JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢的影响

目的探讨JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢相关基因的影响。方法构建JAZF1小发夹RNA(shRNA)表达载体并转染3T3-L1细胞,实时荧光定量PCR(RT-QPCR)和蛋白印迹法检测JAZF1 mRNA和蛋白水平的表达;氢三放射示踪法检测3T3-L1细胞糖摄取率;蛋白印记法检测糖、脂代谢相关基因蛋白水平;油红O染色检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量变化。结果成功构建JAZF1-shRNA;转染脂肪细胞48 h后,JAZF1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组(P<0.05);氢3放射性示踪法显示转染组葡萄糖摄取率明显降低(P<0.05);PPAR-γ蛋白表达升高(P<0.05),激素敏感脂肪酶(HSL)、内脏脂肪素(Visfatin)、胰岛素诱导基因-2(Insig-2)蛋白表达降低(均P<0.05);油红O染色显示JAZFl转染组细胞内脂质积聚明显,比对照组升高约25%(P<0.05)。结论 JAZF1基因抑制可减少基础糖转运,增加脂质与胆固醇合成,减少脂质分解并减少相关脂肪细胞因子的表达。

KLF14基因过表达对改善Hepa1-6小鼠肝癌细胞胰岛素抵抗的作用

目的探讨KLF14基因过表达对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胰岛素抵抗的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-QPCR)检测KLF14基因m RNA在健康C57BL/6J小鼠各组织的表达分布情况;构建小鼠KLF14基因重组真核表达质粒p IRES2-EGFP-KLF14并转染Hepa1-6细胞,RT-PCR法检测KLF14基因m RNA的表达;Western印迹检测KLF14及p-AKT蛋白水平的表达。结果成功构建p IRES2-EGFP-KLF14质粒;转染肝癌细胞48 h后,KLF14 m RNA和蛋白水平明显高于对照组和空载组(P<0.01);转录水平上KLF14基因在小鼠体内普遍表达,其m RNA相对表达量由高到低依次为心脏、骨骼肌、肝脏、脂肪、小肠、肾脏、脑、肺、胃、脾、附睾;非转染组给予血清干预后,正常人血清处理组和糖尿病病人血清处理组无明显差异;而转染组给予血清干预后,糖尿病病人血清处理组p-AKT表达量较正常人血清处理组明显增加;在胰岛素刺激情况下,无论转染组或非转染组,给予PI3K抑制剂LY294002后,p-AKT表达受抑。结论 KLF14在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中发挥一定作用;KLF14基因过表达可促进AKT的活化,并且其增加胰岛素敏感性的作用在糖尿病状态下较正常人更为明显。

医学检验的伦理审视与伦理构建

医学检验是临床治疗中医生常用的检验手段,主要是指通过现代的化学以及物理手段和方法进行诊断的学科。[1]医学检验处于医疗活动的最基础链条,为医生的医疗医疗判断和检查提供诊疗依据,直接服务于病人,为医疗、教学和科研提供基本的数据支撑和服务。伴随着医疗事业发展的标准化和信息化,医学检验伦理作为医学伦理的一个重要范畴越来越受到重视。

JAZF1基因对3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK信号途径的影响

目的探讨JAZFl（juxtaposed with another zinc finger gene 1）基因对333一L1脂肪细胞蛋白激酶B（Akt）和AMP活化的蛋白激酶（AMPK）信号通路的影响。方法构建pGenesil—JAZFlshRNA重组质粒，转染3T3．L1脂肪细胞后分别用胰岛素或利拉鲁肽处理细胞。2．脱氧-^3H—D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取，Western印迹法检测各组细胞Akt和AMPK的磷酸化水平。结果成功构建的pGenesil-JAZFlshRNA重组载体转染333-L1脂肪细胞后下调JAZF1表达，使基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取降低33．6％和38．8％（均P〈0．05）。胰岛素或利拉鲁肽增加333-L1脂肪细胞Akt和AMPK磷酸化水平（均P〈0．05），JAZF1表达下调降低基础和2种激素刺激的Akt和AMPK活性（均P〈0．05）。结论JAZF1基因可能通过Akt和AMPK信号通路改善糖代谢。

成纤维细胞生长因子21表达下调对ApoE-/-小鼠肝糖异生相关基因及JAK2／STAT3信号转导通路的影响

目的探讨成纤维细胞生长冈子21（FGF-21）基因表达下调对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠肝脏糖异生相关基因表达的影响及其可能的分子机制。方法24只鼠龄8周的雄性ApoE。小鼠随机分为普食对照组（Nc组，n=6），普食＋pAd—shFGF-21组（NF组，n=6），高脂对照组（HC，n=6）和高脂＋pAd—swGF-21组（HF，n=6），各组小鼠均喂养16周。NC、HC组于15周末尾静脉注射Ad—shGFP空载腺病毒（浓度：1×^9／100μl／鼠），NF、HF组注射pad—shFGF-21重组腺病毒（浓度1×^9／100μl／鼠）。16周后取小鼠血浆和肝脏样本，测定空腹血糖、血浆胰岛素（Pins）和血脂水平；采用荧光定量PCR和Western印迹方法检测各组小鼠肝脏组织糖异生相关基因及JAK2／STA33信号通路mRNA和蛋白水平的变化。结果NF和HF组的空腹血糖、血浆胰岛素（Pins）、甘油三酯、总胆同醇及低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）水平均显著高于NC和HC组（P〈0．05或P〈O．01），而高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）水平显著下降（P〈0．05或P〈0．01）．．在普食与高脂饮食喂养条件下，FGF-21抑制组与相应对照组相比肝脏FGF-21mRNA水平分别降低76．6％和40．9％（均P〈0．05）；蛋白表达水平分别降低67．8％和49．6％（均P〈O．05）；B—klotho、FGFRI和FGFR3mRNA水平显著降低（均P〈O．05），糖异生相关基因葡萄糖-6-磷酸酶（G6pase）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）mRNA和蛋白表达水平较对照组明显升高（P〈0．05），肝脏中SOCS3表达水平降低（P〈0．05）和磷酸化的STAT3、SOCS3蛋白表达量降低（P〈0．05）。结论FGF-21抑制ApoE。小鼠糖异生相关基因表达：其调控机制可能与JAK2／STAT3信号通路相关。

KLF14过表达促进肝细胞糖摄取的机制研究

目的观察Kruppel样因子14（KLFl4）基因过表达对肝细胞胰岛素信号通路以及AMP活化的蛋白激酶（AMPK）关键信号分子的影响，探讨KLFl4影响糖代谢的分子机制。方法建立KLFl4过表达的Hepal-6肝癌细胞模型，分为空载组、胰岛素组、KLFl4转染组和胰岛素＋KLFl4处理组，采用[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法检测肝癌细胞对葡萄糖的摄取率。以Western印迹检测KLFl4过表达对胰岛素信号通路中各信号分子的磷酸化水平及磷酸烯醇式丙酮酸激酶（PEPCK）蛋白表达的影响。结果胰岛素处理Hepal-6细胞后，KLFl4转染组与未转染组相比，葡萄糖摄取率明显升高（P〈0．01）；胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物（IRS）1、蛋白激酶B（Akt）、AMPK、CREB转录共激活因子2（TORC2）的磷酸化水平均明显增加（P〈0．01）；而且，糖原合成酶激酶3B的磷酸化水平亦明显增加，而PEPCK的蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论KLFl4过表达可能通过活化胰岛素InsR／IRS／Akt经典通路，从而改善肝细胞的胰岛素抵抗，且可能通过AMPK／TORC2／PEPcK信号通路抑制肝糖异生，并促进糖摄取和肝糖原的合成，从而改善糖代谢。