细胞盖玻片培养法及其在实验细胞学研究中的应用

体外细胞培养作为重要的实验细胞学手段在生命科学研究的众多领域被广泛应用。以往的体外细胞学研究多以不同规格的培养皿/瓶为单位进行。在实验中,虽可通过设立多种形式的对照来消除各种因素造成的差异,但仍有一定的不足和弊端。这主要表现在:(1)多皿培养的细胞间存在着皿间差异;(2)培养皿内的细胞只能供单项指标观察;(3)

胃癌发生发展中可溶型Fas/FasL的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术,对20例正常胃黏膜,22例癌前病变和35例胃癌组织中Fas/FasL的表达情况加以分析。结果:正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%;FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示:胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30 kDa的可溶型Fas(sFas)为主,伴少量的43 kDa膜型Fas(mFas)。结论:Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<0.05);FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(P<0.05)。

伴有6;9染色体易位急性髓系白血病患者DEK-CAN融合基因表达分析

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患者的骨髓或外周血单个核细胞DEK-CAN融合基因表达进行了分析,并对其中3例行异体骨髓移植(allo-BMT)患者进行动态随访。结果表明:4例急性髓系白血病患者为t(6;9)(p23;q34)易位;4例初诊、再发及完全缓解期患者均不同程度检出DEK-CAN融合基因,占100%;其中初诊、再发期表达明显增强,完全缓解期减弱;3例患者allo-BMT后1-24个月均表达DEK-CANmRNA。临床资料显示4例AML患者中2例于CR后1-24个月复发(其中1例接受异体骨髓移植)、死亡,其余2例完全缓解,在治疗中先后接受异体骨髓移植,现仍然生存。结论:DEK-CAN基因是AML发病的分子基础,检测DEK-CAN融合基因对于AML的诊断、疗效观察及预后判断有重要意义。

儿童白血病患者Flt-3/ITD突变分析及其临床意义

背景与目的:Flt-3跨膜区内部串联重复(Flt-3internaltandemduplication,Flt-3/ITD)突变是近年来发现的Flt-3基因最常见的一种突变类型,是急性髓系白血病(acutemyeloidleukaemia,AML)中发生率最高且与预后相关的突变。本研究旨在探讨Flt-3/ITD突变与儿童白血病发生的关系及其临床意义。方法:采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)联合序列测定,检测302例儿童白血病患者骨髓Flt-3/ITD突变情况,其中包括AML122例、急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)124例、幼年型慢性粒细胞白血病(juvenilechronicmyelogenousleukemia,JCML)17例和骨髓异常增生综合征(myelodysplasticsyndromes,MDS)39例。结果:122例AML患者中98例(80.33%)Flt-3阳性;21例(17.21%)发生Flt-3/ITD突变,分别为M03例、M12例、M24例、M48例及M54例,突变率分别为42.86%(3/7)、22.22%(2/9)、12.90%(4/31)、44.44%(8/18)和15.38%(4/26)。此外,124例ALL中72例Flt-3阳性,阳性率为58.06%,其中2例发现Flt-3/ITD突变,突变率1.61%。测序及Blast比对分析显示,外显子11区均有ITD,各例ITD的复制区域不同,长短不等(24～95bp)。39例MDS和17例JCML患者中均未检测到Flt-3/ITD突变。临床资料显示,21例Flt-3/ITD突变的AML患者中有19例在短期内死亡,这19例的中位生存时间为13.5个月(0～47个月),死亡率为90.48%,与无Flt-3/ITD突变患者相比有显著性差异(P<0.05)。Flt-3/ITD突变阳性患者外周血中性粒细胞平均比率与Flt-3/ITD突变阴性患者无显著性差异(P>0.05)。染色体核型分析显示,Flt-3/ITD的AML患者中3例存在有染色体异位,分别为t(11;12)(p15;q13)、t(6;9)(p23;q23)、inv16(q21;q23)。结论:Flt-3/ITD突变多发现于AML,罕见于ALL,未见于MDS和JCML。该突变与儿童白血病特别是儿童AML的发生及进展有关。Flt-3/ITD可以作为判断AML预后的重要标志之一。

急性髓系白血病细胞Flt-3表达及Flt-3/ITD突变分析

本研究探讨急性白血病(acuteleukemia,AL)细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株(ALL),5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明:77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性,阳性表达率为62%,其中20例AML细胞株中有12例阳性,阳性表达率为60%;57例ALL细胞株中有33例阳性,阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性,阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达(阳性率为8.3%),测序显示存在有29bp的两个编码重复序列,其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL(P<0.05)。结论:Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达,在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断。

探析仿真模型在电视收视率评估中的应用——基于NetLogo电视收视率评估仿真模型构建

基于NetLogo模拟一段时间内某档节目的收视率走向,构建简单的电视收视率仿真实验,为电视台推出一档新节目提供收视率参考,也解决了电视节目改版时,单纯依赖对用户偏好(概率)和同类竞争水平的直觉做决策的不确定性。

土槿皮乙酸通过PI3K/Akt信号通路诱导人肾癌细胞A498凋亡

目的:研究土槿皮乙酸对人肾癌细胞A498凋亡的影响,并探讨其内在的分子机制,为肾癌治疗寻找有效的新靶点和新策略。方法:人肾癌细胞A498经10、15μmol/L土槿皮乙酸处理48 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时通过Western印迹和实时荧光定量PCR检测凋亡相关蛋白和m RNA的表达;加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或15μmol/L土槿皮乙酸处理A498细胞48 h后,Western印迹检测相关蛋白的表达。结果:经不同浓度土槿皮乙酸作用A498细胞48 h后,与未加土槿皮乙酸组细胞相比,细胞凋亡率显著上升,且呈剂量依赖性,比较差异有统计学意义(P<0.05);同时,Blc-2表达减少,Bax、caspase-9、caspase-3表达增多。Blc-2蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少,而Bax、caspase-9、caspase-3的表达呈增加趋势;PI3K和Akt蛋白的表达量与是否加入LY294002或土槿皮乙酸无关,p-PI3K和Aktp-Ser473蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少。结论:土槿皮乙酸可抑制A498细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt通路相关。

人参多糖对不同类型肿瘤细胞生长增殖的影响

目的:探讨人参多糖对不同类型肿瘤细胞生长抑制作用的构效关系。方法:采用MTT法检测人参多糖对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:人参淀粉样多糖WGPN和AG型果胶WGPA-2-RG对HEP-3B、A172和MCF-7肿瘤细胞的生长没有影响。AG+HG型果胶WGPA-4-RG、HG型果胶WGPA-1-HG和WGPA-3-HG对这几种肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用。结论:不同结构的人参多糖对肿瘤细胞的影响明显不同。人参淀粉样多糖不具有直接地抑制肿瘤细胞生长的作用,而人参果胶具有直接地抑制肿瘤细胞生长的作用。其中HG含量越高,它的抑制生长作用越显著。

dB-cAMP和顺铂的化疗效果与肿瘤细胞间缝隙连接通讯的相互关系

为探讨肿瘤细胞缝隙连接通讯(GJIC)的功能状态对化疗药物抗癌效果的影响,本研究选用GJIC功能迥异的人膀胱癌细胞系BIU,EJ和卵巢癌细胞系CaOv3,借助多种细胞生物学手段,观察它们对广谱抗癌药顺铂(DDP)和GJIC调节剂dB-cAMP的反应。结果显示,正常培养条件下,3种细胞的GJIC均较弱,dB-cAMP对BIU,CaOv3和EJ细胞的GJIC分别呈上调、略上调和无作用。抑癌实验显示,dB-cAMP本身可在一定程度上抑制3种细胞的生长;顺铂通过诱导细胞凋亡而呈明显的杀伤效应。然而,dB-cAMP与顺铂配伍使用,并不改善顺铂的抑癌效果。这说明,1)dB-cAMP的抑癌效应未必经过调节GJIC的通路;2)GJIC的改善与否同肿瘤细胞的药物敏感性无关。因此,在肿瘤细胞的分化程度和遗传学变异未加纠正的情况下,单纯调节GJIC的功能无助于化疗效果的提高。

用Folin-酚试剂法测定双胸蚓溶栓酶活性

蚯蚓溶栓酶活性测定,目前国内多采用纤维蛋白平板法。该法虽能比较溶栓酶对底物纤维蛋白溶解情况,但作为定量检查,人为误差较大,且很难摸准正比线性范围。以酪蛋白为底物紫外法,操作虽简便,但测定蛋白灵敏度较低。本文以酪蛋白为底物对双胸蚓溶栓酶(bimastos throm-bolytic enzyme,BTE)的研究完全符合酶反应动力学。

基于MOOC的混合式教+学模式生物化学教学改革与实践

目的:探讨基于MOOC的混合式教+学模式在生物化学教学实践中的应用效果。方法:选取某医学院校2018级口腔医学专业本科生64人为对照组、2019级口腔医学专业本科生64人为试验组开展教学实践研究。对2组平时成绩、期末成绩进行比较,并采用调查问卷对基于MOOC的混合式教+学模式教学效果进行评价。结果:2组学生的平时成绩、期末成绩比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在参与课程反馈的学生中,全程跟随老师听课的同学约占89.06%;有56.25%的学生听课注意力集中时间在31~45 min。结论:基于MOOC的混合式教+学模式有效提高了学生学习的主动性和参与度,优化了考核方式,提高了学生的学习成绩,从整体上提升生物化学的教学质量和效果。为进一步寻找更适合生物化学的教学改革模式提供了重要的理论基础和参考依据。

应用唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中的表达

目的:通过唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达差异。方法:制备唾液酸糖基转移酶基因芯片,应用基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达,并通过蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平。结果:唾液酸糖基转移酶ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中表达降低。结论:ST3GalⅤ在肝癌细胞系中表达水平的降低导致神经节苷脂GD1a的合成下降从而影响肝细胞的生长增殖。

2000例2～6岁儿童血清维生素A营养调查分析

目的：了解沈阳市城区幼儿园2～6岁儿童血清中维生素A的水平。方法：选择沈阳市和平区幼儿园2～6岁儿童的血清样品2000例，以改进的微量荧光光度法进行检测。结果：2000例儿童血清维生素A水平波动在0.700～1.751μmol/L，平均（1.074±0.257）μmol/L。可疑亚临床维生素A缺乏检出率为52.7％，未见维生素A缺乏和亚临床维生素A缺乏。结论：沈阳市城区幼儿园2～6岁儿童维生素A缺乏症、亚临床维生素A缺乏可能已经基本根除，但可疑亚临床维生素A缺乏有上升趋势。降低和根除可疑亚临床维生素A缺乏的发生是我们目前和下一步的工作重点。

N,N-二甲基-10H-2-吩噻嗪磺酰胺的合成

以邻溴苯胺为起始原料,经缩合、水解、N,N-二甲基-3-硝基-4-氯苯磺酰胺缩合、锌粉还原、铜催化Ullmann反应,得到目标化合物。并考察了缩合反应不同溶剂、碱、反应温度,还原反应还原剂的用量,Ullmann反应催化剂的用量、反应时间、反应温度对反应收率的影响。优化后5步反应总收率可达45.5%,且反应条件温和,后处理简便,在该工艺的中试生产中4批样品的车间总收率分别为38.2%、36.7%、36.9%、38.5%,且产品质量可靠,稳定性良好,产品经ESI-MS和1HNMR确证结构。

3,4-二取代基-β-苯乙胺盐酸盐类化合物的合成

3,4-二取代基-β-苯乙胺盐酸盐类化合物是四氢异喹啉类化合物合成过程中的一个重要中间体。以3,4-二羟基苯甲醛为原料,经溴代物取代,硝基甲烷缩合,NaBH4/BF3还原3步反应合成了该类目标化合物。考察了缩合反应及还原反应中各原料投料比、反应时间、反应温度对反应收率的影响。优化后平均反应总收率可达67.6%,且反应条件温和、避免了以往该类化合物合成过程中氰化钠等剧毒性物质的使用,产品经ESI-MS和1HNMR确证结构。