SRAP与TRAP分子标记及其在植物研究中的应用

文章详细阐述了SRAP和TRAP标记的原理、引物设计、扩增检测条件及特点,综述了两种标记近年来在植物遗传多样性、遗传图谱构建及重要性状基因标记研究等方面的最新应用,并对其应用前景进行了展望.

高校生物实验室危险化学品安全管理现状及对策研究

高校生物实验室是师生开展实验教学、科研工作的重要场所。生物实验室涉及到许多具有易燃易爆、腐蚀性及剧毒性等特点的危险化学品。目前,高校在危险化学品的存放、管理和使用等方面存在诸多问题,有待进一步解决。针对实验室潜在的危险化学品安全隐患,建议高校从健全管理制度、设立安全管理委员会、加强安全教育、规范储存仓库、完善应急预案等方面来提高高校生物实验室的规范性和安全性。

分子生物学实验教学改革初探

分子生物学实验是生物专业本科生的一门专业必修课。根据我校本科生教学课程的情况,就课程内容更新、实验准备、实验时间和内容安排、教学方法改进、学生动手能力和科研创新意识培养以及实验考核方式完善等方面的教学经验进行了探索。

基于虚拟仿真技术的高校分子生物学实验教学改革

本文通过探讨传统分子生物学实验教学存在的问题,提出将虚拟仿真技术引入分子实验教学改革的必要性。将虚拟仿真实验与实际实验操作有机结合,充分发挥各自教学模式的优势,丰富教学内容和方式,充分调动学生学习的积极性,提高实验教学质量。

高等师范院校本科分子生物学实验教学改革与实践

文章对近年来高等师范院校本科分子生物学实验教学过程中存在的问题进行了探讨,并就资金投入、实验教学内容、教学方法提出了具体的改革意见。

药用菊花SCoT-PCR反应体系的正交优化

为进一步开发利用药用菊花种质资源,为药用菊花的遗传多样性及分子鉴定研究提供技术支持,建立并优化药用菊花的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系,在方差分析基础上,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响药用菊花SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物5个因素进行优化试验,并对PCR结果进行分析。建立了药用菊花SCoT-PCR最佳反应体系(20μL):模板DNA 10 ng,引物0.8μmol·L-1,dNTPs 0.2 mmol·L-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,Taq酶1.5 U,SCoT反应的影响因素依次为:Taq酶>引物>dNTPs>Mg2+>模板DNA。优化的SCoT-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,该体系的建立为药用菊花品种遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种研究奠定了基础。

31种石斛属植物的RAPD遗传多样性分析

采用随机扩增多态性DNA技术对31种石斛属植物的遗传多样性进行分析.从100条RAPD引物中共筛选出18条引物,18条引物共扩增出1 802条带,其中多态性位点有261个,多态性比为99.2%.UPGMA聚类结果显示,基因型之间的相似系数分布于0.6420.838之间,31种石斛属植物样品分为7类.聚类分析显示供试样品完全被区分开,实验结果与传统形态分类相似,但又有一定区别.丰富稳定的扩增多态性证明RAPD标记技术可以用于石斛属植物的物种鉴定和遗传多样性研究.

反转录转座子分子标记及其在植物研究中的应用

反转录转座子以高拷贝在植物基因组中广泛分布,具有高度的异质性,可作为分子标记对植物基因组进行研究.文章对SSAP、IRAP、REMAP及RBIP4种基于植物反转录转座子开发的分子标记技术的原理、技术流程、特点及其在植物研究中的应用进行了概述.

兰属植物遗传资源核心种质构建探讨

兰属植物遗传资源是兰属植物遗传与育种研究的基础材料,由于其存在数量庞大、生境地域复杂、利用效率低、优异基因筛选困难等问题,给兰属资源的收集、保存、研究和利用带来了困难,因此,尝试开展兰属植物遗传资源核心种质研究是十分急迫和必要的.借鉴农作物成功的经验,本文基于形态、农艺性状和SSR分子标记数据对兰属植物核心种质基本内涵、构建核心种质的步骤和检测指标与评价方法等方面进行了阐述,并探讨其存在的问题和发展方向,以期为兰属植物核心种质的构建和种质创新与利用提供理论参考.

HPLC法测定苦蘵中酸浆苦味素D的含量

建立了一种测定苦蘵中酸浆苦味素D含量的高效液相色谱法.采用Waters Symmetry C_(18)(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以流动相为乙腈-水(25∶75);检测波长为227nm;柱温为25℃.结果表明:酸浆苦味素D浓度在10~100μg·mL^(-1)浓度范围呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率(n=3)为98.7%,RSD为1.8%.说明本方法简便、准确、重复性好,可用于苦蘵药材的质量控制.

茄科植物叶绿体基因组研究进展

叶绿体基因组(cpDNA)是与光合作用直接相关的细胞器,其在物种鉴定及系统进化研究中的应用价值已经受到研究者们的广泛关注和逐步认可.茄科作为植物界重要的一科,涵盖了诸多重要的食用及药用植物.本文在整理近年来茄科叶绿体基因组相关研究的基础上,对目前茄科植物叶绿体基因组测序技术的发展、研究现状及今后的发展趋势及应用前景进行了综述.

乔松根特异启动子PmPgPR10驱动Na^+/H^+逆转运蛋白提高转基因水稻的耐盐性

为获得抗盐水稻,将小麦液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因TaNHX2与乔松(Pinus griffithii)根诱导型特异表达启动子PmPgPR10融合(PmPgPR10∷TaNHX2)并转化水稻,以研究PmPgPR10启动子对TaNHX2基因表达的影响以及转基因植物的耐盐性。PCR、Southern和实时PCR试验结果表明,PmPgPR10∷TaNHX2基因已通过农杆菌介导法整合进水稻基因组,而且外源基因已在受体细胞中正确表达。在盐胁迫处理时,转PmPgPR10基因植株的耐盐性以及外源基因的表达量显著高于对照植株,说明PmPgPR10启动子可以调控TaNHX2基因在根中特异表达。为了进一步分析转基因植株耐盐机理,比较了日本晴和转基因T3代植株中液泡腺苷三磷酸酶(V-ATPase)和液泡焦磷酸酶(V-PPase)活性,发现转PmPgPR10∷TaNHX2基因水稻的V-ATPase和V-PPase酶活性显著高于非转基因对照,说明V-ATPase和V-PPase活性提高在转TaNHX2基因水稻耐盐性过程中发挥重要作用。在盐胁迫处理时,V-ATPase和V-PPase活性只能在转基因植株的根中但不能在叶片中被检测到,进一步说明PmPgPR10启动子在根中特异性表达。因此,PmPgPR10具有在根中增强下游TaNHX2基因表达,并显著提高转基因植株耐盐性的能力。

DNA分子标记技术在菊花种质资源中的应用研究

菊花具有重要的观赏价值和药用价值,是我国著名的传统花卉之一.本文综述了DNA分子标记技术在菊花种质资源遗传多样性评价、系统发育分析、种质鉴定、遗传连锁图谱构建及QTL定位和表型性状关联分析等方面的应用现状,并对DNA分子标记技术的发展和应用前景进行了展望.

苦蘵毛状根体系的建立

为建立苦蘵毛状根体系,分别考察了菌株类型、外植体、培养基类型、侵染时间对苦蘵毛状根诱导率的影响,并对毛状根进行了PCR检测.结果表明:采用MS固体培养基,发根农杆菌C58C1侵染苦蘵叶片的毛状根诱导率可达81.2%.通过PCR鉴定,进一步证实C58C1 Ri质粒上的rolB和rolC基因片段已成功转入被侵染的苦蘵叶片中,所获得的毛状根为发根农杆菌诱导生成.

苦蘵P450家族基因鉴定与表达分析

细胞色素P450酶(cytochrome P450)广泛参与植物次生代谢,是当前的研究热点。基于苦蘵转录组数据,分析并鉴定了部分苦蘵P450家族基因。共鉴定得到795个可能为P450家族基因的序列片段,并将它们聚类到25个不同的聚类(cluster)中,其中,有12个聚类具有组织特异性表达。最终拼接得到30个苦蘵P450家族基因的全长序列,它们与其他物种P450基因高度同源。进化分析表明,这30个苦蘵P450基因可归为9个P450亚家族。通过定量PCR技术,分析了多个P450基因在果实不同成熟阶段的表达变化。结果表明,9个P450基因随着果实成熟表达量上升,另外9个P450基因表达量则逐渐降低。以果实为材料,分析了P450家族基因在乙烯(ACC)与乙烯抑制剂(1-甲基环丙烯,1-MCP)处理下的表达变化。研究表明,部分P450家族基因在ACC和1-MCP处理下表现出相反的表达模式,这说明P450可能参与乙烯介导的果实成熟过程。克隆了3个果实特异表达的P450家族基因(comp164210、comp131532、comp152181),它们主要定位于细胞质和细胞膜中。本研究为苦蘵药用性状遗传改良提供了有价值的遗传信息。

苦蘵查尔酮合成酶编码基因(PaCHS1)的克隆及表达谱分析

对苦蘵(Physalis angulata L.)成分药理研究的结果表明,苦蘵果实内存在有效抑制肿瘤细胞生长的活性成分。查尔酮合成酶(CHS)在植物黄酮类物质次生代谢过程中起到了重要作用。本研究利用同源克隆的方法获得了苦蘵CHS基因的全长c DNA序列,命名为Pa CHS1。序列分析表明,克隆得到的苦蘵Pa CHS1基因全长为1 170 bp,编码389个氨基酸。生物信息学分析表明,Pa CHS1是一个不含核定位序列且定位于细胞质和细胞膜为主的蛋白。实验数据也证实了Pa CHS1是一个细胞膜和细胞质定位的蛋白。序列对比显示其与多种植物的CHS蛋白序列高度同源,尤其与小金鱼草的Mo CHS1亲缘关系最近。实时定量RT-PCR结果表明,在不同组织器官中,Pa CHS1均有表达且表达水平有差异。Pa CHS1在果实中表达水平最高,而在茎中的表达水平最低。我们又分析了Pa CHS1基因在不同激素处理下的表达变化,结果表明,Pa CHS1基因的表达水平受到不同激素的调控,茉莉酸(JA)对Pa CHS1有强烈的诱导作用,而赤霉素(GA)、乙烯(ethylene)和细胞分裂素(cytokinin)对Pa CHS1有强烈抑制作用。对苦蘵Pa CHS1基因的克隆和表达图谱研究,可为研究苦蘵以黄酮类物质为代表的次生代谢途径打下基础。

药食两用植物毛酸浆高效栽培技术规程

毛酸浆是集药用价值和经济价值于一身的药食两用植物,从毛酸浆的栽前准备、育苗、移栽定植、田间管理、病虫害防治和适时采收等多个方面介绍毛酸浆高效栽培技术规程,以期为规范化种植毛酸浆提供技术参考。

基于ITS2条形码对铁皮石斛及其混伪品分子鉴定的初步研究

通过分析铁皮石斛及其常见混伪品的ITS2序列差异,建立铁皮石斛药材真伪的快速鉴别方法.运用CodonCode Aligner V3.0软件对测序峰图进行校对拼接,基于隐马尔可夫模型的注释方法获得ITS2序列,采用MEGA5.0软件进行序列比对,种内种间距离计算及UPGMA聚类树构建,应用Koetschan等建立的ITS2数据库及网站预测ITS2二级结构.结果表明,铁皮石斛及其混淆品ITS2之间存在明显差异,所有铁皮石斛样品在UPGMA树上单独聚为一类.ITS2序列可以作为DNA条形码用于铁皮石斛与其混伪品的快速分子鉴别.

苦蘵育种F_1群体真伪鉴定

目的:研究苦蘵育种F_1群体真伪。方法:以浙江临海和浦江两个种源的苦蘵为亲本,对获得的85个杂交F_1代,利用200对全基因组SSR标记进行杂交后代真伪鉴定。结果:筛选出2对可进行苦蘵F_1代个体杂种鉴定的特异性SSR标记SSR0959和SSR0116。其中利用这两对SSR标记证实本研究构建的苦蘵杂交F_1代群体的85个单株均为双亲互补型(真杂交种)。结论:通过SSR分子标记技术可以快速、准确的鉴定出苦蘵杂交群体中的真杂交种,为后续苦蘵高密度遗传连锁图谱的构建以及有效成分的QTL定位研究奠定基础。

苦蘵总黄酮的提取及含量测定

以提取苦蘵总黄酮含量为评价指标,乙醇体积分数、料液比、提取时间为考察因素,采用正交试验法确定总黄酮的最佳提取工艺。结果表明,最佳工艺为乙醇体积分数30%,料液比1∶60,提取时间60 min。芦丁在0.1~0.5 mg·mL^(-1),线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为98.0%,相对标准偏差1.00%。所确定的提取工艺简单、易于操作、提取率高,可用于苦蘵总黄酮的测定。