动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的比较

研究A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程中热原安全性问题,对动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗进行比较。方法 根据《中华人民共和国药典》2020版(三部) 规定的方法,随机抽取10批次A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗为研究样品,分别采用细菌内毒素动态浊度法和热原检查家兔法进行检定。结果 10批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗热原检查法热原检查均符合规定,动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素定量检测结果与热原检查家兔法一致。结论 细菌内毒素动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素的含量,在快速检测中优于热原检查法,基于上述的比较研究,表明动态浊度法可作为A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程控制中热原检查的补充方法,更好地控制产品质量。

麻疹病毒分子流行病学研究进展

麻疹是可用麻疹疫苗预防的病毒性疾病,人类是该病毒的唯一宿主,其N、H基因存在着很高的核苷酸替代率。目前正是全球控制和消灭麻疹的关键时期,为监测和评估病毒蛋白抗原性和核苷酸潜在的变异,研究麻疹疫苗的病毒基因稳定性,探讨疫苗的保护效果,本文主要就麻疹病毒N、H蛋白分子流行病学研究进展作一综述。

麻疹病毒S191疫苗株N基因稳定性研究及免疫细胞表位分析

研究麻疹病毒（Measles virus，MeV）疫苗株S191毒种和传代病毒核蛋白（Nucleoprotein，N）基因稳定性及其遗传与变异特点；对该序列一些重要位点的氨基酸进行比较，探讨其功能结构及生物学活性变化以及S191疫苗株的保护效果。利用RT-PCR方法扩增S191减毒株23、26、27、29、32、37不同代次N基因，测序进行比对分析。S191传代病毒N基因序列之间核苷酸同源性99．7％-100％，氨基酸同源性为99．6％-100％；S191株与7个疫苗株之间核苷酸序列同源性达99．1％-99．4％；S191和中国流行代表株序列同源性在95．0％～95．4％；S191与世界流行代表株同源性达94．7％-99．4％；S191疫苗株和中国流行代表株CHN93／7（Hla）的4个重要T细胞表位氨基酸保持一致。S191各传代病毒基因具有较高稳定性，该疫苗有一定的保护作用。

麻疹病毒F基因测序及其进化关系的初步分析

研究麻疹病毒疫苗株S191毒种及其传代的病毒溶血素F(Haemolysin,HL)基因稳定性;对该序列一些重要位点的氨基酸进行比较,推测其功能结构及生物学活性变化;同时对该基因与M蛋白基因之间的非编码序列进行比对分析。利用RT-PCR方法扩增S191减毒株MeV23、26、27代及一株流行株YunnanLC-10的F基因,测序后进行比对分析。S191传代病毒F基因序列之间核苷酸同源性为99.8%,氨基酸同源性为99.5%～99.6%;S191疫苗株与流行株之间核苷酸序列同源性达95.2%;疫苗株与流行株1003nt的非编码区序列同源性为85.0%。S191传代病毒F基因具有较高遗传稳定性,关键功能位点氨基酸未发生传代改变;1003nt非编码区序列变异速度较快。

胜利油田博24区块水平井筛管外泥饼酸洗工艺应用

胜利油区博24区块水平井采用常规酸洗工艺时,存在成功率低、酸洗效果差的问题,主要表现为:①未考虑酸液与混油聚合物钻井液、污水以及地层的配伍性,酸洗效果差;②酸洗工艺中,未能对酸液使用量、注入与替出排量、反应时间等进行优化设计,致使酸液对近井地带的清洗效果欠佳;③酸洗泥饼时,一处的污染解除,酸液由此渗入地层,导致其余井段无法有效清除污染物。为此,开展酸液与聚合物钻井液、与过滤污水、与地层的配伍性室内实验,最终确定了酸液配方,完善了酸洗工艺,实施了多级控压泥饼清洗工艺,对酸洗程序与解堵液用量进行优化。对该区块6口水平井的现场应用表明,改进后的二次酸洗工艺可减小泥浆污染,恢复或提升油层渗流能力;多级控压、段塞顶替,增加下铣锥及通井刮管作业程序,可以提高水平井筛管外泥饼酸洗工艺成功率与应用效果。6口水平井平均日产油7.82t/d,平均日产液15.9t/d,改进后的酸洗施工成功率高达100%。

反相HPLC法测定静注人免疫球蛋白中残余胆酸钠含量研究

用反相高效液相色谱法 (R HPLC)测定静注人免疫球蛋白 (IVIG)中残余胆酸钠含量。首先用固相提取柱吸附、浓缩制品中残余胆酸钠 ,然后加入一定量胆酸钠 ,使样品中胆酸钠含量达到可检测水平后 ,依外标法进行测定。结果表明 ,用R HPLC法测定胆酸钠准确性及重复性较好 。

C群流脑多糖菌苗唾液酸含量测定试验

C群脑膜炎球菌多糖菌苗是我们近年开发的一种新制品 ,其中唾液酸 (SA)是该制品的有效成份之一。为了严格控制该制品的质量 ,经反复试验 ,对比各种试验条件 ,选择出较为理想的测定SA方法———改良法。该法与Svennerholm氏法比较 ,其标准曲线变异系数 (cv % )为 0 0 3% ,低于Svennerholm氏法 (0 31% ) ;其回收率平均为10 0 6 2 %。与中检所方法比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,对 4批样品进行 6次重复性试验 ,结果表明 ,该法重复性好 ,操作简便 ,结果可靠 ,实验周期短 ,适于同类制品的SA含量测定。

油井水泥大温差缓凝剂的合成及性能研究

针对长封固段固井中水泥浆顶部和底部温差大导致顶部水泥浆超缓凝或不凝等问题,本文以2-甲基-2-丙烯酰胺基丙磺酸(AMPS)、丙烯酸(AA)、甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)和长链季铵盐(DBrC)为单体,合成了一种油井水泥大温差缓凝剂PADBrC。其结构和性能用红外光谱、核磁共振氢谱、热重分析及扫描电镜等表征。研究结果表明:PADBrC通过抑制水泥中Ca(OH)_(2)和水化硅酸钙凝胶(C—S—H)的生成,抑制水泥的水化作用;PADBrC能使水泥浆在150℃高温条件下保持良好的稠化性能,稠化时间为235 min,稠化曲线平稳;PADBrC能使水泥浆在60℃低温条件下养护24 h的水泥石的抗压强度大于14 MPa,因而PADBrC具有良好的温差适应性,可满足60~150℃的大温差固井施工要求。

麻疹病毒S191疫苗株H基因序列遗传变异分析

目的研究麻疹病毒(MeV)疫苗株Shanghai191(S191)毒种和传代病毒血凝素蛋白(H)基因稳定性及其遗传与变异特点;对该序列一些重要位点的氨基酸进行比较,推测其功能结构及生物学活性变化;探讨S191疫苗株的保护效果。方法利用逆转录—聚合酶链反应方法扩增S191减毒株MeV23、MeV26、MeV27、MeV29、MeV32和MeV37代H基因,测序后与GenBank上U03663的序列进行比对分析。结果S191传代病毒与U03663序列之间核苷酸同源性达99.9%以上,氨基酸同源性为100%;S191与中国流行株的氨基酸序列同源性为96.6%～96.8%;S191与其他流行株之间氨基酸同源性达96.4%～98.9%。结论S191及生产的疫苗具有弱毒稳定性和安全性,并具有好的保护作用。

地层应力敏感性对脱砂压裂油井产能动态预测的影响分析

压裂工艺已经成为油井增产的主要措施,对油井压裂效果的评价也日益重要。作为压裂效果评价的组成部分,生产动态预测研究受到越来越多的重视。端部脱砂压裂是疏松砂岩油气藏开发的一项新技术,对该类油藏进行压后产能模拟预测具有重要作用。在传统渗流理论的基础上,除考虑重力、毛管力、井壁污染等因素外,通过引入疏松砂岩油藏渗透率、孔隙度,建立新的脱砂压裂井三维两相生产动态预测模型。利用该模型,研究疏松砂岩油藏应力敏感性对压裂油井产能动态预测的影响,可知:油藏应力敏感性显著影响油井压后生产动态;地层渗透率和孔隙度越大,其应力敏感性对油井生产动态的影响也越大;但孔隙度变化对压后产能的影响小于渗透率变化的影响。渗透率是油藏应力敏感性因素的主要影响参数。通过与压裂井实际生产曲线对比,显示该模型符合率较高,能够比较真实、准确的预测油井压后生产动态。

水平井分段完井工具的室内试验及现场应用

水平井完井技术的发展趋势是分段完井,即能实现分层开采及异质层隔离功能的完井技术。为此,设计了由内外两套管柱组成的分段完井工具,外管柱实现层间隔离功能,内管柱实现坐封管外封隔器功能。室内试验表明,管外封隔器膨胀后其外径、密封效果、耐压能力等均可满足现场应用的要求。现场应用表明,采用分段完井工具进行分段完井的水平井能实现分层开采及各个不同层系间的隔离、延长无水或低含水开采期、提高采收率的目标。

轮状病毒LLR疫苗株VP7基因的遗传变异研究

目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代。提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果LLR株VP7基因全长1062bp,含编码326个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的VP7基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBanK中LLR参考株(L11602)同源性分别为99.9%和99.7%。与14株G10血清型RV毒株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.3%～87.4%和92.7%～94.9%;与不同血清型RV代表株间,VP7基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为62.2%～76.8%和72.9%～83.1%;在A、B、C3个重要抗原表位,LLR株与同一血清型RV代表株B223氨基酸同源性高达97.5%,而与不同血清型仅为42.5%～62.5%。结论轮状病毒LLR疫苗株VP7基因具有良好的遗传稳定性,与来自不同国家同一型别的RV株VP7蛋白氨基酸序列之间无明显差异,在遗传上密切相关,从VP7基因分子水平证明LLR株毒种及其制备的疫苗是安全可靠的。

胜利油田水平井固井新技术

目前水平井存在套管居中度差、固井顶替效率低的缺陷,导致水平井固井质量差,严重影响了水平井优势的发挥。为了提高水平井固井质量,在胜利油田F147-平2井、F147-平1井和L8-平1井上,应用新型韧性胶乳水泥浆、新型前置液体系、提高套管居中度等新工艺,取得了显著效果,为今后胜利油田提高水平井固井质量积累了经验。

膨胀管套管补贴工艺及在胜利油田的应用

膨胀管补贴技术可用于大井段套管修复,完全不同于现有的波纹管套管补贴技术及补贴加固技术,在套管修复以后其内径减小量很小,能承受的抗压强度是其他方法不能比拟的。膨胀管密封悬挂技术采用耐高温、高强度橡胶材料,膨胀后紧密地与原套管内壁接触,从而达到密封与悬挂的目的。2005-2006年,该技术在胜利油田4口井推广应用,其中,梁38-1井超百米井段补贴获得成功。

地高辛标记DNA探针杂交法检测Vero细胞DNA残留量的适用性验证及应用

目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。

HPLC法测定低pH静脉注射用人血丙种球蛋白麦芽糖含量

本文采用HPLC法测定低 pH静脉注射用人血丙种球蛋白中麦芽糖含量 ,所用色谱柱为氨基柱。首先用磺基水杨酸沉淀蛋白并离心分离 ,上清液上样分析。通过外标法建立三级校正曲线来测定样品中麦芽糖含量 。

狂犬病病毒aG株全基因组序列测定及遗传稳定性分析

目的探究狂犬病病毒（Rabies virus,RV）aG株全基因组序列特征及遗传稳定性。方法严格按疫苗生产工艺进行传代,提取主种子批、工作种子批及疫苗原液病毒RNA,通过RT-PCR技术扩增全基因组各片段基因,然后分别将其克隆到p GEM-T载体中,并进行序列测定;采用DNAStar软件包对aG株与Gen Bank中4aGV参考株（JN234411）以及18株基因1型RV参考株进行同源性分析。结果 aG株全基因组由11 925个核苷酸组成,共编码3 600个氨基酸。疫苗原液与主种子批全基因组核苷酸和氨基酸同源性均为100%,而工作种子批与主种子批的核苷酸与氨基酸同源性分别为99.97%和99.92%;aG株与4aGV参考株全基因组核苷酸与推导的氨基酸同源性均为99.9%,其与18株基因1型参考株核苷酸与氨基酸序列同源性分别为84.2%~97.6%和93.7%~98.3%;aG株传代病毒与4aGV参考株全基因组氨基酸序列高度保守,且各主要功能区未发生变异。结论狂犬病病毒aG株在实验室长期生产传代过程中,全基因组遗传特性稳定。

轮状病毒的LLR疫苗株全基因组克隆及结构蛋白VP6基因遗传特征

目的 了解轮状病毒（RV）的LLR疫苗株全基因组基因和蛋白特征、完善关键基因遗传稳定性研究,为疫苗的质量控制和研发提供依据.方法 将LLR株毒种第38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR方法扩增LLR株（38代）全基因组11个dsRNA片段和传代病毒VP6基因,分别将其克隆到pGEM-T载体中,进行序列测定与分析.结果 LLR株全基因组11条RNA,由18 498个核苷酸组成,共编码5 796个氨基酸;全基因组研究表明,所克隆的LLR株属于G10P[15]/NSP4[A]/SG Ⅰ基因型.LLR株VP6基因全长1 356 bp,含编码397个氨基酸的单一的开放读码框架（ORF）.各代次病毒的VP6基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBank中LLR参考株（L11595）同源性分别为99.9％和99.7％.与16株SG Ⅰ亚群RV代表株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.0％ ～ 99.7％和97.0％ ～ 99.2％;与不同亚群RV代表株之间,VP6基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为77.7％ ～ 82.2％和92.2％ ～93.5％;LLR株各代病毒VP6基因核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 LLR疫苗株关键基因遗传特性稳定,为在分子水平保证LLR株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据;其全基因组克隆,为进一步研究RV生物学、免疫学和确定该病毒的分类学地位提供了科学依据.

轮状病毒LLR疫苗株非结构蛋白NSP4基因稳定性研究

目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株NSP4基因的遗传特征及基因稳定性,为疫苗的质量控制提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增NSP4基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果 LLR株NSP4基因全长751 bp,含编码175个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的NSP4基因核苷酸与推导的氨基酸序列完全一致,与GenBank中LLR参考株(AY219873)进行比较,核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为99.1%和99.7%,各关键功能区均未发生改变。与27株A～F不同基因群RV代表株进行比较,LLR株与A基因群RV的NSP4同源性较高,核苷酸推导的氨基酸同源性为89.2%～95.5%;与B、C、D、E、F基因群RV核苷酸推导的氨基酸同源性分别为83.5%～87.5%、85.2%～87.5%、65.9%～67.8%、27.6%～30.8%、77.8%;系统发生树显示LLR株与A基因群RV在一个分支内。结论轮状病毒LLR疫苗株在原代牛肾细胞上连续传代NSP4基因遗传特性极其稳定,从分子水平证明LLR疫苗株毒种及其生产的疫苗是安全的。