结核分枝杆菌利福平耐药突变基因检测与BD960药敏的对比

目的分析对比结核分枝杆菌利福平PCR-反向点杂交法耐药基因突变位点检测和BACTEC MGIT960 System表型药敏结果的相关性。方法同时对220例住院患者的痰或肺泡灌洗液(BALF)用PCR-反向点杂交法检测利福平耐药基因突变位点与BACTEC MGIT 960 System检测利福平表型药敏结果进行对比分析。结果 2种方法检测利福平药敏结果符合205例,特异度93%(205/220);2种方法检测利福平都敏感的有172例;基因耐药,表型耐药的有33例,其中有3例检出rpo B基因H526位点突变,突变率9%;基因耐药,表型敏感的有15例,其中有11例均检出rpo B基因H526位点突变,突变率73%。结论 PCR-反向点杂交法检测具有快速高效、特异度高等特点,对临床诊断、治疗有指导意义。

高通量测序筛查特发性牙龈纤维瘤和正常牙龈外泌体miRNAs差异表达

目的利用高通量测序技术筛选出特发性牙龈纤维瘤病牙龈成纤维细胞(IGF-GFs)与正常个体牙龈成纤维细胞(N-GFs)分泌的外泌体中差异表达的miRNAs,通过生物信息学分析预测靶基因和相关信号通路,进而为研究特发性牙龈纤维瘤病的发病机制奠定基础。方法原代培养IGF-GFs和N-GFs,收集细胞培养上清提取外泌体;使用IlluminaHiSeq^(TM)2500测序平台对IGF-GFs和N-GFs来源外泌体中的miRNAs进行测序分析,使用Target Scan、miRDB、miRTar Base、miRWalk四款软件、KEGG数据库对部分表达差异显著的miRNAs进行靶基因预测和KEGG通路预测,并使用实时荧光定量PCR技术验证外泌体中差异性miRNAs的表达。结果 IGF-GFs和N-GFs来源的外泌体中miRNA分别占nc RNA中的0.74%、0.46%;高通量测序筛选出92个显著差异表达的miRNAs,挑选的12个miRNAs共预测出靶基因1304个以及多条信号通路,实时荧光定量PCR技术检测的3个miRNAs在IGF-GFs和N-GFs来源的外泌体中均有差异表达,且差异有统计学意义(P <0.05)。结论来源于IGF-GFs和N-GFs外泌体miRNAs存在着差异性表达,且测序结果可靠。差异表达的miRNAs在IGF发病中可能起重要调控作用,且这些miRNAs可能通过靶向相关靶基因的3’UTR或经由相关信号通路介导IGF的发生发展过程。

外泌体源性miRNA在纤维化疾病中的作用机制及其相关信号通路研究进展

纤维化是以细胞外基质异常增多或过度沉积为特征的病理过程,可导致器官、组织结构受损甚至器官衰竭。外泌体通过分泌蛋白质、脂质和核酸等生物信息进行细胞间通信,其携带的微小RNA(miRNA)在纤维化疾病中发挥重要作用。外泌体源性miRNA能够通过多种信号通路介导成纤维细胞增殖分化、间充质细胞转化及细胞凋亡,进而在纤维化疾病中发挥调控作用,有望成为纤维化疾病诊断的重要标志物和治疗的重要靶点。

特发性牙龈纤维瘤来源外泌体对正常牙龈细胞周期的影响

目的 探讨特发性牙龈纤维瘤成纤维细胞(IGF-GFs)来源的外泌体对正常牙龈成纤维细胞(N-GFs)细胞周期的影响。方法 培养IGF-GFs和N-GFs,收集培养IGF-GFs的上清并提取外泌体;通过流式细胞术检测IGF-GFs外泌体与N-GFs共培养24h、48h的细胞周期变化,以及通过蛋白免疫印迹技术检测cyclinE1和CDK2蛋白的表达变化。结果 IGF-GFs来源外泌体处理N-GFs24h和48h后S期细胞比例明显升高(P<0.01)。蛋白免疫印迹结果显示IGF-GFs来源外泌体与NC-GFs共培养后,在24h和48hcyclinE1和CDK2蛋白相对表达量增加,蛋白表达差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 IGF-GFs来源的外泌体可能通过调节cyclingE1和CDK2蛋白的表达,促使N-GFs细胞周期由G1期向S期转换,实现细胞周期进展,促进细胞的增殖。