bFGF小分子干扰RNA诱导胶质瘤U251细胞凋亡作用的研究

目的:初步探讨以小分子干扰RNA沉默碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导胶质瘤细胞系U251凋亡的机制。方法:将U251细胞分为正常对照组、空载体组和实验组,按4×105个细胞每孔接种于6孔细胞培养板,培养24h后,空载体组和实验组按MOI=50分别进行空载体腺病毒(rAd5-null)和含有bFGF小分子干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒(rAd5-bFGF)转染,转染72h后检测各组细胞的凋亡及细胞周期变化情况及其相关蛋白的表达。结果:与正常对照组、空载体组比较,实验组U251细胞经转染bFGF-siRNA后出现了明显的细胞凋亡(P<0.05),但细胞周期未见变化(P>0.05);Westernblot结果显示,实验组U251胶质瘤细胞经转染bFGF-siRNA72h后,bFGF蛋白表达明显降低,同时STAT3及Bcl-2蛋白表达降低,Bax及Caspase-3蛋白表达增强。结论:bFGF小分子干扰RNA能够诱导U251细胞凋亡,其作用可能是通过调节STAT3信号转导通路实现的。

LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr

目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。

不良心境与冠心病患者血清氧化低密度脂蛋白相关性

目的 探讨不良心境对冠心病（CHD）患者血清氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）浓度影响，及其相关性。方法110例住院冠心病患者和40名健康体检者（对照组）作为研究对象。用焦虑白评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）、焦虑状态-特质问卷（STAI）制定不良心境标准。以不良心境标准为分组依据，将入组的CHD患者分为严重不良心境组（31例）、一般不良心境组（37例）、无明显不良心境组（42例）。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测CHD患者血清ox-LDL的水平。用t检验和Pearson直线相关分析法进行统计分析。结果 1．严重不良心境组、一般不良心境组、无明显不良心境组CHD患者血清OX-LDL水平[分别为（0．63±0.20）mg／L，（0．52±0．14）mg／L，（0．51±0．11）mg／L]明显高于正常对照组[（0，44±0．19）mg／L]，严重不良心境组CHD患者的血清ox-LDL浓度明显高于一般不良心境组、无明显不良心境组，差异有显著性（P〈0．05）。一般不良心境组、无明显不良心境组血清ox-LDL差异无显著性（P〉0．05）；2．严重不良心境组CHD患者血清ox-LDL浓度与不良心境显著正相关（r=0．398，P〈0．05）。3．冠心病患者血清ox-LDL与总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）浓度呈显著正相关（r=0．395-0．459，P〈0．05），与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）呈显著负相关（r=-4．07，P〈0．05）。结论不良心境能促进CHD的发生发展，是诱发CHD的危险因素。

脑死亡判定辅助技术进展

脑死亡诊断主要依靠临床判定。对于临床判定困难者，需要辅助判定手段加以确认。脑死亡的辅助判定标准随着科学技术的提高在不断的变化发展，但主要还是围绕脑电和脑血流的检测。目前在应用辅助技术确认脑死亡方面还存在许多争议，当一些学者质疑这些检测手段的价值时，另一些则认为检测的技术流程更加值得关注［1］。至今在世界各国的脑死亡确认试验中还没有任何一种检测技术，同时具备可靠性高、床旁可行、特异性高、敏感性高且不受药物影响等优点［2］。脑死亡确认还需要多种辅助判定技术联合，目前全世界各国尚未形成统一的脑死亡辅助确认标准［3］。当前应用较普遍的辅助判定技术有脑电图（EEG）、体感诱发电位（SEP）、经颅多普勒超声（TCD）、血管造影（DSA）和CT血管成像（CTA）等。2013年国家卫生和计划生育委员会（原卫生部）脑损伤质控评价中心发布了《脑死亡判定标准与技术规范（成人质控版）》，推荐应用3种辅助判定技术确认脑死亡，即正中神经短潜伏期体感诱发电位（SLSEP）、EEG和TCD［4］。

中国农大小型猪经隐动脉股动脉穿刺方法

目的探讨小型猪经隐动脉股动脉穿刺方法。方法16只中国农大小型猪,保定麻醉后,切开局部皮肤,暴露隐动脉,经隐动脉穿刺,置入4F桡动脉鞘,在Cook超滑泥鳅导丝导引下将椎动脉造影管经隐动脉置入股动脉。结果16只中国农大小型猪用此方法穿刺25次,成功25次,成功率100%,平均耗时约15min。结论经隐动脉股动脉穿刺法成功率高、创伤小、操作简便、省时、可多次操作,能充分满足小型猪血管内操作要求。

硫化孕烯醇酮对老年大鼠学习记忆功能的影响

目的探讨神经甾体硫化孕烯醇酮对老年大鼠学习和记忆能力的影响。方法利用Y 迷宫测定 2 4月龄老年大鼠的学习和记忆功能。结果⑴学习能力测试 :5mg/kg、10mg/kg组老年大鼠Y 迷宫辨别学习达到标准的训练次数为 ( 2 5 .86± 2 .98)次、( 2 2 .85± 5 .42 )次 ,与对照组 [( 3 6.48± 4.2 6)次 ]比较 ,差异具有显著性 ( P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;每天错误次数与对照组比较差异有显著性 ( P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。⑵记忆保存测试 :5mg/kg、10mg/kg组老年大鼠达到标准所需训练次数为 ( 6.14± 4.17)次、( 5 .73± 1.96)次 ,与对照组 [( 14 .46± 4.2 2 )次 ]比较 ,差异具有非常显著性 (P <0 .0 1)。但 0 .5mg/kg、1.0mg/kg两组的学习和记忆测试成绩与对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论神经甾体硫化孕烯醇酮剂量依赖性地改善老年大鼠的学习和记忆功能。

几种心理行为干预技术的进展与应用

从促进心理与行为干预技术的应用角度出发,本期组织了“心理行为干预”重点号,主要内容为心理与行为干预技术的临床应用报告。为了让读者了解近十几年来心理与行为干预治疗技术的进展和发展趋势,本文选择几个与心理行为干预治疗相关的问题,就其技术要点、学术进展及存在的问题、研究思路等作简短述评,并继续组织相关稿件,安排在以后各期的“方法技术”栏目中刊出,期望对该工作的开展有所指导。

冠心病心功能不全患者家庭关怀度与生活质量的相关性研究

目的探讨冠心病心功能不全患者家庭关怀度与生活质量的相关性。方法对符合诊断标准的冠心病心功能不全患者,以家庭关怀度指数问卷(APGAR)评分结果进行分组,0～6分为家庭功能障碍组(障碍组),7～10分为家庭功能良好组(良好组)。分别比较其心功能不全生活质量量表(MLHFQ)评分情况,并进行相关分析。结果 70例冠心病心功能不全患者中,家庭功能良好者41例,APGAR评分为(8.21±0.74)分,家庭功能障碍者29例,APGAR评分为(4.27±0.58)分,两组评分间差异有统计学意义(P<0.05)。冠心病心功能不全患者APGAR各因子评分均明显高于对照者。家庭功能良好组患者MLHFQ情绪领域、其他领域因子评分及总分,均明显低于障碍组,差异有统计学意义(P<0.05),而两组身体领域评分无明显差异。Pearson相关分析显示,冠心病心功能不全患者AP-GAR与MLHFQ多个因子评分及总分呈负相关(P<0.05)。结论家庭关怀度与冠心病心功能不全患者生活质量密切相关。

冠心病患者焦虑情绪与APOE基因多态性

目的:探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)患者焦虑情绪与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的关系。方法:对符合1979年世界卫生组织CHD诊断标准的107例冠心病患者,进行汉密顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA)、焦虑自评量表(Self-Rating Anxiety Scale,SAS)测评,依焦虑评分情况将患者分为CHD伴焦虑组(焦虑组)、CHD不伴焦虑组(无焦虑组),选择53例健康人为对照组。于入院2日内留存血样,以Hhal限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳确定ApoE基因多态性,采用生物化学方法测定血清血脂。结果:焦虑组ε4等位基因频率高于无焦虑组和对照组(26.0%vs.10.4%,26.0%vs.13.6%;P=0.021,0.004)。焦虑组E4/4基因型频数高于无焦虑组(4vs.0,P=0.032)。焦虑组E3/4基因型频数高于对照组(17vs.8,P=0.018)。无焦虑组ε4等位基因频率高于对照组,但差异无统计学意义(13.6%vs.10.4%,P=0.802)。CHD组携带ε4等位基因患者HAMA[(13.2±5.2)vs.(9.2±6.5)]、SAS评分[(42.3±7.7)vs.(37.1±8.3)]及总胆固醇[(5.4±1.1)mmol/Lvs.(4.8±1.3)mmol/L]、低密度脂蛋白水平[(3.6±1.0)mmol/Lvs.(3.1±1.1)mmol/L]均高于非携带ε4等位基因者(P<0.05)。结论:冠心病患者的焦虑情绪可能与ApoE基因多态性具有一定关系。ApoEε4等位基因可能是CHD患者焦虑情绪的危险因素。

改良猪脑死亡模型的建立

目的建立一种稳定、可靠的猪脑死亡模型,为研究脑死亡模型建立过程中、脑死亡判定后的脑组织病理改变及器官移植免疫等变化提供一个更加稳定的动物模型。方法以经典的硬膜外颅内加压法为基础,在长白猪颅内置入Codman有创颅内压监测探头,在实时监测颅内压变化情况下,根据颅内压与平均动脉压(MAP)的关系进行间断颅内加压建立脑死亡模型。结果 12例实验用长白猪,1头死于麻醉意外,余11头均成功诱导脑死亡模型。经有效呼吸循环支持可维持脑死亡模型(31.3±4.7)h。通过经颅多普勒、脑电图、心电、MAP等监测显示,脑死亡模型制作过程中各参数变化平稳,脑死亡判定后,动物模型可长时间维持。结论在颅内压监测条件下建立猪脑死亡动脉模型的方法稳定可靠,易于标准化,可为脑死亡模型建立过程中及脑死亡判定后的脑功能及器官移植免疫等研究提供更加稳定的载体。

4D-CTA在脑血管疾病诊断中的应用进展

4D-CTA(4-dimensions-computed tomography angiography)是近年来出现的一种脑血管疾病影像学检查技术,由于其在脑血管疾病诊断领域的突出优势,逐渐成为数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)的非侵入性替代方案,越来越多地用于临床实践。现将其在脑血管疾病诊断中的应用进展综述如下。

急诊颈动脉内膜剥脱术在颈动脉源性急性缺血性脑卒中治疗中的应用研究进展

颈动脉源性急性缺血性脑卒中(AIS)是脑卒中的一个重要类型,其治疗方式主要包括颈动脉内膜剥脱术(CEA)和颈动脉支架置入术(CAS)。AIS行急诊CEA治疗尽早开通闭塞的颈动脉是有效改善脑血流的方式,越早开通重建血流的机会越大;对于重度狭窄次全闭塞的患者,在等待手术期间存在较高的再发生梗死的风险;在等待手术期间患者心理及精神存在巨大压力。急诊CEA可减少脑组织缺血时间,且具有更高的开通率,更低的过度灌注出血发生率。与择期CEA比较,急诊CEA在AIS中应用的安全性相当;与急诊CAS比较,急诊CEA在AIS中应用的安全性更高。另外,转流管的应用可为急诊CEA的安全性提供部分保障。

脑灌注成像技术在急性缺血性脑卒中血管再通治疗中的应用

急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)目前在我国呈高发态势,严重影响着人们的健康和生命安全[1]。2015年,新英格兰杂志相继发表了MR-CLEAN[2]、EX TEND-IA[3]、ESCAPE[4]、SWIFT PRIME[5]和REVASCAT[6]等5个大型多中心前瞻性随机对照临床试验结果,证实了机械取栓治疗颅内大动脉急性闭塞性AIS安全有效。

学习与记忆——脑与行为研究的前沿

学习与记忆是大脑主要的高级神经功能活动过程.传统的实验心理学认为,学习是指获得经验,记忆则指经验的印记、认知与回记.学习过程是神经系统有关部位暂时联系的建立,记忆是其痕迹的保持与恢复.近代生理心理学则进一步认为,学习是指经验信息(行为习惯、感知、思维)的获得或发展,记忆是经验信息的储存和提取(再现),学习与记忆是两个不同又密切相关的神经活动过程.近十几年,学习记忆认知神经科学的研究成为脑科学、心理学和精神病学研究的热点.学习记忆研究广泛采用认知心理学、分子生物学和其他神经科学的各种方法,对人类"脑与行为"这一重大问题展开深入的、以问题为中心的研究,并取得了丰硕的成果.实验心理学和行为心理学也是长期致力于各种心理活动的研究和观察,从对人类行为和复杂心理学活动的内视(introspection)研究,转向定量化地对一些可以观察的心理和行为进行研究,如对知觉、记忆、复杂问题解决能力,甚至意识本身进行研究,比如将复杂的行为和心理功能分解为不同的认知亚成分(模块,modularity),极大地推动了心理学的发展.现人们已可以对感觉、运动的表象等内在的心理活动进行直接的实验研究,加深了对各种认知和心理内在活动的理解;行为学的实验建立了各种心理行为的认知模型,加速了学习记忆的研究,揭开了大脑工作机制研究的新开端.

脑侧支循环评估在急性缺血性卒中机械取栓中的应用进展

脑侧支循环对急性缺血性卒中患者缺血半暗带区存活时间至关重要,侧支循环状态与病情进展、血管内治疗后血管再通率、临床预后均密切相关,有必要了解脑侧支循环类型、特点、影像学评价方法及其在急性缺血性卒中机械取栓中的应用进展。

卡氮芥-聚乳酸缓释剂生物相容性研究

目的 :研究卡氮芥 (BCNU) -聚乳酸缓释剂生物相容性。方法 :将BCNU -聚乳酸缓释膜片 (BCNU -PLA组 )及聚乳酸缓释膜片 (PLA组 )分别植入2组Wistar大鼠的额叶脑组织内 ,观察其对脑、心、肝、脾、肺、肾及血液系统的影响。结果 :BCNU -PLA组缓释膜片植入后造成的局部脑水肿持续7d以上 ,术后14d仍有2只鼠轻度脑水肿 ,但与PLA组比较差别无统计学意义。其他器官及血液系统未见明显异常。聚乳酸缓释膜片植入后 ,除早期手术造成的轻微脑水肿外 ,其他器官与系统无异常。结论 :BCNU -聚乳酸缓释剂安全、可靠 ,生物相容性良好。