基于P53/Bax/Caspase3信号通路的石萆汤对少弱精子症大鼠的疗效机制研究

目的通过观察石萆汤干预CTX诱导的少弱精子症大鼠模型的治疗效果,分析其对生精细胞凋亡及P53/Bax/Caspase3信号通路的蛋白表达的影响。方法采用复制CTX诱导的少弱精子症大鼠模型,通过给予石萆汤干预,观察了大鼠体重变化和精子质量。研究还采用了HE染色、TUNEL染色法、免疫组织化学法、qPCR法以及Western blotting法来评估睾丸组织的形态学和分子生物学特征。结果(1)精子质量:与正常对照组相比较,模型组的精子密度、精子活力均下降(P<0.05),精子活率低于正常对照组,但不具有差异(P>0.05);而与模型组相比,石萆汤中、低剂量组的精子密度显著高于模型组(P<0.05),但活力与活率与模型组无差异(P>0.05)。(2)HE染色:正常组大鼠睾丸组织中可见各级生精细胞排列整齐,形态规则,染色均匀,生精小管管腔饱满,存在较多精子细胞。与对照组相比,模型组小鼠生精细胞排列不整齐,层次减少,精子细胞明显减少。与模型组相比,石萆汤组的上述病理状态有所改善,生精细胞形态及排列较为正常,与正常组接近。(3)TUNEL染色:正常对照组大鼠睾丸组织形态正常、排列整齐,仅有少量凋亡细胞;与正常组比较,模型组大鼠细胞凋亡数量明显增多(P<0.05);与模型组相比,石萆汤高、低剂量组细胞凋亡数有下降的趋势,但不具有差异性(P>0.05);石萆汤中剂量组细胞凋亡数降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)免疫组化:在模型组中,细胞质中P53、Bax、Cytc的表达增多(P<0.05),而石萆汤处理组中这些蛋白的表达相对减少(P<0.05)。(5)qPCR:与正常对照组比较,模型组大鼠p53、Bax mRNA含量升高(P<0.05),而Bcl-2 mRNA含量降低(P<0.05)。与模型组比较,石萆汤组Bax mRNA含量明显降低(P<0.05),而p53、Bcl-2 mRNA含量降低(P<0.05);(6)Western Blot法:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸组织的P53、Bax、Cytc、Apaf-1、Pro-caspase-9、Cleaved-caspase-9、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3蛋白质相对表达量显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白质表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,石萆汤组的P53、Bax、Cytc、Apaf-1、Pro-caspase-9、Cleaved-caspase-9、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3蛋白质相对表达量明显减少(P<0.05),Bcl-2蛋白质表达显著增高(P<0.05);结论石萆汤对CTX诱导的少弱精子症大鼠的精子质量有改善作用,其机制可能与P53/Bax/Caspase-3信号通路蛋白的表达有关。这一研究为深入理解石萆汤在治疗少弱精子症中的作用机制提供了实验证据。

泰山磐石散对流产模型大鼠血清性激素水平的影响

目的观察泰山磐石散对流产模型大鼠血清中黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)表达的影响,进一步探讨泰山磐石散保胎的作用机制。方法将15只雄鼠和15只雌鼠按1∶1的比例合笼过夜配种,随后将15只雌鼠随机分为正常对照组、模型组和泰山磐石散组各5只。妊娠第1~11天,正常对照组和模型组孕鼠予灌服生理盐水,泰山磐石散组灌服泰山磐石散汤剂;妊娠第6~8天,正常对照组孕鼠皮下注射75%乙醇溶液,模型组和泰山磐石散组皮下注射溴隐亭溶液;于妊娠的第12天观察各组大鼠子宫内胚胎发育情况并计算胚胎吸收率,ELISA法检测各组大鼠血清中LH、PRL、T、FSH的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组孕鼠血清中LH、PRL、T和FSH浓度均明显升高(P<0.05);与模型组比较,泰山磐石散组孕鼠血清中LH、T和FSH浓度明显降低(P<0.05)。结论泰山磐石散治疗流产模型大鼠主要通过降低LH、T、FSH的表达水平,改善孕鼠的性激素水平,最终达到降低流产风险,改善妊娠结局的作用。

泰山磐石散对流产模型大鼠母胎界面NF-κB、IL-1β、TNF-α表达情况的影响

目的:观察泰山磐石散对流产模型大鼠母胎界面中核因子κB(NF-κB)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平的影响,探讨泰山磐石散防治自然流产的机制。方法:将30只雌性SD大鼠按1﹕1比例和雄性SD大鼠合笼过夜配种,随机平均分为正常组、模型组和治疗组,于妊娠的第12天取各组孕鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测3组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1β、TNF-α的蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1β、TNF-α的表达水平均显著升高(P<0.01);治疗组大鼠母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1β、TNF-α的表达水平显著低于模型组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:与模型组相比,经泰山磐石散治疗后母胎界面子宫侧蜕膜组织NF-κB、IL-1β和TNF-α的表达水平显著降低。提示泰山磐石散能够有效防治自然流产(spontaneous abortion,SA),可能是通过抑制NF-κB的活化、降低促炎细胞因子的合成和释放实现的。

基于Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜的影响

目的 探讨泰山磐石散对流产大鼠子宫蜕膜组织Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将18只SPF级受孕后的SD大鼠分成空白对照组、模型组和治疗组,每组各6只。模型组和治疗组于妊娠第6~8天予皮下注射溴隐亭溶液建立流产模型;妊娠第1~11天,治疗组予泰山磐石散药液灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。于妊娠第12天取子宫。观察3组大鼠死胎个数及胚胎总数,并计算出胚胎吸收率;HE染色法观察大鼠母胎界面蜕膜组织形态学变化,RT-PCR和免疫组化法分别检测各组大鼠母胎界面蜕膜组织中Keap1、Nrf2和HO-1基因水平和蛋白表达。结果 与空白对照组比较,模型组大鼠胚胎吸收率明显提高(P<0.01),蜕膜组织中Keap1基因水平及蛋白表达明显提高(P<0.05,P<0.01),Nrf2和HO-1基因水平及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠蜕膜组织中Keap1基因水平明显降低(P<0.01),Nrf2和HO-1基因水平明显提高(P<0.01),HO-1蛋白表达明显提高(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组蜕膜组织中血管减少且扩张严重、蜕膜细胞排列紊乱;与模型组比较,治疗组大鼠蜕膜组织中血管丰富,血管扩张得到改善,细胞排列相对整齐。结论 泰山磐石散可能通过促进Keap1与Nrf2的解离以及激活Nrf2的转录,上调下游HO-1的表达,降低蜕膜组织的氧化应激水平,减少胚胎的氧化损伤,从而起到保胎的作用。

石萆汤对环磷酰胺干预后大鼠精子DNA碎片率及性激素的影响

目的研究石萆汤对环磷酰胺干预后大鼠精子的DNA碎片率及性激素的影响。方法随机选取8只大鼠为正常组,其余32只大鼠为造模组,造模组连续14 d腹腔注射环磷酰胺(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))制备大鼠少弱精子症模型,然后将造模组随机分为模型组、石萆汤低、中、高剂量(6.5625 g/kg、13.125 g/kg、26.25 g/kg)组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,石萆汤低、中、高剂量组分别给予相对应的中药剂量灌胃,中药干预35 d后,采用流式细胞仪检测大鼠精子DNA碎片率(DFI);酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)、雌激素(E_(2))的水平。结果与正常组比,模型组大鼠精子DFI显著增高(P<0.01);与模型组相比,治疗后石萆汤低、中、高剂量组的大鼠精子DFI显著下降(P<0.01);血清性激素水平检测结果显示,模型组T、FSH和LH含量显著降低(P<0.01);E2和PRL含量显著升高(P<0.01);石萆汤低、中、高剂量组均能改善大鼠血清性激素水平,以中剂量最为明显,尤其是提高T的水平(P<0.01)。结论石萆汤能平衡环磷酰胺干预后大鼠的性激素水平,降低大鼠的精子DFI,为临床研究提供实验依据和基础。

基于“谱效”关系探究石萆汤治疗少弱精子症的药效机制

目的拟揭示少弱精子症验方石萆汤“特征峰成分药效”的谱效关系和药效物质基础。方法采用大鼠实验,其中石萆汤组以2倍人体等效剂量灌胃,空白对照组干预等体积生理盐水,持续给药7 d。使用UHPLC-QE-MS技术对石萆汤口服吸收后进入血液中的成分进行鉴定;通过网络药理学分析获得石萆汤的关键成分、关键靶点和富集通路;对关键入血成分与核心靶点分子予以对接,分析其“谱效”关系。结果在石萆汤中鉴定出异野樱素等41个化合物,并发现11个入血成分。石萆汤可能通过雌激素信号通路等通路来调节性激素水平,以及抗炎、抗氧化的作用,其中异野樱素、藏红花酸等6个成分可与核心靶点形成可视化分子对接。结论石萆汤可通过调节脂质代谢与内分泌失调治疗少弱精子症,其中异野樱素等黄酮类成分可能是石萆汤关键药效成分。