系中被全部测获;Southern印迹杂交证实:目的基因在大豆基因组中以单拷贝方式完成整合;qRT-PCR检测证实:植株籽粒、叶、茎、根全部有目的基因表达,T7代株系的根、茎、叶、籽粒相对表达量均值分别为2.45、1.73、2.52、1.91,T8代株系的根、茎、叶、籽粒相对表达量均值分别为3.22、2.04、3.46、2.75,证实茎中的表达量最低、叶中最高,以抗病性标准为依据展开对照可以获得如下抗病性鉴定结论:转、非转基因二者的抗病级别分别为高抗、中抗。

转hrpZ_(Psta)基因大豆株系的分子鉴定及其抗疫霉根腐病分析

以T_(7)、T_(8)代转hrpZ_(Psta)基因大豆株系JN29-705-21为供试材料,通过分子鉴定和室内人工接种疫酶菌进行抗病性分析。常规PCR结果表明:在T_(7)、T_(8)代转基因株系中均检测到转化的目的基因hrpZ_(Psta)、筛选标记Badh,启动子35S和终止子Nos,表明hrpZ_(Psta)基因在高世代转基因株系中能够稳定遗传;Southern杂交结果显示:hrpZPsta基因以单拷贝的形式整合到大豆基因组中,且整合位点不同;qRT-PCR检测结果表明:hrpZ_(Psta)基因在转化株系的根、茎、叶中均有表达,其中在叶中表达量最高,在茎中表达量最低,T_(7)代株系的根、茎、叶平均相对表达量分别为2.800,1.772,8.367,T_(8)代株系的根、茎、叶平均相对表达量分别为3.028,1.650,9.036;利用下胚轴侵染法对转化株系进行抗病鉴定分析,结果显示,转基因株系后代对疫霉根腐病的抗病级别为抗病,而非转基因受体株系抗性为中抗,表明转基因株系的抗病能力得到了提高。