血液分析仪与手工计数法在实验树鼩红细胞生理指标检测中的效果评价

目的探讨三分类、五分类血细胞计数仪与手工计数在检测实验室繁殖树鼩外周血红细胞生理指标中的差异,为实验树鼩红细胞生理指标值建立可靠参考。方法应用手工法、五分类全自动血细胞分析仪BC-6800及三分类全自动血细胞分析仪UNIT-3010测定20只健康成年树鼩外周血中红细胞数、红细胞平均容积、血细胞比容、血红蛋白含量、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞平均血红蛋白含量的正常参考值范围,并通过Bland-Altman图和Passing-Bablok回归分析判断两种方法的一致性。结果手工法与五分类全自动血液分析仪比较,红细胞数、红细胞平均容积、血红蛋白含量及红细胞平均血红蛋白浓度有统计学差异(P<0.001),两种方法之间无系统差异,有比例差异;血细胞比容和红细胞平均血红蛋白含量无统计学差异,且两种方法一致性好,无系统差异和比例差异;手工法与三分类全自动血液分析仪比较除红细胞计数外,其余指标均有统计学差异(P<0.001),且方法之间存在系统差异和比例差异。结论手工法测量的树鼩外周血中红细胞相关生理指标的正常参考值范围能够为树鼩的研究提供参考;同时BC-6800全自动血液分析仪较UNIT-3010仪在测定红细胞相关指标时更为准确、可靠,可用于对大批量标本进行快速有效的检测,但是其也并不能完全替代手工法,只有两者结合应用才能保证检验结果的准确性和可靠性。

树鼩长途运输应激期营养干预措施的探究

目的探究适当的营养干预方法,以减少因长途运输引起的应激反应对实验树鼩的不良影响。方法在实验的第一部分,根据树鼩野外食谱向本课题组目前在养的健康成年树鼩投喂过量的新鲜经济果蔬,记录各组体重变化、活动状态及剩余食量,探究实验条件下既满足能量消耗需求,又能满足树鼩饮食偏好的最优营养方案组合;实验的第二部分将长途运输应激树鼩随机分3组,并分别用上述营养方案、单纯常规饲料以及单纯足量果蔬饲养,通过生存率、生存状态和体重变化判断营养干预方法是否奏效。结果树鼩更偏好于食用苹果、雪梨等含糖量较高的水果,且面包虫干对树鼩体重的的变化有统计学意义(P=0.019);一只成年雄性树鼩一天的食量约为富士苹果60 g+面包虫干10 g+标准饲料15 g;通过营养干预方法可以有效降低运输应激树鼩的死亡率(P=0.020)。结论营养干预方案可以降低长途运输应激期中树鼩的死亡率,有利于树鼩精神状态的恢复。

实验树鼩外周血单个核细胞分离的方法探讨

目的:建立从实验树鼩外周血中分离单个核细胞的可靠方法。方法:使用不同密度的Percoll®分离溶液对树鼩的静脉血进行密度梯度离心,并通过Wright-Giemsa染色和细胞计数分析树鼩的单核细胞的最佳分离密度。结果:采用60%和67%Percoll®分离溶液的不连续密度梯度离心方法可以分离出树鼩粒细胞。60%~63%的分离溶液可以成功地将静脉血分为4层,随着密度的增加,分离的细胞越多,粒细胞和红细胞受到污染的风险就越高。结论:在确保淋巴细胞纯度的前提下,60%Percoll®分离液可分离外周血中更多的单核细胞,可用于从树鼩静脉血中分离外周血单个核细胞。

流式细胞术监测免疫抑制后树鼩外周血淋巴细胞的动态变化

目的:探索建立一种适用于树鼩外周血淋巴细胞的流式细胞学方法,并利用该方法动态监测注射环孢素A(CsA)树鼩的淋巴细胞、CD4^(+)细胞、CD19^(+)细胞百分比的变化。方法:将18只成年树鼩随机分为空白组(10只)、CsA高剂量组(4只)和CsA低剂量组(4只)。CsA高、低剂量组分别经腹腔注射20 mg/kg和40 mg/kg的CsA,连续注射35 d。分别在第1天和第7天采集空白组树鼩的股静脉血,进行不同时间淋巴细胞及各亚群差异分析,以检验流式实验操作的稳定性。分别用PBS溶液和含1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液重悬外周血单细胞,台盼蓝染色法检测两种不同染色缓冲液对细胞存活率的影响。流式细胞术检测树鼩外周血淋巴细胞、CD3^(+)细胞、CD4^(+)细胞和CD19^(+)细胞百分比,观察树鼩在注射低剂量和高剂量CsA后外周血淋巴细胞、CD4^(+)及CD19^(+)细胞的变化趋势。结果:采用含1%BSA的PBS作为染色缓冲液,可使流式细胞存活率保持在90%~100%,高于PBS(P<0.05)。通过不同操作时间的稳定性实验,筛选出适用于树鼩的CD4和CD19抗体;注射CsA后树鼩外周血淋巴细胞、CD4^(+)和CD19^(+)细胞百分率总体呈下降趋势。结论:本研究建立了一种应用流式细胞术检测树鼩外周血淋巴细胞的方法,为研究树鼩疾病模型的免疫学特性提供动态观察方法。

实验树鼩体温测量方法探讨

目的:探讨实验树鼩体温测量的最佳方法。方法:实验分为3个部分,第一部分通过水银体温计测量不同时长、不同年龄组树鼩直肠的温度,确定水银柱法的最佳测量时间;第二部分通过比较水银体温计、电子体温计和红外测温仪测量不同年龄组树鼩肛温,探讨非侵入测量方法的可行性;第三部分通过红外测温仪测量树鼩的前额温度及左、右腋窝温度,探讨能代表树鼩体表温度的最佳部位。结果:用水银柱体温计测量树鼩直肠温度时,各年龄组3 min与5 min时的温度比较,差异有统计学意义(P<0.05),5 min之后的温度比较,差异无统计学意义(P>0.05);电子体温计测量不同年龄组树鼩直肠温度时,成年组为(38.34±0.32)℃,青年组为(38.35±0.35)℃,幼年组为(38.60±0.53)℃,一致性分析显示电子体温计法和水银计法在测量成年组和青年组的直肠温度时,差异无统计学意义(P>0.05),各年龄组红外测温仪的结果与水银计法的结果比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);红外测温仪测量不同年龄组树鼩的前额温度离散程度较小,而测量左、右额温时离散程度较大。结论:水银柱法测量树鼩直肠温度最佳时间为5 min;在青年和成年树鼩中,电子体温计的测量结果与水银体温计具有一致性,但数据离散程度稍大;红外线测温仪测得树鼩额温可以作为体表温度的粗略参考。