H5N1亚型人禽流感病毒A/Anhui/2/2005株反向遗传操作系统的建立

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致;动物试验证实,R-AH05保持了W-AH05的对BALB/c小鼠呈高致病力的特性,其MLD50分别为1.5log10EID50和1.2log10EID50。R-AH0与W-AH05分别以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度基本相同。由此可见,R-AH05保持了W-AH05的生物学特性,从而为进一步研究人源禽流感病毒的致病机理及跨宿主传播机制等提供了操作平台。

重组禽流感病毒灭活疫苗(H9N2亚型,Re-9株)对2010年～2011年流行病毒株免疫效力的研究

为评价H9N2亚型重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗Re-9株的免疫效力,本研究选取2010年～2011年分离的5株H9N2亚型AIV进行攻毒保护实验。这5个分离株均为类A/CK/Beijing/1/94病毒株,其HA和NA基因与Re-9株及其亲本株的同源性介于90.6%～97.5%和88.1%～98.7%之间,其抗原相关值在66.67%～100%之间。将Re-9株为种毒制备灭活疫苗,免疫4周龄SPF雏鸡后,3周时平均HI抗体效价达9.5 log2;在免疫后3周以2×107EID50的剂量攻击亲本株和5株流行病毒株,攻毒后采集3 d、5 d、7 d的拭子,免疫组拭子样品病毒检测均为阴性;对照组3 d、5 d拭子病毒检测的阳性率均在80%以上,7 d的阳性率在60%以下。以上结果表明灭活疫苗Re-9株抗原针对性强,而且具有良好的免疫效力,能够抵御近年来分离的H9N2亚型AIV,是理想的H9N2亚型禽流感疫苗株。

H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的构建

为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株Re-9。该疫苗候选株既具有很好的抗原性又具有较高的鸡胚增殖特性,从而为有效防控H9N2亚型禽流感的流行提供了技术储备。

生长抑素免疫阳性细胞在莱芜黑山羊消化系统的分布规律

采用免疫组织化学SABC法,探究莱芜黑山羊消化系统生长抑素(SS)免疫阳性细胞的形态结构和分布规律。消化道中SS免疫阳性细胞形态多样,大多呈椭圆形和锥体形,主要分布于幽门腺区,而贲门腺区、结肠、盲肠和直肠中未见阳性细胞。胰腺中SS免疫阳性细胞数量较多,主要分布于胰岛的外套层,在胰岛的中央和外分泌部的腺泡细胞之间也有少量阳性细胞。结果表明:消化系统SS阳性细胞出现最多的部位是幽门腺区和胰岛的外套层。

CHD9:一个新的与流感病毒PA蛋白相互作用的宿主因子

PA蛋白是禽流感病毒(AIV)聚合酶的组成部分,对AIV的复制具有重要作用。为鉴定家鸭体内与AIV PA蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究利用酵母双杂交系统,以表达A/goose/Hubei/65/05(H5N1)AIV PA蛋白的重组质粒为诱饵,筛选家鸭脑组织cDNA文库,鉴定得到一个cDNA片段,经测序分析表明,该cDNA片段编码蛋白为色素域解旋酶DNA结合蛋白9(CHD9)。将重组诱饵质粒pDEST32-PA与捕获的鸭cDNA重组质粒共转化MaV203受体菌,进行X-gal显色反应检测,分析结果显示,菌落可以迅速变蓝,并且菌落在SC-Leu-Trp-His+3AT 3种营养缺陷培养基平板上生长良好。证明CHD9与PA蛋白在酵母双杂交系统中具有较强的相互作用。CHD9的初步鉴定为研究AIV在机体中的复制过程奠定了基础。

基于创新能力提升的基因工程教学改革探讨与实践

基因工程是现代生物技术工程的核心课程,也是生物制药专业学生的一门必修课程。结合浙江理工大学基因工程课程的改革与实践的经验,本文从教学理论、教学方法及教学形式等方面对浙江理工大学生物制药专业基因工程课程改革进行了系统的梳理和总结,初步建立了基于创新能力提升的基因工程理论教学、实验实践及工厂参观实习的教学体系。

新型冠状病毒入侵的宿主因子及潜在抗病毒药物研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种新发高传染性的冠状病毒。因其编码有限的病毒蛋白,SARS-CoV-2需要借助多种宿主因子完成其生命周期,而大多数参与其中的宿主因子及作用机理仍不明确。因此,研究参与SARS-CoV-2复制周期的宿主因子及作用机理,将有助于我们对病毒生命周期的认识及寻找抗SARS-CoV-2药物的作用靶点,从而可以帮助人们更加有效地防控新冠疫情。本文归纳了参与SARS-CoV-2复制周期中入侵的宿主因子,对全面理解SARS-CoV-2致病的分子机制、病毒感染的快速诊断及抗病毒新药研发具有重要的意义。

跨膜丝氨酸蛋白酶2结构与功能的研究进展

跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2,TMPRSS2)在人类疾病方面起着关键的作用。其一,TMPRSS2在介导癌症,包括前列腺癌、肺癌和结直肠癌的发生、发展中具有促进作用;其二,TMPRSS2在介导病毒感染,包括流感病毒、冠状病毒和轮状病毒中具有刺激病毒粒子活化、增强感染等作用。鉴于TMPRSS2在生理和病理方面的重要作用,结合目前可查阅的相关研究成果,该文从结构、功能等方面对TMPRSS2的研究进展进行归纳与总结,这将对今后有关TMPRSS2的研究工作,包括以TMPRSS2作为靶点的新药、疫苗等的研发具有重要的参考意义。