双氢青蒿素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠的抗炎和软骨修复作用

【目的】探讨双氢青蒿素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎(RA)大鼠的抗炎作用和软骨修复作用。【方法】将75只健康6周龄雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,双氢青蒿素低、中、高剂量组,每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠均给予Ⅱ型胶原诱导构建RA模型。成功造模后,双氢青蒿素低、中、高剂量组大鼠分别对应给予双氢青蒿素6.25、12.5、25 mg/kg灌胃处理,1次/d,连续给药2周。给药结束后,检测骨指标(骨体积分数、骨表面积/骨体积、骨小梁厚度、骨小梁数量);采用苏木素-伊红(HE)染色法观察踝关节组织病理学表现、阿利新蓝染色法观察踝关节软骨组织蛋白多糖的表达,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察踝关节骨组织破骨细胞情况;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测外周血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10、IL-17、IL-23的含量;采用蛋白免疫印迹法检测踝关节组织成骨标记物成骨细胞特异性转录因子Osterix(Osx),Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)和骨钙素(OC)的表达;采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测踝关节组织骨吸收功能相关基因破骨细胞相关受体(OSCAR)和TRAP的表达情况。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠骨体积分数,骨小梁厚度、骨小梁数量显著降低,骨表面积/骨体积显著升高(均P<0.05),踝关节组织病理学表现可见滑膜增生,炎性细胞浸润,软骨损伤严重,软骨组织基本无蛋白多糖表达,外周血中炎症相关因子TNF-α、IL-17、IL-23和IL-10含量均显著升高(P<0.05),踝关节组织Osx、COL1A1、OC的相对表达水平均显著降低(P<0.05),OSCAR、TRAP的mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。给予双氢青蒿素干预后,RA大鼠上述指标均得到明显改善。【结论】双氢青蒿素可以通过抑制炎症反应、促进软骨修复治疗Ⅱ型胶原诱导的大鼠RA。

miR-455-3p通过靶向BMP2调节地塞米松诱导的软骨细胞自噬性死亡

目的:探究miR-455-3p通过靶向BMP2对地塞米松(Dex)诱导的软骨细胞自噬性死亡的影响。方法:荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与BMP2靶向关系。从SD大鼠中分离软骨细胞,Dex处理后的软骨细胞转染miR-455-3p mimic或联合转染pcDNA-BMP2,将软骨细胞分为4组:Control组、Dex组、Dex+mimic组和Dex+mimic+BMP2组。RT-PCR检测BMP2、Ki67、PCNA mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,免疫荧光检测LC3含量,Western blotting法检测BMP2、Caspase-3、Caspase-9、LC3II、LC3I、Beclin1、ATG7蛋白表达水平。结果:miR-455-3p和BMP2存在直接靶向作用关系。与Control组比较,Dex组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex组比较,Dex+mimic组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex+mimic组比较,Dex+mimic+BMP2组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著降低,细胞增殖倍数显著升高,LC3含量显著降低,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:miR-455-3p通过靶向BMP2调节Dex诱导的软骨细胞自噬性死亡。