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非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备
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作者 陈桂娥 容芳 +7 位作者 冯夏宁 孙荣航 马绍钊 郝文茜 叶子安 刘郁夫 李作生 陈瑞爱 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4646-4654,共9页
【目的】表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白,并制备其单克隆抗体。【方法】构建原核表达载体pET-28b-p72,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行诱导表达和蛋白纯化;用纯化后的p72蛋白免疫BALB/c小鼠,将... 【目的】表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白,并制备其单克隆抗体。【方法】构建原核表达载体pET-28b-p72,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行诱导表达和蛋白纯化;用纯化后的p72蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合并制备单克隆抗体,通过间接ELISA法和亚克隆筛选出分泌抗体的阳性杂交瘤细胞;通过小鼠抗体类型检测试剂盒检测抗体类型;通过体内诱生法制备抗ASFV p72蛋白的单克隆抗体腹水,使用饱和硫酸铵沉淀法进行抗体纯化,通过间接ELISA法、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting检测单克隆抗体效价和特异性。【结果】ASFV p72重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,将纯化的p72蛋白制备单克隆抗体,获得4株分泌IgG1抗体的单克隆细胞株,分别命名为6F8、7C3、8H7和9G2。间接ELISA结果显示,6F8与8H7细胞株分泌的抗体效价均为1∶6400,7C3与9G2细胞株的抗体效价均为1∶12800,且4株细胞株分泌的抗体与p72蛋白反应结果均呈阳性,与猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)反应均呈阴性。4株单克隆细胞株分泌的抗体均能与p72真核蛋白发生特异性反应。【结论】本研究成功制备了4株能稳定分泌与ASFV p72蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究ASFV p72蛋白的功能以及非洲猪瘟的防控和诊断建立了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 原核表达 单克隆抗体
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非洲猪瘟病毒B602L蛋白的真核表达及多克隆抗体的制备
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作者 刘郁夫 林晓慧 +3 位作者 郝文茜 冯夏宁 欧阳征亮 陈瑞爱 《中国兽药杂志》 2023年第10期1-8,共8页
为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆... 为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆虫细胞Sf9,拯救重组B602L基因的杆状病毒。经间接免疫荧光和western blots鉴定结果显示,B602L重组蛋白与His标签抗体、非洲猪瘟标准阳性血清均能发生特异性反应,并且B602L重组蛋白可以细胞分泌上清的形式进行表达。通过His镍株亲和纯化的方式纯化重组蛋白,B602L蛋白大小约70 ku,与预期相符。将B602L重组蛋白与弗氏佐剂配比免疫BALB/c小鼠,制备小鼠多克隆抗体,经间接ELISA检测,该抗体效价可达1∶512000,并且与B602L重组蛋白具有良好的反应性。本研究可为进一步研究非洲猪瘟B602L蛋白的结构与功能、研制非洲猪瘟诊断制品提供生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 B602L 真核表达 多克隆抗体
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Multilevel atomic Ramsey interferometry for precise parameter estimations
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作者 冯夏宁 韦联福 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2021年第12期321-328,共8页
Multi-path(or multi-mode)entanglement has been proved to be a useful resource for sub-shot-noise sensitivity of phase estimation,which has aroused much research interest in quantum metrology recently.Various schemes o... Multi-path(or multi-mode)entanglement has been proved to be a useful resource for sub-shot-noise sensitivity of phase estimation,which has aroused much research interest in quantum metrology recently.Various schemes of multi-path interferometers based on optical systems have been put forward.Here,we study a multi-state interferometer with multilevel atoms by projective measurements.Specifically,we investigate its ultimate sensitivity described by quantum Fisher information theory and find that the Cramer-Rao bound can be achieved.In particular,we investigate a specific scheme to improve the sensitivity of magnetometery with a three-state interferometry delivered by a single nitrogen-vacancy(NV)center of diamond with tailor pulses.The impacts of imperfections of the atomic beam-splitter,described by the three-level quantum Fourier transform,on the sensitivity of phase estimation is also discussed. 展开更多
关键词 quantum metrology multi-path interferometers quantum measurement
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副猪嗜血杆菌毒力基因及其致病机制研究进展 被引量:2
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作者 叶俊贤 刘郁夫 +1 位作者 冯夏宁 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2021年第11期90-94,共5页
副猪嗜血杆菌是养猪场重要的细菌性病原之一。副猪嗜血杆菌的致病机制研究主要集中于毒力基因的功能解析和细菌与宿主之间相互作用方面。近年来随着基因组学数据的不断完善,以及对细菌致病机制科学认识的不断深入,科研人员在副猪嗜血杆... 副猪嗜血杆菌是养猪场重要的细菌性病原之一。副猪嗜血杆菌的致病机制研究主要集中于毒力基因的功能解析和细菌与宿主之间相互作用方面。近年来随着基因组学数据的不断完善,以及对细菌致病机制科学认识的不断深入,科研人员在副猪嗜血杆菌致病机制研究方面取得不少进展。论文对最近几年新报道的副猪嗜血杆菌膜蛋白、转录调控机制以及副猪嗜血杆菌与宿主之间互作的相关研究做一综述,可为副猪嗜血杆菌新型防控技术和新药研发提供参考。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 毒力基因 致病机制
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