弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成基因缺失突变体的构建

目的:构建弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因的缺失突变株。方法:分别扩增目的基因的上、下游同源臂和卡那霉素抗性基因片段,利用重叠延伸PCR技术将这3个片段融合为打靶片段,电击转化M90T/pKD46感受态细胞,在λRed重组系统的作用下,通过同源重组将目的基因置换为卡那霉素抗性基因,之后在辅助质粒pCP20的作用下切除FRT位点之间的卡那霉素抗性基因,得到基因缺失突变体。结果与结论:分别构建了M90T株毒力相关膜蛋白复合物4个组成蛋白Apy、DnaK、ClpB、YdgA的基因缺失突变体,为进一步研究各基因的功能提供了突变体。

弗氏志贺菌5a型M90T株ClpB蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化

目的:构建弗氏志贺菌clpB基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达后,纯化带T7标签的ClpB蛋白。方法与结果:PCR扩增得到线性化表达载体pET24a与2574 bp的clpB基因片段,利用不依赖连接反应的克隆法(LIC)进行克隆,得到重组质粒pET-ClpB,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过一系列条件优化,确定可溶性表达条件为在30℃下、用1 mmol/L IPTG诱导2 h;利用抗T7单克隆抗体琼脂糖珠进行亲和纯化,得到了纯度很高的相对分子质量为95×103的ClpB-T7融合蛋白。结论:实现了ClpB-T7在大肠杆菌中的可溶性表达,并纯化获得了高纯度的融合蛋白。

蒙药三子汤对热应激小鼠特异性免疫的作用

为了研究蒙药三子汤对热应激小鼠的CD3+T/CD19+B细胞的作用,160只小鼠随机分4组:灌水组、热应激组、低剂量热应激组和高剂量热应激组,热应激后眼前房采血,流式细胞仪检测CD3+T/CD19+B细胞变化。结果:热应激0h的4组小鼠CD3+T/CD19+B细胞差异不显著;热应激组CD3+细胞2h、7d均显著低于灌药、灌水组(p<0.05);灌药组1h、2h、7d小鼠CD19+细胞量显著高于热应激、灌水组。表明三子汤可以维持热应激小鼠CD3+T细胞量无显著变化,并可显著提高CD19+B细胞量。

白藜芦醇研究进展及现状

白藜芦醇作为一种天然活性物质,因其具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌等生理功能,得到了广泛的关注和研究应用。随着生命科学技术的进展,白藜芦醇的生产技术也有一定的技术突破。本文就白藜芦醇的生理特性、生物系统表达及应用特性的最新进展进行了综述,并提出了白藜芦醇大规模合成生产的方向。

串联亲和纯化原核表达载体的构建

【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体,用于研究细菌中(生理状态或接近生理条件下的)蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列,分别可以在靶蛋白N端和C端融合Protein G和链亲和素结合肽(Streptavidin binding peptide,SBP)标签;以pUC18载体为骨架,去除原有的阻遏蛋白基因,构建组成型表达载体pNTAP和pCTAP。【结果】成功构建N端和C端标签表达载体pNTAP和pCTAP,它们在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)、肠出血性大肠杆菌O157:H7和痢疾杆菌福氏5型M90T菌株中都可以实现表达。【结论】本实验构建的两个串联亲和纯化表达载体可以在部分革兰氏阴性细菌中表达,为研究细菌内蛋白-蛋白相互作用及致病菌毒力蛋白的作用机制奠定了基础。

一副蒙药复方对急性冷应激小鼠非特异性免疫水平的影响

为了研究抗冷应激蒙药复方对急性冷应激小鼠非特异性免疫的影响,试验将昆明系小鼠随机分为冷应激组、阳性对照组、蒙药高剂量组、蒙药低剂量组,在6℃条件下冷应激0 h、2 h、24 h后从每组随机取8只小鼠称重,进行腹腔吞噬试验及脾脏自然杀伤(NK)细胞活性试验,并取胸腺、脾脏称重。结果表明:冷应激2 h、24 h,蒙药高剂量组小鼠胸腺指数极显著高于冷应激组(P<0.01);冷应激24 h,蒙药高、低剂量组小鼠脾脏指数略高于冷应激组(P>0.05);蒙药高、低剂量组小鼠吞噬指数和吞噬百分率在2,24小时均显著或极显著高于冷应激组(P<0.05或P<0.01);蒙药高、低剂量组NK细胞活性在2,24小时时均显著或极显著高于冷应激组(P<0.05或P<0.01)。说明蒙药复方可以提高6℃条件下急性冷应激小鼠的非特异性免疫水平。

乳果糖辅助治疗肝硬化的研究进展

乳果糖是由半乳糖和果糖合成的二糖,不能被小肠黏膜双糖酶分解。这种双糖能够刺激有益菌增殖,抑制致病菌的生长,同时它还能够降低血内毒素水平、预防肿瘤等。在临床上乳果糖主要用于治疗便秘以及肝性脑病。本文主要介绍了乳果糖对辅助治疗肝硬化的作用。

乳果糖的应用及生产技术研究进展

乳果糖是一种功能性低聚糖,具有易于被人体吸收、促进对矿物质的吸附、影响骨骼、降低血液中谷氨酸、降低胆固醇等生理功能,有广阔的应用前景。目前,商业化上主要采用化学异构法生产乳果糖。但由于化学异构法存在碱性催化剂的分离、反应副产物多、高能耗等问题,近年来一些学者开展了酶法转化乳糖合成乳果糖的研究。文章综述了乳果糖的基本性质及生产技术研究进展。

蒙药复方对冷应激小鼠和奶牛内分泌激素的影响

为了研究蒙药复方对冷应激小鼠和奶牛内分泌激素和血糖、血清蛋白、尿素氮的影响,进行以下实验:通过持续6℃冷应激小鼠0 h、2 h、24 h和每天1 h间歇性冷应激10 d、20 d建立急、慢性冷应激模型,以及冬季冷应激期的荷斯坦奶牛,测定各项指标。研究发现,①放射免疫测定小鼠E、ACTH、Cort、T3、T4,在急性冷应激期间均升高,在慢性冷应激期逐渐接近0 h水平,

蒙药希拉汤对热应激小鼠特异性免疫的影响

为了研究蒙药希拉汤对热应激小鼠的特异性免疫方面的影响,故用流式细胞术做该试验。研究结果:CD3+T细胞在受到热应激的影响后,其百分率降低,蒙药高低剂量组高于热应激组,低于饮水组,差异不显著(P】0.05),而热应激组与饮水组能达到显著差异(P【0.05)。CD19+B细胞受到热应激的影响,其百分率降低,蒙药高低剂量组与饮水组差异不显著。