一株石油烃降解菌TY22烷烃羟化酶基因的克隆及功能研究

[目的]对一株石油烃降解菌TY22的烷烃羟化酶基因alkB克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究。[方法]PCR扩增获得alkB基因部分序列,再根据该序列通过染色体步移技术,最终获得完整CDS序列。将alkB基因与pET21b(+)载体构建重组质粒,并转入E.coli BL21(DE3)进行表达。再将alkB基因克隆至pCom8载体中,分别转入E.coli GEc137(p GEc47△B)和Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1进行基因功能的互补试验。[结果]染色体步移获得了1 236 bp的烷烃羟化酶基因完整CDS序列(Gen Bank Accession:KU867870)。诱导表达发现,重组菌在0.1 mmol/L IPTG、30℃条件下诱导培养6 h的表达效果最佳,得到与预期相符的46 kDa蛋白。基因功能互补试验发现,重组菌能在以C12~C16为唯一碳源的培养基中生长。[结论]TY22菌株的烷烃羟化酶基因完整CDS序列全长1 236 bp,能氧化C12~C16的中长链烷烃,并能在大肠杆菌中有效表达。

一株解烃菌TY22的解烃特性研究

以液体石蜡为唯一碳源和能源,从南充市炼油厂被石油污染的土壤中筛选到一株石油烃降解菌TY22.根据常见细菌系统鉴定、生理生化测验和16S rRNA测序分析,鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).该菌具有很强的石油烃降解能力.结果表明,TY22对烷烃的降解范围较宽,能以C6-C32烷烃为唯一碳源和能源生长.在含有1%(W/V)液体石蜡无机盐培养基中接入1%种子液,于30℃、180rpm摇瓶振荡培养40h,生物量可达到0.945.

一株解烃菌TY12的分离及其特性研究

本文以南充市炼油厂附近被石油污染获取的土壤作为研究材料,筛选分离获得一株对石油烃有降解性的疏水性烷烃降解菌TY12。经过16S rDNA的克隆测序和系统发育分析,初步确定该菌株为变形斑沙雷氏菌(Serratia proteamaculans),并从形态学、生理生化特性对发现的菌株TY12进行了进一步的研究和分析。同时用微生物粘着碳烃化合物法(MATH)研究得到TY12菌株的表面疏水性为52.2%,且表面疏水性会随着培养时间的增加,不断的减小。该菌能在以正十二烷为唯一碳源的无机盐培养基中生长,当在含有1%(W/V)正十二烷的无机盐培养基中接入1%种子液,28℃、摇床转速180 r/min的条件下震荡培养4 d,正十二烷降解率可达66.1%。其研究成果为石油污染土壤的生物修复提供了一定的依据。