聚合酶链式反应(PCR)量热学的实验研究

聚合酶链式反应(PCR)是一种人工体外扩增特异DNA片段的技术。PCR反应的三个过程都是热过程。本文首次利用差式扫描量热仪(DSC)模拟PCR反应。试验表明PCR反应变性过程是吸热过程;退火和延伸过程是放热过程;并且获得了这些过程的量热学数据。这些研究结果对分析和判断PCR临床检验的假阴性是有用的。

聚合酶链式反应变性及退火温度与产物假阴性之间的关系

目的探讨聚合酶链式反应(PCR)变性及退火温度与产物假阴性之间的关系。方法以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行PCR扩增,人为改变PCR循环的变性或退火温度,探讨其与产物假阴性之间的关系。结果随着变性温度的降低和退火温度的升高,PCR扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度降低至85℃及85℃以下,退火温度升高至72℃时,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论过低的变性温度和过高的退火温度会导致PCR产物出现假阴性。

聚合酶链式反应变性温度与产物假阴性的研究

背景:虽然聚合酶链反应方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速的特点,但同时也发现用聚合酶链反应技术进行生物化学实验和医学检验时,经常会出现假阴性的现象。目的:探讨聚合酶链反应变性温度与产物假阴性关系。设计、时间及地点:观察实验,于2008-03在吉林大学第二医院中心实验室完成。材料:重组质粒pUC-19(含有HBV完整基因组)和大肠杆菌JM109由吉林大学第二医院中心实验室提供。质粒DNA小量抽提试剂盒购自爱思进AXYGEN生物技术(杭州)公司。方法:以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行聚合酶链反应扩增,人为改变聚合酶链反应循环变性温度,观察其对聚合酶链反应扩增结果的影响。主要观察指标:以不加模板的反应体系为阴性对照,以加2倍于正常反应体系的模板反应体系为阳性对照,肉眼在紫外灯下观察不到产物判为阴性。结果:随着变性温度的降低,聚合酶链反应扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度低至85℃及85℃以下,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论:较低的变性温度可导致扩增效率降低甚至假阴性的结果。

对工科学生医学基础教育探讨

上海理工大学医疗器械与食品学院生物医学工程专业主要培养具备医学电子仪器和精密医疗器械的设计、研制、开发应用,医疗器械质量检测和监管等综合能力的理工结合的复合型高等工程技术应用性人才。学生主要学习电子学、机械学、光学、计算机、医学等基础理论知识及医学电子仪器和精密医疗器械的系统设计和风险评价方法。接受现代医学仪器和典型医疗器械应用的训练,能从事医学电子仪器、医疗器械开发设计和研制、医疗器械质量检测和技术监督管理等工作。医学基础理论知识包括:系统解剖学,生理学和医学课程,如医学入门,更好地了解实际使用的医疗器械的建立医学背景。对于工科学生,在一年多的时间学习这些基础医学课程,难度是存在的。结合以往的教学实践中,我们试图做出一系列的教学改革,在教学过程中,包括使用各种活跃的教学氛围的教学方法。改革生理学,临床实验教学,培养学生的学习兴趣和积极性。加强学生课后交流,教学效果良好。

森林脑炎纯化疫苗的研究

目的 制备森林脑炎纯化疫苗。方法 将森林脑炎病毒感染地鼠肾单层细胞，收获病毒液，经超滤浓缩、柱层析纯化病毒后配制而成。结果 疫苗兔疫保护力指数均≥1 .0 ×106，杂蛋白去除率≥99％，小牛血清蛋白去除率＞99％，所有检测项目全部合格。结论 该纯化工艺制备的森林脑炎纯化疫苗抗原含量高，热稳定性好，免疫原性强，各项检测结果均符合2000年版《中国生物制品规程》标准。

肾综合征出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗纯化方法的研究

目的 建立简便、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。方法 采用超滤浓缩、醋酸锌沉淀和柱层析（亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析）等方法，对出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗进行提纯对比试验。结果 用超滤浓缩和Sepharose 4FF凝胶柱层析或用醋酸锌沉淀和凝胶柱层析，纯化的疫苗均可达到质量标准，而用 cellufine sulfate gel亲和层析和离子交换层析均不理想。结论 建立了经济、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。

用DSC测定小鼠看家基因β-actin的PCR反应体系的比热

本实验用差示扫描量热技术,测量了不同反应循环数的以PCR内参小鼠看家基因β-actin为目的序列的扩增体系在30～94℃温度范围内的比热容。实验发现,在扩增的初期(3～15个循环),反应体系的比热随着循环数的增加,变化不大;在扩增的指数增长期(>20个循环)比热先降低后增加。同一循环,比热随着温度的增加而增加。未经过PCR扩增的反应体系的玻璃化转变温度为-15.29℃。

食品的高压冷冻冷藏原理及应用进展

在高压技术的基础上发展起来的高压冷冻冷藏技术,不仅很好地解决了不适合传统常压速冻冷藏的高水分易冻裂食品的保藏难题,也能够提高其它冻品的质量。本文在详细阐述高压水物理特性的基础上,分别重点介绍高压速冻、高压解冻和高压不冻冷藏食品的基本原理及其在食品保藏领域的最新应用进展,分析该技术推广面临的主要问题,并指出今后的研究方向。

双价肾综合征出血热纯化疫苗的研究

目的 研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热纯化疫苗 ,以提高疫苗质量及临床应用效果。方法 用金黄地鼠肾细胞培养的PS 6株 (Ⅰ型 )病毒和L99株 (Ⅱ型 )病毒以体积比 1∶1的比例配制成双价疫苗 ,经醋酸锌沉淀、超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析制备成双价纯化疫苗。结果 双价纯化疫苗经中国药品生物制品检定所检测 ,各项指标全部合格。疫苗于 37℃放置 2周和 4℃放置 3年 ,效力试验均合格。临床观察血清中和抗体阳转率大于 85 % ,仅出现 0 .5 %的轻反应。结论 研制的出血热双价纯化疫苗 ,各项质量指标均符合《双价肾综合征出血热纯化疫苗试行规程》的要求 。

聚合酶链式反应热流变化的DSC实验研究

在PCR每个循环中,目的基因在DNA聚合酶的催化作用下实现快速扩增,同时伴随着化学键的断裂和生成,而不同循环数的扩增效率不同,引起的热现象也不同。实验通过差示扫描量技术,以HBV为PCR扩增体系,分别研究了变性、退火和延伸阶段的热焓及其随循环数的变化,通过分析得出:变性阶段是放热过程,第17个循环放热量达到最大,退火和延伸阶段是吸热过程;3个阶段的热焓随循环数增加都发生明显的变化,其中变性阶段的热流变化最关键。

不同条件对腮腺炎减毒活疫苗生产影响的研究

目的:研究毒种感染剂量(MOI)及维持液中小牛血清浓度对腮腺炎减毒活疫苗生产的影响。方法:用不同的感染剂量制备腮腺炎减毒活疫苗,测定疫苗病毒滴度,观察毒种不同感染剂量对腮腺炎减毒活疫苗生产的影响。感染腮腺炎病毒时,加入含1%和2.5%小牛血清的细胞维持液,制备腮腺炎减毒活疫苗,测定病毒滴度,观察不同浓度小牛血清对腮腺炎减毒活疫苗生产的影响。结果:毒种的感染剂量为1!50、1!500、1!5000时,制备的腮腺炎减毒活疫苗的病毒滴度分别为5.76、6.13、5.79LogCCID50/ml。用含1%和2.5%小牛血清的细胞维持液,制备出高滴度腮腺炎减毒活疫苗分别为12.33%和30.99%。结论:毒种的感染剂量为1!500时,制备的腮腺炎减毒活疫苗的病毒滴度最高。提高细胞维持液中小牛血清的浓度,可以提高腮腺炎减毒活疫苗的病毒滴度。

少肌症最新研究进展

随着我国步入老龄化社会，社会老龄化引起的多种增龄性疾病日益成为社会关注的焦点。目前，国内外对骨质疏松的研究不断深入，而作为其诱发因素的少肌症尚未受到足够重视。如何面对老龄化对骨骼肌的影响，全面认识并充分研究少肌症及其防治手段有着重要的社会意义。本文对近年来少肌症临床表现、发病机制、检测与诊断以及预防与治疗进展进行全面综述。

医学影像学教学思路与模式改革的思考

医学影像学是理论与实践结合性很强的医学学科,在疾病的诊断及治疗中发挥着重要作用,随着临床学科诊疗技术的提高及影像学科设备与技术的快速发展,临床对医学影像提出了越来越高的要求。但传统教学内容、方式、思路与模式已不能完全适应和满足当前医学影像学的教学发展要求。该文就医学影像学教学现状针对创新教学思路、充分利用数字化及信息化教学手段,以及改善师资结构等方面进行思考与阐述,以提高目前医学影像学教学水平。

基于美国高加索人群瘦体重的全基因组关联研究

为了寻找与瘦体重相关的单核苷酸多态性(SNP)位点及易感基因,在2283名不相关的美国高加索人群中对瘦体重指数(LMI)进行全基因组关联分析(GWAS),并在1000名不相关的美国高加索人群中验证,将研究结果与验证结果进行荟萃分析。研究发现,位于19p13.3区域的UQCR,MBD3和TCF3基因与LMI相关联。UQCR基因上rs8697(合并p=4.94×10^−3)和rs56122285(合并p=2.59×10^−3)具有eQTL效应,MBD3基因上rs8110543(合并p=6.88×10^−3)和rs7252741(合并p=1.22×10^−2)具有eQTL效应,DB得分分别为1b和1f。本研究进一步证实了UQCR,MBD3和TCF3基因在瘦体重变异中的作用,对肌少症的认识提供新的理论依据。

全基因组关联分析显示基因ANXA8和C10orf11为影响肌少症的候选基因

为了寻找与瘦体重(lean body mass,LBM)相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点及易感基因,在1 000个不相关的白人中采用Affymetix 500K芯片扫描了500 000个SNPs,并进行全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS),显著结果在1 625个中国人样本和2 283个欧洲白人样本中进行验证,并将验证结果与研究结果进行荟萃分析。研究发现SNPsrs7905603,rs9416083,rs4409772,rs2894310与LBM关联,其中rs7905603位于基因ANXA8,其他3个SNPs位于基因C10orf11。荟萃分析得到的合并p值分别为2.08×10^-5,7.44×10^-6,6.73×10^-6,6.76×10^-6。ANXA8和C10orf11基因是影响LBM变异的候选基因,这对肌少症的认识提供了新的理论依据。

探讨高分辨薄层CT用于早期肺腺癌诊断筛查中的效果

目的探讨高分辨薄层CT用于早期肺腺癌诊断筛查中的效果。方法方便选择2017年1月—2019年8月经该院病理学确诊治疗的早期肺腺癌患者70例作为对象,随机数字表分为对照组(n=35)和观察组(n=35)。对照组给予常规CT检查,观察组给予高分辨薄层CT检查,比较两组不同CT扫描方式下肿瘤征象显示率,图像质量以及诊出率。结果观察组中棘突征检出率为85.71%,对照组为57.14%(χ^2=6.396)、观察组中毛刺征为71.43%,对照组为51.43%(χ^2=5.786)、观察组中钙化征为45.71%,对照组为11.43%(χ^2=4.935)、观察组中血管集束征为74.29%,对照组为48.57%(χ^2=7.972)、观察组中分叶征为85.71%,对照组为60.00%(χ^2=4.997)、观察组中空泡征为28.57%,对照组为8.57%(χ^2=8.016)、观察组中胸膜凹陷征为77.14%,对照组为45.71%(χ^2=6.472)。观察组中对于棘突征、毛刺征、钙化征、血管集束征、分叶征、空泡征、胸膜凹陷征等显示率均高于对照组(P<0.05)。观察组的图像总优良率为94.28%,对照组的总优良率为77.14%,观察组的图像总优良率明显高于对照组(χ^2=7.371,P<0.05);参照病理学检测结果,观察组的诊出率为97.14%,对照组的诊出率为71.43%,观察组的诊出率明显高于对照组(χ^2=6.827,P<0.05)。结论将高分辨薄层CT用于早期肺腺癌诊断筛查中,可以清晰看到肿瘤,病灶区内部结构等特征,提高CT的成像质量,提高诊出率。

基于改进的SVR-GRNN风暴潮灾害损失组合评估模型

风暴潮灾害是制约我国海洋开发和海洋经济发展的重要因素,也是海洋预防的重点难点问题。在风暴潮灾害损失评估这一领域,对组合评估模型的研究较少。以浙江省为例,整理收集了1990—2020年间记录完整的29个风暴潮历史灾情数据,利用麻雀搜索算法(Sparrow Search Algorithm,SSA)分别对支持向量回归(Support Vector Regression,SVR)和广义回归神经网络(Generalized Regression Neural Network,GRNN)进行模型优化改进,得到的直接经济损失拟合结果R^(2)值分别为0.8473和0.8828,将改进后的SVR和GRNN建立组合模型,用于风暴潮灾害损失评估,R^(2)提高为0.9190。结果表明:组合模型的评估精度优于单一模型,是一种适用于风暴潮灾害损失评估的高精度、稳定性方法。

CT MRI对胰腺囊性病变的诊断价值分析

目的探讨CT及MRI对胰腺囊性病变的临床诊断价值。方法选择我院2016年9月—2019年6月收治的45例胰腺囊性病变患者作为研究对象,均行CT和MRI检查,对比分析两种检查方式的诊断正确率、检查时间。结果两种检查方式在对胰腺囊性病变的诊断正确率上差别不大(P>0.05);CT检查所用的时间要少于MRI检查,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论CT及MRI对胰腺囊性病变的诊断正确率相仿,但各具特点,可以根据患者的实际情况选择不同的检查方法,必要时联合应用,以进一步提高确诊率。

引物末端不同碱基对聚合酶链反应产物影响

目的探索引物末端3′端不同碱基对聚合酶链反应产物的影响。方法以含有乙肝病毒(HBV)完整基因组的重组质粒pUC-19为模板,利用3′端碱基分别为A,T,C,G的下游引物,在相同的上游引物和退火温度下进行聚合酶链反应。结果不同的反应体系在相同退火温度下目的产物和引物二聚体形成不同;A表示上游引物,P表示下游引物;下游引物共计4条,分别用P1、P2、P3、P4表示,其3′端碱基分别为T,G,A,C。上下游引物共4对,分别用AP1、AP2、AP3、AP4表示;退火温度为50℃时,AP1和AP4有明显的扩增产物,AP3扩增产物稍少,AP2产物肉眼观察不到,有非特异性产物生成;退火温度升至55℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4少量扩增产物,P3产物肉眼观察不到,AP1和AP4反应体系引物二聚体生成情况基本相同,AP2和AP3引物二聚体生成较少;退火温度升至62℃时,AP1和AP2有明显的扩增产物,AP4扩增产物稍少,AP3产物肉眼观察不到,可观察到引物二聚体生成稍多。结论3′端不同碱基对聚合酶链反应产物有很大影响。

金属氧化物组合改性活性焦脱硝性能的研究

采用浸渍法改性活性焦,实验分析了不同氧化物组合对活性焦改性后的脱硝性能影响。在实验中,用于改性的氧化物分三组:CuO和Fe2O3,CuO和CeO2,CuO和Cr2O3。结果表明:金属氧化物组合改性活性焦的脱硝性能明显高于单一氧化物改性活性焦。在150℃反应温度下,CuO和Fe2O3组合改性活性焦脱硝率为96%。