基于碳水化合物的佐剂作用机制研究进展

佐剂是指添加到疫苗中以刺激和增强免疫应答强度或改变免疫应答类型的物质。目前疫苗佐剂种类较多,包括铝佐剂、油乳佐剂和脂质体佐剂等,但临床使用的佐剂很少同时具备高效和低毒两大特点,因此迫切需要一种有效且安全的佐剂。基于碳水化合物的佐剂具有良好的生物相容性和易代谢的优点,同时,基于碳水化合物的佐剂种类广泛,且每种都有不同免疫特性,如基于多糖的佐剂可以增强巨噬细胞的吞噬活性及抗原提呈能力等。并且基于碳水化合物的佐剂还可与Toll样受体、C型凝集素受体等多种受体结合发挥上述免疫活性,但其作用机制尚不完全清楚。故本文基于碳水化合物的佐剂作用机制相关研究进展进行总结梳理,以期为相关佐剂的进一步研究提供参考。

禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达

采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷贝重组转化子及筛选His+Mut+表型转化子后 ,摇瓶培养 ,10mL/L甲醇诱导表达后 ,经SDS PAGE、Western blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明 ,获得了几株高效表达重组表达株 ,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。

野生岩羊金黄色葡萄球菌感染的诊断

采集发病的野生岩羊肝、脾等组织样品,进行病原分离鉴定。分离的细菌为革兰氏阳性成对或成堆排列的球菌。分离菌在普通琼脂上生长良好,放置2 d^3 d菌落由淡黄色变为黄色,在鲜血琼脂上培养14 h见到菌落周围呈β溶血,对小白鼠有致死作用,凝固酶试验为阳性,动物接种试验、PCR扩增和血清学试验未发现病毒感染。据此,确诊为金黄色葡萄球菌感染。

一起獭兔暴发巴氏杆菌病的诊治

一起獭兔暴发巴氏杆菌病的诊治冉多良，白莉，李建强，姚新奎（新疆八一农学院动医系，乌鲁木齐８３００５２）－、流行情况新疆八一农学院三坪农场笼养獭兔１０００余只，１９９４年１月中旬饲养员发现獭兔的死亡数由每天２～３只，增到３５只左右，部分死亡獭兔临死前无...

普氏野马肠毒血症的诊断与防治

从发病死亡的普氏野马无菌采集肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结和肠道内容物,在实验室进行病原分离与鉴定,在采集病料中未分离到病毒;在肝、脾、肾和肠涂片上发现大量有荚膜的G+大杆菌,涂片放置数小时后可观察到芽胞。在鲜血琼脂上分离到一株G+大杆菌,菌落周围呈β溶血环。在厌氧肉肝汤中增菌培养,分离到兼性厌氧的G+杆菌,有荚膜,有芽胞。取肠内容物加生理盐水稀释,离心取上清液,滤过除菌后分成两份;一份加热(100℃15 min),一份不加热,分别注射小鼠尾静脉,12 h后不加热组小鼠死亡,证明有毒素存在。另将滤液分成5份,分别加入A,B,C,D型魏氏梭菌抗毒素血清及生理盐水(对照),混合均匀后,在37℃下作用40 min,然后分别尾静脉注射小白鼠,每组4只,观察24 h。根据小白鼠死亡及存活结果,判定为D型魏氏梭菌。用该菌注射豚鼠可将其致死。根据临床症状和实验室检验结果,可确定该病为D型魏氏梭菌引起的普氏野马肠毒血症。

致病性大肠杆菌引起犊牛腹泻的诊治报告

致病性大肠杆菌引起犊牛腹泻的诊治报告冉多良，波拉提·哈布汗，魏新（新疆八一农学院畜牧分院，乌鲁木齐，８３００５２）１９８８年９月至１１月，新疆呼图壁奶牛场连续发生犊牛腹泻与死亡，经场兽医临床治疗，效果不佳，１０月中旬送病料到我院。现将我们的病原诊断和...

疣鼻天鹅金黄色萄葡球菌病的诊断

(一)发病情况 乌鲁木齐市动物园养了3只疣鼻天鹅,在室内与黑鹳、白鹭、苍鹭混放,供游人观赏。所用饲料为鸡混合料加羊肉条和鱼头,饮自来水。每周用3％来苏儿对室内消毒一次。1988年元月12日,有1只疣鼻天鹅突然发病,表现精神萎糜,呆立、不食。在天鹅发病的前几天,兽医人员发现苍鹭的翅膀有伤口,鲜血外流,污染了天鹅的尾部和嘴部。 动物园兽医将病天鹅喂养在隔离室进行治疗和观察。开始治疗时用庆大霉素、痢特灵和TMP,四天后病情好转,停止用药。到元月27日天鹅出现跛行,病情加重,2月1日死亡。 (二)临床症状 病天鹅表现精神沉郁,走路不稳、跛行、喜卧、喜光、有时呆立不动,翅膀下垂,羽毛松乱,食欲停止,排黄绿色水样粪便。

H5亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及在原核细胞中的表达

以RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒A/DKZJ/12/00(H5N1)中获得禽流感病毒NS1的部分基因,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-32a,将测序和酶切验证正确的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,蛋白质电泳表明该蛋白得到了可溶性的表达,表达蛋白的分子量27 kD;Western-blot分析表明,该蛋白可以与禽流感H5阳性血清反应,具有良好的免疫原性。

鸡新城疫疫苗点眼诱发鸡绿脓杆菌眼炎的诊治

鸡新城疫疫苗点眼诱发鸡绿脓杆菌眼炎的诊治冉多良，魏新，朱瑞琪（新疆八一农学院动医系，乌鲁木齐，８３００５２）（乌鲁木齐市科技交流中心）１流行情况博尔塔拉蒙古自治州某兽医站鸡场，新购进２０００余只罗曼肉鸡，于１０日龄用鸡新城疫巨系疫苗点眼，２天后有１０...

伪狂犬病病毒DNA核酸提取方法研究

利用ＴＥ液（ｐＨ７．６）对伪狂犬病病毒ＤＮＡ核酸用酚－氯仿抽提后进行透析，获得较完整的ＤＮＡ核酸，将获得的伪狂犬病病毒ＤＮＡ核酸经凝胶电泳后表明，用此法获得的ＤＮＡ核酸较用乙醇沉淀法所获得的核酸片段完整，产量高，可用于基因分析和诊断研究。

PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法。敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性。表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立

根据猪流感病毒(SIV)M基因的保守序列,设计并合成一对特异性引物和TaqManMGB探针,建立了SIVM基因实时荧光定量PCR检测方法。使用含有M基因的重组质粒pMD-M作为标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999,检测结果表明:该方法的敏感性可达到1个EID50,组间与组内重复试验变异系数分别为0.21%和0.65%,除SIV外,其他5种猪病病毒检测均为阴性,样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均达到100%,该方法特异性强、重复性好,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的定量检测方法。

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

新源县孕马蠕虫体内滞留情况调查

【目的】调查新疆新源县驱虫后的孕马体内蠕虫滞留情况。【方法】采集样品253份,采用虫卵漂浮法和EPG检查法。【结果】孕马总感染率为98.8%,主要感染的虫体有马圆线虫、马副蛔虫、球虫、类圆线虫,感染率分别为90.9%、66.4%、83.4%、20.6%。感染强度(EPG)的检查圆线虫平均466个/g;马副蛔虫平均255个/g,球虫平均312个/g,类圆线虫平均94个/g。【结论】调查数据可为地方孕马寄生虫病的防治及马产业的健康发展提供参考。

鹅细小病毒分离株HG5/82的分子特征分析

本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应序列比较。结果表明:HG5/82 株非结构蛋白(Non structure, NS)基因长为1884bp,编码627个氨基酸。HG5/82株结构蛋白基因长为2199bp,编码732个氨基酸。序列分析结果表明,我国地方分离株与国内外鹅细小病毒相比,ns基因、vp基因均表现出较高的同源性,并且具有共同的分子特征。为进一步研究GPV的基因功能、遗传变化规律及病毒分子致病机理提供了一定的分子基础。结构基因 VP3 间变异较小,这是目前GPV只有一个血清型的分子基础,为基因工程苗的研制提供了可行性。HG5/82 与番鸭细小病毒相应序列比较发现,与细小病毒其它成员相比两者具有较近的亲源关系,但这种同源性明显低于鹅细小病毒之间的同源性。

2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析

2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h～78.4h和1.51～2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%～99.7%和79.8%～100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。

鹅细小病毒vp2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备

根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收目的片断,进行定向连接,产物转化入感受态DH5α,重组质粒经酶切和测序证实目的基因正确克隆到表达载体的预期位点且插入方向正确,构建了含有HG5/82主要结构基因vp25’端969bp片段的原核表达载体。经IPTG诱导后表达出与预期大小相符的约36kDa的融合蛋白,表达形式为包涵体。薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.4%。包涵体通过6mol/L盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化,用纯化的分子量为36kDa的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅细小病毒部分结构蛋白多克隆抗体。Westernblot分析表明该多克隆抗体与HG5/82毒株具有反应性,说明该融合蛋白具有抗原性。