铅中毒患者驱铅治疗效果的影响因素

铅是有毒的环境污染物,铅中毒严重危害人体健康.静脉注射依地酸二钠钙(CaNa_(2)EDTA)是目前临床上最常使用的驱铅治疗方法,但其治疗效果不令人满意,治疗效果的影响因素有待进一步探究.本文以铅中毒患者作为研究对象,使用CaNa_(2)EDTA进行驱铅治疗,分别在用药前、用药后24 h以及用药后72 h测定全血、血浆和尿液中的铅含量以及尿液的酸碱度(pH值),分析了铅中毒患者在驱铅治疗过程中,血铅、血浆铅和尿铅的变化趋势和铅脱除率,并进一步探究了影响铅脱除率的因素.实验结果显示,随着用药治疗,血铅和血浆铅逐渐降低,同时尿铅升高;血浆铅的脱除率显著高于血铅,说明血浆铅与EDTA的络合效率高于血细胞中铅;尿铅与血浆铅呈正相关关系,而与血铅的相关性较弱,说明血浆铅是影响驱铅治疗效果的重要因素;用药后24 h,尿液pH值与血铅脱除率呈显著正相关关系,说明尿液酸碱度可能是影响驱铅治疗效果的重要参数.本研究为提高铅中毒患者驱铅治疗效果提供了重要依据.

3D打印便携式凝胶电泳装置用于蛋白质的快速检测

随着现场分析对于快速、便携和经济型检测的需求,分析仪器的便携化和微型化备受关注。3D打印技术的不断发展,将会极大推动小型化、便携式实验设备的开发和研制。分析仪器的微型化有助于促进资源不足地区在医疗现场、食品安全和环境污染等方面的现场监测。目前,用于蛋白质分离的凝胶电泳装置多为实验室用小型化分析仪器,可用于现场快速分离蛋白质的小型化仪器尚未见报道。该研究设计加工了一款便携式凝胶电泳装置,用于蛋白质的快速分离检测。首先,通过3D打印加工的凝胶电泳装置可在实验室内方便、快捷、低成本的复制。其次,通过对预染蛋白质相对分子质量标准的分离测试,对该系统结构进行优化。优化后该凝胶电泳装置电泳槽的尺寸仅为15 mm×20 mm×17 mm,采用3D打印技术可在5 h内加工完成,耗费打印材料10 mL。正负极所用电泳缓冲液共需4 mL,所使用的25 V锂电池可实现100 h左右的工作时间。装置优化后可实现蛋白质的快速高效分离。随后,在5种常用蛋白质相对分子质量标准的分离中,该装置与商业化平板凝胶电泳分离效果相当,同时具备更快的分离速度。该研究在便携式凝胶电泳装置的开发及其在蛋白质快速分离方面取得了初步成果,但在分离完成后立即对蛋白质进行定量分析以及更多实际样品的应用方面还需要进一步研究。

血清涎液化糖链抗原6对肺部疾病预警作用研究进展

肺部疾病的早期诊断对于其防治具有重要意义。血清涎液化糖链抗原-6(KL-6)检测操作简便、无创、成本低,可反映肺泡上皮和间质的损伤程度。多种间质性肺疾病(如特发性肺纤维化和结缔组织病、原发性干燥综合征、类风湿关节炎、特发性炎症性肌病和系统性硬化合并间质性肺病)、非小细胞肺癌、多种肺炎和慢性阻塞性肺疾病患者的血清KL-6水平高于健康对照人群,对于上述疾病的早期诊断具有较好的灵敏度和特异度。职业性尘肺病是一种病因明确的间质性肺疾病。有研究结果显示,职业性矽肺患者、职业性石棉肺患者和粉尘作业工人血清KL-6水平均高于健康对照人群。但由于有关研究样本量少以及不同研究得出的结论并不一致,血清KL-6对于尘肺病早期诊断的价值仍需更多研究予以证实。未来需要增大样本量,改进血清KL-6检测方法,探讨其作为职业性肺部疾病早期诊断标志物的可行性,并探讨其与其他生物联合应用到包括职业性肺部疾病在内的更多的肺部疾病的早期诊断效能和应用价值,以充分发挥其对肺部疾病的预警作用。

SP-A在矽肺中的作用研究

目的探讨表面活性物质相关蛋白-A(SP-A)在矽肺发生发展中的作用与机制。方法将无特定病原体(SPF)级SP-A基因敲除的纯合子和杂合子小鼠进行配种繁殖,选择基因型为SP-A^(-/-)的小鼠进行后续实验。选择SPF级野生型(SP-A+/+)小鼠与SP-A^(-/-)小鼠各12只,采用随机数字表法,将小鼠分为SP-A^(+/+)对照组、SP-A^(-/-)对照组、SP-A^(+/+)矽肺组、SP-A^(-/-)矽肺组,每组6只。2个矽肺组小鼠均通过气管暴露法一次性予20.0μL的250 g/L的游离二氧化硅混悬液,2个对照组小鼠注射等体积0.9%氯化钠溶液。于建模后第28天处死小鼠,观察其肺组织病理学改变情况,采用TUNEL法检测小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡情况,采用荧光定量聚合酶链式反应检测小鼠肺组织中凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9的mRNA表达。结果肺组织病理学结果显示,在二氧化硅暴露后,SP-A^(+/+)矽肺组小鼠肺内可见肺泡间隔增厚、散在矽结节和胶原纤维形成,矽肺结节内可见大量炎性细胞浸润;SP-A^(-/-)矽肺组小鼠肺部炎症和间质纤维化程度较SP-A^(+/+)矽肺组严重。与2个对照组比较,2个矽肺组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率和肺组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA相对表达水平均升高(P值均<0.05);而SP-A^(-/-)矽肺组小鼠上述4个指标均高于SP-A^(+/+)矽肺组(P值均<0.05)。4组小鼠肺组织中Bcl-2 mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论敲除SP-A可加重矽肺模型小鼠炎症和肺纤维化程度,促进肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡;其机制可能与SP-A影响线粒体途径细胞凋亡的Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路有关。

抑制肺上皮间质转化的抗纤维化药物研究进展

肺纤维化为肺部疾病的终末期病理性改变,严重影响人体的呼吸功能。国内外研究表明,上皮间质转化(EMT)是肺纤维化发展过程中重要的中间阶段,定向调控EMT上下游多条作用路径,如转化生长因子-1的经典Smads通路、非Smads通路等,可有效遏制EMT进程,缓解肺纤维化病变。本文对以EMT为作用靶点,改善肺纤维化病理作用机制的主要研究成果进行综述,为进一步研发抗肺纤维化药物提供理论基础和研究方向。

中性粒细胞颗粒蛋白改善铅所致小鼠肝脏炎症作用

目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和髓过氧化物酶(MPO)对铅诱导的小鼠肝脏炎症的改善作用与机制。方法将无特定病原体级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铅暴露组、NE抑制剂组和MPO抑制剂组,每组3只。后3组小鼠均腹腔注射剂量为10 mg/kg体质量的乙酸铅溶液,对照组小鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,每周3次,连续4周。于最后7 d,2个抑制剂组小鼠分别予腹腔注射剂量为40 mg/kg体质量的NE抑制剂西维来司他钠或MPO抑制剂4-氨基苯甲酰肼,每天1次。观察小鼠体质量和肝脏组织病理学改变情况。采用荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝组织中炎症基因肿瘤坏死因子-α(Tnfa)、白细胞介素-1β(Il1b)、白细胞介素-6(Il6)、核酸结合寡聚结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(Nlrp3)、凋亡相关点样蛋白(Asc)和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase1)的mRNA表达。采用蛋白质印迹法检测NLRP3、ASC和CASPASE-1蛋白表达水平。结果4组小鼠活动基本正常,体质量差异无统计学意义(P>0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,铅暴露组小鼠肝细胞大小不一、细胞边界模糊,呈现早期炎症反应;经NE或MPO抑制剂干预后,2个抑制剂组小鼠肝组织早期炎症反应情况均有所改善,MPO抑制剂组小鼠改善程度优于NE抑制剂组。铅暴露组小鼠肝组织中Tnfa、Il1b、Il6、Nlrp3、Asc、Caspase1的mRNA和ASC、CASPASE-1蛋白的相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05)。与铅暴露组比较,NE抑制剂组小鼠肝组织中Tnfa、Il1b、Il6、Nlrp3和Asc的mRNA相对表达水平均下降(P值均<0.05),MPO抑制剂组小鼠肝组织中Tnfa、Il1b、Il6、Caspase1的mRNA和ASC、CASPASE-1蛋白的相对表达水平均下降(P值均<0.05)。结论铅可能通过激活NLRP3炎症小体活化诱导小鼠肝脏炎症;NE或MPO抑制可通过减缓NLRP3炎症小体活化,进而改善铅诱导的小鼠肝脏炎症反应。

基于全外显子测序分析CES1和MUC5B基因多态性与乙酸甲酯中毒关联性

目的通过全外显子测序检测和分析乙酸甲酯中毒患者易感基因。方法采用判断抽样方法,选择2例职业性急性重度乙酸甲酯中毒患者及与其处于同一工种、同一工位、工作时间相似的直系亲属各1人作为研究对象,采集周围静脉血进行全外显子测序;将测序数据与公共基因组数据库进行对比以筛选变异位点,找出与乙酸甲酯中毒相关的基因位点,进行可疑致病突变基因注释与解读。结果全外显子测序结果显示,乙酸甲酯中毒患者与直系亲属对照间存在40个差异基因,包括80个单核苷酸多态性与8个插入缺失标记;其中,关联性较强的基因为羧酸酯酶1(CES1)和黏蛋白(MUC)5B。乙酸甲酯中毒患者CES1的基因位点发生c.248C>T(p.Ser83Leu)杂合突变,MUC5B的基因位点发生c.6635C>T(p.Thr2212Met)和c.7685C>T(p.Thr2562Met)的杂合突变,均为错义突变。经构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,获得证据等级较高的11对交互作用,所涉及的基因包括赖氨酸甲基转移酶2C、含E3泛素蛋白连接酶2的HECT和RLD结构域、中性粒细胞胞质因子1、还原型烟酰胺腺嘌二核苷酸磷酸氧化酶3、C末端结合蛋白2、锌指蛋白717、FSHD区域基因2家族成员C、FSHD区域基因1、MUC4、MUC6、MUC5B和MUC12。结论乙酸甲酯中毒患者基因位点CES1与MUC5B基因多态性可能与乙酸甲酯中毒的发生发展机制存在联系。

低剂量二甲双胍延缓矽肺小鼠肺纤维化研究

目的探讨低剂量二甲双胍延缓矽肺小鼠肺纤维化的作用与机制。方法将无特定病原体级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,每组6只。采用一次性气管暴露法,矽肺模型组和二甲双胍干预组小鼠均予质量浓度为250 g/L的二氧化硅混悬液20μL,空白对照组和药物对照组小鼠均予0.9%氯化钠溶液20μL。染尘72.0 h后,药物对照组和二甲双胍干预组小鼠分别腹腔注射剂量为65 mg/kg体质量的二甲双胍,空白对照组和矽肺模型组小鼠均予等体积0.9%氯化钠溶液,隔天1次,连续28 d。干预结束后,观察小鼠肺组织病理学改变情况,计算肺脏器系数,以Ashcroft评分法评估肺组织纤维化程度,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肺组织中纤维连接蛋白(Fn)1和Ⅰ型胶原蛋白(ColI)α1链(Col1a1)的mRNA相对表达水平,采用蛋白质印迹法测定肺组织中FN和COLⅠ的蛋白相对表达水平。结果肺组织病理学检查结果显示,空白对照组和药物对照组小鼠肺部无出现炎症和纤维化改变;矽肺模型组小鼠肺组织出现炎症和纤维化的改变;二甲双胍干预组小鼠肺组织炎症和纤维化程度均较矽肺模型组减轻。矽肺模型组小鼠肺组织肺脏器系数、Ashcroft评分,以及Fn1、Col1a1的mRNA和FN、COLⅠ蛋白的相对表达水平均高于空白对照组和药物对照组(P值均<0.05)。二甲双胍干预组小鼠上述指标均低于矽肺模型组(P值均<0.05)。结论低剂量二甲双胍可延缓矽肺小鼠肺组织纤维化的进展;其机制可能与二甲双胍改善二氧化硅诱导的细胞外基质过度沉积有关。

TSG-6抑制游离二氧化硅诱导骨髓巨噬细胞分泌IL-1β作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α刺激蛋白-6(TSG-6)对游离二氧化硅(SiO_(2))诱导的小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)分泌促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β的作用及机制。方法(1)取自小鼠骨髓中分离的BMDMs分为8组。空白对照组细胞不予任何刺激,脂多糖组细胞予质量浓度为50μg/L的脂多糖刺激;TSG-6对照组细胞予终质量浓度为100μg/L的重组小鼠TSG-6刺激;SiO_(2)模型组细胞予质量浓度为50μg/L的脂多糖预刺激4 h后再予终质量浓度为250 mg/L的游离SiO_(2)混悬液刺激;4个剂量TSG-6组细胞均予质量浓度为50μg/L的脂多糖和终质量浓度为250 mg/L的游离SiO_(2)混悬液处理,在给予SiO_(2)处理的同时分别加入终质量浓度为10、20、50、100μg/L的重组小鼠TSG-6干预。培养16 h后收集各组细胞,采用酶联免疫法检测BMDMs上清液中IL-1β表达量,筛选TSG-6的最佳刺激剂量。(2)收集空白对照组、脂多糖组、SiO_(2)模型组、100μg/L TSG-6组和TSG-6对照组的细胞,采用免疫印迹法检测IL-1β及其相关通路的组分蛋白IL-1β前体、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、caspase-1前体、凋亡相关斑点样蛋白和核苷酸结合寡聚化结构域样受体族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)相对表达水平。结果(1)SiO_(2)模型组BMDMs上清液中IL-1β水平高于空白对照组(P<0.01);20、50、100μg/L TSG-6组BMDMs上清液中IL-1β水平均低于SiO_(2)模型组(P值均<0.01)。选择100μg/L作为后续实验的TSG-6刺激剂量。(2)与空白对照组和脂多糖组比较,SiO_(2)模型组BMDMs中的IL-1β、caspase-1和NLRP3相对表达水平均升高(P值均<0.05);与SiO_(2)模型组比较,100μg/L TSG-6组BMDMs中的IL-1β、caspase-1和NLRP3相对表达水平均降低(P值均<0.05)。结论TSG-6可通过下调caspase-1和NLRP3的表达来抑制BMDMs分泌促炎细胞因子IL-1β。

二氧化硅检测方法和代谢分布过程研究进展

二氧化硅(SiO_(2))广泛分布于自然界中,天然状态下几乎不对人体产生健康危害。X线衍射法、透射电镜光谱法和扫描电镜光谱法均是SiO_(2)定性分析的检测方法,有助于确定生物样品中SiO_(2)的存在形式和元素组成;扫描电镜法和透射电镜法可确定生物样品中SiO_(2)的形态和粒径特征;焦磷酸法和电感耦合等离子体质谱法可测定环境样品中SiO_(2)水平;但目前直接用于检测生物样品中SiO_(2)水平的方法较少。虽然可通过单颗粒电感耦合等离子体质谱法直接检测生物样品中SiO_(2)水平,但生物样品前处理方法与仪器参数等尚待进一步改进和优化;还可尝试采用氢氟酸和除氢氟酸外的酸对两份相同的生物样品进行消解来间接测定SiO_(2)水平。在矿石开采、金属打磨等生产和加工过程中产生的游离SiO_(2)粉尘可通过呼吸道进入人体内,主要分布于肺脏、脾脏、肝脏和肾脏中,可对人体产生危害;进入体内的SiO_(2)可通过尿液和粪便排出体外。但目前SiO_(2)在人体内的具体代谢与分布过程尚未明确。