S100B时间分辨荧光免疫检测试剂盒的制备及性能评价

目的:制备一种快捷、准确、定量检测血清中S100B蛋白浓度的时间分辨荧光免疫检测试剂盒,并对其进行性能评价。方法:使用时间分辨荧光微球标记的抗S100B多克隆抗体及兔IgG抗体、标记垫、样品垫、S100B硝酸纤维素膜板、吸水纸制备试纸条,组装卡壳得到S100B时间分辨荧光免疫层析试剂盒。通过标准曲线、准确度、最低检测限、线性区间、特异度、重复性、稳定性等检测对该试剂盒进行性能评估。采用该试剂盒对某地区199例健康者血清及血浆样本的参考区间进行研究,并采用同步盲法测试该试剂盒与罗氏Elecsys S100检测试剂盒的临床应用性能,评估2种试剂盒对于142例样本检测结果的一致性。结果:该试剂盒所得标准曲线方程为y=(1.13302+1.75224)/[1+(x/1.08220)×(-0.60352)]-1.75224,R2=0.99908,线性范围为[0.05,30]ng/mL。该试剂盒可满足准确度相对偏差在±15%内、最低检测限≤0.05 ng/mL、特异度相对偏差在±15%内、批内差和批间差的变异系数均<15%的产品设计要求。稳定性检测结果标明该试剂盒可在2~30℃条件下有效保存12个月。同时,通过该试剂盒测得血清及血浆样本参考区间均<0.3 ng/mL。临床验证结果表明该试剂盒与罗氏Elecsys S100检测试剂盒的测定结果具有高度一致性(Kappa=0.9061>0.80),符合标准。结论:该试剂盒可快捷、准确、定量检测血清中S100B蛋白浓度,为神经类疾病、自身免疫病性疾病、脑血管疾病等的诊断与治疗提供了参考。

迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpA原核表达及其免疫原性研究

为研究迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpA免疫保护性,本研究利用PCR方法扩增迟缓爱德华菌ompA基因,构建重组载体pET-32a-ompA,将其转化大肠杆菌BL21后诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约58 ku;将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以迟缓爱德华菌强毒株ET-13攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为55%。本研究克隆了迟缓爱德华菌ompA基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供一定保护,为重组OmpA蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。

羊BMPR-IB基因非同义单核苷酸多态性的生物信息学分析

以羊BMPR-IB基因为研究对象,采用生物信息学方法,对该基因潜在的、具有生物学功能的非同义单核苷酸多态性位点(nsSNPs)进行预测,通过SIFI、PolyPhen-2、PROVEN等软件分析预测nsSNPs是否对BMPR-IB蛋白的结构及功能产生影响;通过I-Mutant 3.0、BDM-PUB、GPS-SUMO、Consurf等软件分析预测有害位点nsSNPs对蛋白质稳定性、泛素化修饰位点、磷酸化修饰位点、氨基酸进化位保守水平等是否有影响。结果表明:BMPR-IB基因存在9个nsSNPs位点,其中Q305R、R469K两个位点为主要的有害突变;9个nsSNPs位点BMPR-IB蛋白稳定性均有所降低,其中C35Y、C45S、R44H的稳定性大大降低。预测结果显示,Q305R、R469K为羊BMPR-IB基因的潜在功能性位点。

迟缓爱德华菌外膜蛋白PagC原核表达及免疫保护作用

为研究迟缓爱德华菌外膜蛋白PagC的免疫原性,用PCR方法扩增迟缓爱德华菌pagC基因,构建重组载体pET-32a-pagC,将其转化大肠埃希菌BL21后进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析显示,重组蛋白大小约40 ku;将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以迟缓爱德华菌强毒株ET-13攻毒,结果该重组蛋白对免疫组小鼠具有95%的保护率。研究结果为重组PagC蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。

不同产羔数湖羊生长性能和FecB基因遗传效应

为探究湖羊在河北省邢台地区的生长和繁殖情况,测定并分析了同一胎次不同产羔数湖羊从出生到断奶期间的成活状况、体质量和体尺变化情况、FecB基因的遗传效应。结果表明,单羔、双羔、3羔、4羔羊从出生到断奶成活率依次降低,分别为100%,95.0%,90.0%,79.2%。随着产羔数的增加,公母羔从出生到断奶各时间点的体质量均呈递减趋势。随着日龄的增加,双羔、3羔和4羔羊的生长速度均逐渐加快,到断奶时,双羔羊、3羔羊的生长速度均已超过了单羔羊。所有羔羊早期生长强度都较大,从15日龄~1月龄,均有所下降,但从1月龄~断奶,特别是3羔羊和4羔羊,均已超过了单羔羊和双羔羊的生长强度。随着产羔数的增加,公母羔断奶时各体尺指标均呈递减趋势,多数指标单羔羊和双羔羊显著或极显著高于3羔羊和4羔羊(P<0.05,P<0.01)。FecB基因的遗传效应表明,受试湖羊群体中仅存在BB和B+等2种基因型,其中BB型产羔数比B+型多0.51只(P<0.05)。生产上为方便管理且考虑综合经济效益,产双羔效果最佳,BB基因型个体可考虑作为肉羊杂交利用的母本。

山羊GDF9基因编码区nsSNPs的生物信息学分析

为筛选山羊GDF9基因的功能性nsSNPs,利用生物信息学技术对该基因编码区nsSNPs进行了有害位点的预测,进一步对有害nsSNPs在GDF9蛋白的位置、进化保守性及其对编码蛋白的稳定性、高级结构的影响等进行了预测分析,同时分析了该蛋白的泛素化修饰位点和磷酸化修饰位点。结果表明,山羊GDF9基因编码区14个nsSNPs中存在6个有害突变位点(R453H,V371M,P348S,F347S,S325Y,L266S),均不在蛋白跨膜区;R453H,V371M,P348S,L266S属于高保守性位点;R453H,V371M,P348S,F347S,L266S可降低蛋白的稳定性;V371M,L266S可能参与了蛋白二级结构的形成;R453H,V371M,L266S对蛋白三级结构有影响。推测有害突变位点R453H,V371M,P348S,F347S,S325Y,L266S可能是山羊GDF9基因的功能性nsSNPs。

杜湖杂交F1代与湖羊羔羊生长性能和血液生理指标比较研究

为了评定杜泊羊与湖羊杂交F1代和湖羊羔羊在河北省邢台地区的生长发育和身体状况,试验对二者从初生到断奶期间的成活状况、生长性能及断奶时的血液生理指标进行了比较分析。结果表明:杜湖杂交F1代和湖羊羔羊从初生到断奶期间的成活率分别为100%和95%;体重的累积生长中,除了初生重外,杜湖杂交F1代公羔、母羔各年龄段的体重均高于湖羊,其中在15日龄时二者差异显著(P<0.05);绝对生长中,初生~15日龄杜湖杂交F1代公羔、母羔体重均极显著高于湖羊(P<0.01);相对生长中,初生~15日龄,杜湖杂交F1代公羔、母羔体重均高于湖羊,其中公羔差异极显著(P<0.01),母羔差异显著(P<0.05)。杜湖杂交F1代公羔、母羔的大部分体尺指标均高于湖羊,其中1月龄公羔的腰角宽差异显著(P<0.05),断奶母羔的胸围差异极显著(P<0.01)。杜湖杂交F1代和湖羊公羔、母羔大多数血液生理指标均在标准参考值内。说明杜湖杂交F1代羔羊的成活状况、生长性能和断奶时的血液生理指标均表现出较强的杂种优势,可在当地大力推广。

迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ原核表达及免疫原性

为研究迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FlgJ的免疫保护性,本研究利用PCR方法扩增迟缓爱德华菌flgJ基因,构建重组载体pET-32a-flgJ,将其转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析显示,重组蛋白大小约54 000;将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以迟缓爱德华菌分离株ET-13进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为70%。本研究克隆了迟缓爱德华菌外膜蛋白flgJ基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供一定保护,为重组FlgJ蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。

中西药联用对美人鱼发光杆菌的体外抑菌试验

为了探讨中西药联用对美人鱼发光杆菌的体外抑菌效果,试验采用试管二倍稀释法分别测定2种西药（氟苯尼考、阿米卡星）和3种中药（女贞子、黄柏、夏枯草）对美人鱼发光杆菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,微量肉汤棋盘稀释法测定中西药联用对美人鱼发光杆菌的联合抑菌指数（FIC）。结果表明：这5种药物对美人鱼发光杆菌均有不同程度的抑制作用,且每种药物单独使用时以阿米卡星的抑菌效果最好。在6种药物组合中,氟苯尼考和黄柏组合及阿米卡星和黄柏组合在抑菌方面表现为相加作用;氟苯尼考和夏枯草组合及氟苯尼考和女贞子组合在抑菌方面表现为无关作用;阿米卡星和女贞子组合及阿米卡星和夏枯草组合在抑菌方面表现为颉颃作用。说明中西药联用对美人鱼发光杆菌具有一定程度的抑制作用。

不同中草药饲料添加剂对银狐毛皮品质及血液生化指标的影响

为了探索中草药饲料添加剂对银狐毛皮品质和血液生化指标的影响,试验将48只体重相近、公母各半的青年银狐随机分为3组,每组16只。1组为对照组,饲喂基础日粮,2组和3组在基础日粮中分别添加1%的中草药大肠杆菌病预防剂和1%的中草药免疫增强剂,试验期40 d。试验期结束后,分别测定各组银狐的干皮长、干皮宽、干皮重和臀部、肩部、背部、腹部的针毛长和绒毛长,以及血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、溶菌酶(LZM)、总氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(T-CHO)、钙(Ca)、磷(P)和碱性磷酸酶(AKP)水平。结果表明:2个试验组的干皮长、干皮宽和干皮重均高于对照组(P>0.05);除3组的腹部绒毛长度略低于对照组外,其余部位针、绒毛长试验组均高于对照组,个别达显著性差异(P<0.05)。3组毛皮品质大部分指标为最好。血液生化指标分析结果显示,2个试验组在免疫、抗氧化、蛋白代谢、脂类代谢、钙磷代谢等方面均一定程度优于对照组,其中3组的IgA、IgM、TP、ALB、T-CHO、AKP等指标与对照组均呈显著性差异(P<0.05)。说明两种中草药饲料添加剂不仅可以改善银狐毛皮品质,还能提高银狐的免疫能力及抗氧化能力,并能提高银狐对蛋白质、脂类、钙磷的吸收代谢能力,其中添加1%的中草药免疫增强剂效果最好。

关注十大关系 建设“生命工程”——当前成品油销售企业应注意把握好的几个问题

终端销售是石油石化企业的“生命工程”,如何建设与管理好销售企业是摆在企业领导人面前的一个紧迫任务,对于处在销售一线的人员来说,应该正确处理好以下十大关系。核心竞争力与销售结构石油销售企业核心竞争力的全部内容在于加油站和油库组织功能的发挥,关键就是控制好销售结构。企业销售结构如何布局应由企业核心竞争力决定。因此,首先要把销售重点放在加油站销售上,零售量要力争达到经营总量的80％以上。