沉默GOLPH3基因对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察特异性沉默高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将人胃癌SGC-7901细胞随机分为3组,A、B组分别转染LV-GOLPH3-RNAi-1、无义链,C组不转染。转染72h后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞GOLPH3、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)和m TOR。结果 A组细胞增殖的OD值较B、C组低,细胞凋亡率(2.70%±0.11%)高于B组(0.42%±0.02%)和C组(0.31%±0.02%),细胞GOLPH3、p-m TOR蛋白表达量较B、C组少,P均<0.05;B、C组间各指标比较,P均>0.05。结论沉默GOLPH3基因能抑制胃癌细胞增殖、促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与下调m TOR信号通路中关键因子p-m TOR表达有关。

三叶因子3和血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达及意义

目的观察三叶因子3(TFF3)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的表达,探讨TFF3、VEGF表达与胃癌发生、浸润、转移的关系。方法采用SP免疫组织化学方法检测30例正常胃黏膜组织、60例癌旁组织和60例胃癌组织中TFF3和VEGF的表达情况。结果正常胃黏膜组织→癌旁组织→胃癌组织中,TFF3蛋白阳性表达率呈逐渐升高趋势(3.3%、38.3%、58.3%,均P<0.05),TFF3的表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期、浆膜浸润深度有关(均P<0.05);VEGF蛋白阳性表达率表达亦呈逐渐升高趋势(0.0%、45.0%、68.3%,均P<0.05),VEGF的表达与肿瘤分化程度、浆膜浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(均P<0.05);TFF3的表达与VEGF呈正相关(rs=0.473,P=0.000)。结论 TFF3、VEGF可能参与了胃癌发生、发展、浸润及转移,可能是胃黏膜癌变过程中的早期分子事件。两者在胃癌的发生中起了协同作用,两者联合检测可作为胃癌的早期诊断和预测胃癌发生转移的重要指标。

慢病毒介导的GOLPH3基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过体外实验探讨沉默高尔基体磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)基因对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:将携带GOLPH3 shRNA的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,建立稳定沉默GOLPH3的细胞株LV-GOLPH3-RNAi,分别用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测GOLPH3mRNA和蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖力,Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移力和侵袭力。结果:稳定沉默GOLPH3的细胞株构建成功;GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-GOLPH3-RNAi组细胞的增殖力受到抑制(P<0.05),迁移力(56.7±1.5 vs 186.0±3.4、183.3±4.2,P<0.05)和侵袭力(33.5±3.0 vs 85.0±3.9、83.1±4.4,P<0.05)也明显受到抑制。结论:沉默GOLPH3基因的表达可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖力、迁移力和侵袭力,提示GOLPH3有可能成为潜在的肿瘤标志物和独立的预后因子。

美洲大蠊提取物对肝硬化门静脉高压症大鼠VEGF的影响

目的观察美洲大蠊提取物(APA)对门静脉高压症大鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法采用CCl4加乙醇制作大鼠门静脉高压症模型,造模及药物干预9周后用直接测压法测各组大鼠门静脉压力,同时用免疫组化法检测胃组织VEGF水平,并观察肝脏组织形态学改变。结果模型组门静脉压力较正常组明显升高(P<0.01);APA组及心得安组静脉压力较正常组也明显升高(P<0.01),但较模型组明显下降(P<0.01)。APA1、APA2组胃组织中VEGF的表达明显下降(P<0.01),且受损肝脏的病理形态明显改善。结论 APA不仅可以改善门静脉系统的高动力状态,其治疗效果优于心得安,而且还能降低胃组织中VEGF的表达和改善受损肝脏的病理形态,在肝硬化门静脉高压症治疗中的作用值得进一步研究。

三叶因子3和环氧合酶-2在胃癌组织中的表达

目的:检测三叶因子3(TFF3)和环氧合酶-2(COX-2)在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中的表达水平,探讨TFF3表达与胃癌发生的关系。方法:选取正常胃黏膜组织40例,癌旁组织和胃癌组织各60例,采用SP免疫组化方法检测各组标本中TFF3和COX-2的表达。结果:TFF3和COX-2在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中的表达呈逐渐降低趋势(P<0.05),TFF3和COX-2在胃癌中的异常表达与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05),TFF3在胃癌中的异常表达与肿瘤分化程度相关(P<0.05),Spearman相关分析显示两者的表达呈正相关(r=0.462,P<0.01)。结论:TFF3与COX-2的表达增加有可能参与胃癌的发生;两者在胃癌中表达上调有可能使细胞增殖与凋亡的失衡,从而导致胃癌的发生;TFF3与COX-2在胃癌中可能呈协同作用。

高尔基体磷蛋白3基因过表达对胃癌细胞增殖的影响

目的:观察高尔基体磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)基因过表达后胃癌细胞增殖的情况.方法:构建GOLPH3基因过表达重组慢病毒颗粒pGC-FU-GOLPH3-EGFP,用慢病毒法感染胃癌细胞株SGC-7901,利用荧光显微镜(Axiovert200)观察感染后细胞内EGFP表达的情况,利用流式细胞技术检测慢病毒的感染效率,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction)和蛋白质印迹(Western blot)技术分别在基因水平和蛋白水平检测GOLPH3在SGC-7901-GOLPH3组(感染pGC-FU-GOLPH3-EGFP质粒的SGC-7901)、SGC-7901-empty-vector组(感染pGC-FU-EGFP质粒的SGC-7901)和SGC-7901-blank组(未感染慢病毒的SGC-7901)的表达水平;以四唑蓝比色法(MTT)检测GOLPH3基因过表达后胃癌细胞增殖的情况;Western blot技术检测胃癌细胞SGC-7901稳转细胞株中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平.结果:建立了慢病毒感染率接近100%的胃癌细胞株SGC-7901,在体外能够长期稳定表达绿色荧光蛋白;SGC-7901-GOLPH3组GOLPH3mRNA和蛋白表达水平明显高于SGC-7901-e m p t y-v e c t o r组和S G C-7901-b l a n k组(均P<0.05);MTT法结果显示胃癌细胞GOLPH3基因过表达后,增殖能力明显增强,与SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组相比差别有统计学意义(均P<0.05);SGC-7901-GOLPH3组、SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组中mTOR总蛋白的表达无明显变化,而SGC-7901-GOLPH3组p-mTOR蛋白表达量较SGC-7901-empty-vector组和SGC-7901-blank组明显升高,与两对照组相比,上调GOLPH3能明显促进SGC-7901-GOLPH3组p-mTOR蛋白的表达(均P<0.05).结论:GOLPH3基因可能是通过上调mTOR信号通路中mTOR蛋白磷酸化水平来促进胃癌细胞增殖.

美洲大蠊提取物对肝硬化门静脉高压大鼠门静脉压力及巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的探讨美洲大蠊提取物(PAE)对门静脉高压大鼠门静脉压力及肝组织巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、PAE高剂量组(PAE1组)、PAE中剂量组(PAE2组)、PAE低剂量组(PAE3组)、心得安组,每组10只。除正常对照组外,其余各组采用四氯化碳综合法造模。自造模日起,正常对照组、模型组给予生理盐水灌胃,PAE1组、PAE2组、PAE3组按0.5、0.25、0.10 g/kg的剂量给予PAE灌胃,心得安组按0.18 mg/100 g的剂量给予普奈络尔灌胃,共8周。观察各组大鼠一般情况,干预结束后比较各组大鼠门静脉压力、肝组织的MIF蛋白及mRNA表达水平。结果模型组大鼠一般情况差于正常对照组,门静脉压力高于正常对照组,但各药物干预组均低于模型组,心得安组低于PAE2组、PAE3组(均P<0.05);PAE1组、PAE2组MIF蛋白及mRNA表达水平均低于模型组、PAE3组及心得安组(均P<0.05)。结论 PAE可以降低门静脉高压大鼠的门静脉压力,这可能与其降低MIF水平有关。

红背叶根对乙醇诱导的酒精性脂肪肝细胞模型的影响

目的研究红背叶根对乙醇诱导的酒精性脂肪肝细胞模型的影响。方法采用乙醇诱导建立酒精性脂肪肝的L02细胞模型,然后用不同水平红背叶根水提物处理该细胞模型(红背叶根组),设立对照组(未使用乙醇诱导的L02细胞)与模型组(80 mmol/L乙醇诱导的酒精性脂肪肝L02细胞模型)。检测各组细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果随着乙醇水平升高,L02细胞的存活率逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。红背叶根组中,随着红背叶根水提物水平逐渐降低,酒精性脂肪肝L02细胞模型中细胞存活率逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组酒精性脂肪肝L02细胞模型的细胞上清液中ALT、AST、GGT、MDA水平明显升高,SOD水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,红背叶根组3个水平下,酒精性脂肪肝L02细胞模型的细胞上清液中ALT、AST、GGT、MDA水平明显降低,SOD水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论红背叶根在酒精性脂肪肝细胞模型中具有保肝、降酶、抗脂质过氧化的作用。

红背叶根水提物对乙醇诱导的酒精性脂肪肝细胞的干预作用及可能机制

目的探讨红背叶根水提物对乙醇诱导的酒精性脂肪肝细胞的干预作用和可能机制。方法(1)采用不同浓度乙醇干预人肝L02细胞,检测细胞存活率以筛选适宜的建模浓度。(2)将L02细胞分为空白对照组和不同浓度红背叶根组,不同浓度红背叶根组经适宜浓度乙醇干预建模后,给予不同浓度红背叶根水提物干预,检测细胞存活率以筛选适宜的药物干预浓度。(3)将L02细胞分为空白对照组和0 mg/mL、0.78 mg/mL、1.56 mg/mL、3.125mg/mL红背叶根组,红背叶根组经适宜浓度乙醇干预建模后,给予相应浓度红背叶根水提物干预,检测并比较各组细胞的三酰甘油水平及陷窝蛋白1(Cav-1)mRNA表达水平。结果(1)使用80%的乙醇用于建模,将0.78 mg/mL、1.56 mg/mL、3.125 mg/mL作为红背叶根干预浓度。(2)各红背叶根组的三酰甘油水平及Cav-1 mRNA表达水平均高于空白对照组,且0 mg/mL、0.78 mg/mL、1.56 mg/mL、3.125 mg/mL红背叶根组三酰甘油水平及Cav-1 mRNA表达水平依次降低(均P<0.05)。结论红背叶根水提物可能通过降低三酰甘油水平及Cav-1 mRNA表达,发挥防治酒精性脂肪肝的作用。

美洲大蠊提取物对肝硬化门静脉高压大鼠NF-κB和MIF表达的影响

目的观察康复新液(extract of Periplaneta americana,APA)对门静脉高压症大鼠核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)表达的影响。方法 60只SD大鼠分为正常对照组、模型组、普萘洛尔组和APA高、中、低剂量组,每组10只。采用CCl4加乙醇建立大鼠门静脉高压症模型,边造模边给药8周。测各组大鼠门静脉压力,同时观察肝脏组织形态学改变,并用免疫组化方法检测肝脏中NF-κB及MIF的表达水平。结果模型组门静脉压力较正常对照组明显升高(P<0.05),APA组及普萘洛尔组门静脉压力较模型组明显下降(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05);APA高、中剂量组不仅可以改善受损肝脏的病理形态;还可降低肝脏组织中NF-κB、MIF的表达。结论 APA不仅可以改善门静脉系统的高动力状态,其治疗效果优于普萘洛尔,而且还具有改善肝硬化门静脉高压症中肝脏组织形态的作用,其机制除了与其具有促进血管增生、改善血液循环、促进组织修复有关之外,还可能与其抑制肝组织中NF-κB、MIF的表达有关。