间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量

目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果该方法的线性范围为15.6～500ng/m L,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。

柴胡皂苷a人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的合成柴胡皂苷a(SSa)免疫抗原和包被抗原,为柴胡皂苷a单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立奠定基础。方法采用高碘酸钠氧化法分别合成柴胡皂苷a免疫抗原(SSa-BSA)和包被抗原(SSa-PLL);用紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功,并免疫小鼠,通过ELISA方法测定血清中抗体效价,通过间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测抗体特异性。结果薄层色谱法检测结果显示柴胡皂苷a与BSA/PLL偶联成功。小鼠经SSa-BSA免疫后,体内可产生抗柴胡皂苷a抗体,效价1∶80 000以上。结论与其他人工抗原的鉴定方法相比,薄层色谱法具有独特的优势。成功合成的柴胡皂苷a人工抗原可用于下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立。

猪去氧胆酸人工抗原的合成及鉴定

目的合成并鉴定猪去氧胆酸(hyodeoxycholic acid,HDCA)人工抗原,为进一步制备其特异性抗体,建立相应的免疫分析方法,并为其应用到药理药效的研究中奠定基础。方法采用混合酸酐法合成HDCA人工抗原(HDCA-牛血清白蛋白),包被原(HDCA-鸡卵清白蛋白);应用硅胶薄层色谱法鉴定人工抗原、包被原合成是否成功;应用人工抗原与弗氏佐剂的乳化液背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠4次后,尾尖取血,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性。结果薄层色谱法检测结果表明,HDCA与牛血清白蛋白(BSA)偶联成功;小鼠抗血清效价大于1∶8 000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与HDCA产生特异性结合。抗血清和甘草酸、黄芩苷、栀子苷等与其常配伍应用的中药化合物均无交叉反应,但与胆酸交叉反应率为90%。结论成功合成了HDCA-BSA,并可诱发小鼠产生相应特异性抗体。为进一步制备抗HDCA单克隆抗体及HDCA药理作用靶点的研究奠定了基础。

紫铆素人工抗原的合成与鉴定

目的人工合成紫铆素(butin)的完全抗原并进行鉴定。方法采用氯乙酸钠(SMCA)与紫铆素中的羟基反应形成羧甲基醚衍生物(紫铆素-SMCA),再通过羧基与载体蛋白(BSA、OVA)偶联形成完全抗原,以TLC法鉴别是否偶联产生新的大分子化合物,并以紫外扫描分析完全抗原的偶联比率,将得到的免疫原紫铆素-BSA按免疫程序免疫Balb/c小鼠。结果 TLC显示已经形成新的大分子化合物;紫外扫描法测定紫铆素-BSA的偶联比为6∶1,紫铆素-OVA的偶联比为5∶1。采用间接酶联免疫测定,产生的抗血清的稀释度可以达到1∶4 000。结论经过TLC法、紫外扫描法和免疫方法鉴定,成功合成了紫铆素人工抗原。

基于抗大豆苷单克隆抗体的Ic-ELISA方法的建立

目的：建立大豆苷的快速免疫分析检测方法。方法：该研究通过大豆苷单克隆抗体与葛根素、芦丁等共9种中药小分子的交叉反应证明该抗体具有特异性,并以制备出的大豆苷特异性单克隆抗体为基础,建立了大豆苷间接竞争酶联免疫分析方法（Ic-ELISA）,并用此方法检测大豆中大豆苷的含量。结果：抗体与葛根素的交叉反应率为115%,与芦丁、甘草酸、栀子苷等小分子无交叉反应。该方法线性范围为10~10 000 ng·m L^-1,孔内差和板间差均小于6.3%,平均回收率为105.4%%。采用该方法检测大豆中大豆苷的含量,所得结果与HPLC法的结果一致。结论：该研究建立了大豆苷的Ic-ELISA方法,可为含大豆苷的中药及复方的质量控制分析提供更加快速灵敏的检测方法。

人参皂苷Re人工抗原的合成及单克隆细胞株的筛选

目的合成并鉴定人参皂苷Re(GRe)人工抗原,用于单克隆抗体的制备。方法采用高碘酸钠氧化法合成人参皂苷Re人工免疫抗原(GRe-BSA)和人工包被原(GRe-OVA);利用薄层色谱法及紫外光谱法鉴定人参皂苷Re人工免疫抗原和人参皂苷Re人工包被原;利用人参皂苷Re人工免疫抗原多次免疫BALB/c小鼠后,通过间接ELISA法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性。采用PEG法诱导小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,有限稀释法进行单克隆细胞株的筛选。结果紫外光谱和薄层色谱法检测结果表明,人参皂苷Re与BSA/OVA偶联成功;小鼠抗血清效价大于1∶60 000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗人参皂苷Re抗体可与人参皂苷Re产生特异性结合。有限稀释法筛选出能分泌抗人参皂苷Re抗体的单克隆细胞株2F4-3H10。结论成功合成了人参皂苷Re人工免疫抗原和人参皂苷Re人工包被原,并可诱发小鼠产生相应特异性抗体;筛选出了人参皂苷Re单克隆细胞株,可用于腹水的大量制备及免疫组化技术的建立。

透皮特性结合正交试验优选麻芥平喘巴布剂有效组分的提取工艺

目的:优选麻芥平喘巴布剂的有效组分提取工艺。方法:以盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷的提取率和透过率为综合评价指标,采用正交试验优选提取工艺,提取物用Franz扩散池法进行体外透皮试验,HPLC测定伪麻黄碱、苦杏仁苷含量。结果:麻芥平喘有效组分的最佳提取工艺为加6倍量80%乙醇回流提取2次,每次1.5 h。结论:结合药效学指标优选的提取工艺符合实际应用需求,为麻芥平喘巴布剂的临床推广提供依据。

婴幼儿外伤后脑梗死65例临床分析

目的分析婴幼儿外伤后脑梗死的临床特点,探讨其发生机制和治疗方法。方法总结分析65例患儿的临床资料。结果婴幼儿外伤后脑梗死好发于单侧基底节区,CT病灶多呈类似圆形或卵圆形的低密度区,占位效应不严重或不明显,本组均痊愈。结论头外伤史明确,但较轻,多为偏瘫或单瘫。基底节区供血的动脉易受损害的解剖生理特点及婴幼儿自主神经功能不健全是其主要发生机制。应尽早给予钙通道阻滞剂、神经营养剂、改善脑血液循环药物、小剂量脱水剂和激素,配合早期开始功能锻炼,即可获得较好的效果。

闭合复位PFNA内固定治疗老年股骨转子间骨折45例

目的：观察闭合复位PFNA内固定治疗老年股骨转子间骨折的临床疗效。方法：2012年1月至2014年6月,采用闭合复位股骨近端防旋髓内钉（PFNA）内固定治疗45例老年股骨转子间骨折患者,术后随访临床疗效根据髋关节Harris评分标准进行评定。结果：本组45例患者均进行了6-18月的随访,所有骨折均达骨性愈合,愈合时间8-12周,无骨折不愈合、髓内钉断裂、感染、下肢深静脉血栓形成、肺栓塞等并发症。其中优28例,良12例,可5例。结论：PFNA是与股骨近端解剖较匹配的髓内系统,闭合复位微创置入PFNA内固定是治疗各种类型老年性股骨转子间骨折的理想方法之一。