化学发光免疫分析技术在微生物检测中的应用

化学发光免疫分析技术凭借其化学发光的高灵敏性和免疫反应的高特异性在微生物快速检测中广泛应用。该文着重叙述了化学发光免疫分析技术核心检测体系在微生物检测中的研究进展,并对其涉及到的样品前处理和检测新方法进行了综述。化学发光免疫分析技术检测微生物用时短、成本低,但特异性识别方法和检测的灵敏度有待提升,新型的发光体系、发光放大方法、可替代抗体的识别分子以及相关的前处理技术是未来研究的重点。

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多,异丙威作为速效性农药,应用较为广泛,但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷,能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。

食品中磺胺类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

在常规酶联免疫法的基础上,将磺胺类母核与牛血清白蛋白合成免疫抗原后免疫小鼠制得磺胺类单克隆抗体,并进一步优化抗体工作浓度、反应时间等实验参数,建立了一种简便、快速、精确的磺胺类残留一步式化学发光酶联免疫检测方法.结果表明该方法最佳检测范围为1.0～81.0 ng/mL,检测IC50达3.047 ng/mL,对猪肉的最低检测限为0.74 ng/g,可检出国际规定的SAs残留标准底限值以下的残留量.与常规ELISA方法相比,检测限和灵敏度基本一致,但反应时间缩短了60 min.证明采用一步式化学发光酶联免疫检测磺胺类残留可以大幅度缩减检测时间,符合快速检测的要求.

牛奶中林可霉素磁免疫化学发光检测方法的建立

林可霉素药物中的醇羟基经PDC氧化后得到酮基林可霉素,然后与氨基丁酸进行缩合反应,得到四碳链羧基半抗原产物,即林可霉素半抗原;将辣根过氧化物酶标记林可霉素半抗原,制备得到酶标抗原;将林可霉素半抗原分别与BSA和OVA偶联,制备得到免疫原和包被原,进而制备得到林可霉素单克隆抗体,测得抗体效价为1：180000;将林可霉素单克隆抗体与磁珠偶联得到磁标抗体;配合全自动磁免疫化学发光仪建立了化学发光免疫检测方法,建立了林可霉素磁免疫化学发光检测试剂盒标准曲线,测得该方法对牛奶中林可霉素的检测限为5.88μg/L,该方法对林可霉素具有较高的特异性,对与林可霉素结构或者功能相似竞争的9种药物均无交叉反应。进行牛奶空白样品添加试验时回收率为85.8%～113.3%,批内变异系数为5.4%～8.6%,批间变异系数为8.4%～9.1%。该方法试剂盒配合全自动磁免疫化学发光仪检测,具有灵敏度高、特异性好、操作简单、检测时间短等优点,适合对乳制品安全监管和企业内控工作中推广应用,为我国乳制品监管工作提供了技术支持。

喹诺酮类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

喹诺酮类抗菌药（QNS）又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类较新的合成抗菌药^[1]，该类药物的开发可以追溯到1962年，Lesher从合成抗疟药氯喹中分离出一种副产品-萘啶酸^[2]，喹诺酮类历经40多年的发展，共开发出了4代喹诺酮类药物，共计50多种药物^[3-4]。

呋喃它酮代谢物化学发光试剂盒的建立

首先合成呋喃它酮代谢物（AMOZ）半抗原，再与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原。采用间接竞争酶联免疫吸附法，以鲁米诺作为发光底物，利用获得的抗AMOZ单克隆抗体研制出AMOZ化学发光试剂盒，试剂盒的检测范围在0．05～4．05μg／L，Ic50值达0．161wg／L，r=0．9998。试验表明，试剂盒对呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃妥因代谢物（AHD）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因及呋喃西林的交叉反应率均很低，对AMOZ则有很高的检测特异性；对猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、鱼肉以及虾肉样品在0．1、0．5μg／kg2个添加水平的平均回收率在76．9％～92．8％，检测结果的变异系数均不大于12．8％。结果表明，化学发光试剂盒检测所需时间少、所需仪器量少、检测结果准确，因此适合现场大批量样品的筛选。

让有效的课余作业熠熠生辉

课余作业是课堂教学的延伸，能有效地帮助教师提高教学效果，巩固学生所学的知识。本文试从课余作业要讲究趣味性、注重基础性、体现自主性三个方面来进行论证，力求少而精，力争给学生的作业进行科学性的设计，能较大程度地起到“轻负高质”的效果。

水产品中孔雀石绿·结晶紫及其代谢物残留快速检测试纸条的研制

[目的]研究开发用于现场检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留的快速检测试纸条。[方法]采用胶体金免疫层析技术,通过利用不同的样品垫及反应模式进行试验,研制出适合于现场检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留的快速检测试纸条。[结果]该试纸条对孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫的检测限均为2μg/L,检测所需时间约10 min。[结论]该试纸条操作简便、快速、检测灵敏度高,试验结果一目了然,可作为孔雀石绿、结晶紫及其代谢物在水产品中残留检测的有效筛查手段。

让环保教育与语文教学一路同行

环境问题是当今世界面临的重大问题,面对污染严重的大自然,面对全球性的环境危机,人们开始惊呼：“人类正在失去自己的家园”。而“环保教育,从娃娃抓起”,作为一名语文教育工作者,我们应该有责任向学生传授语文基础知识同时,有目的、有计划地将环保教育有机地渗透于各教学环节中,并通过开展环保主题班队课和有意义的课外活动,使学生掌握一定的环保知识,形成正确的环境道德观念,树立对生活环境更加积极的行为准则,从小增强环保意识。

“论坛”式教学开启小学作文新天地

本文以论坛式作文教学的三个方面简单论述构建论坛式作文教学的重要性，然后从创新教学过程、创新评价以及创新师生关系三个角度详细论述论坛式作文教学的科学构建，最后简单论述构建论坛式作文教学需要注意的问题。

三种免疫学检测方法对呋喃唑酮代谢物的检测

为了对动物源性食品中的呋喃唑酮进行快速、有效的检测,试验对检测呋喃唑酮残留的三种免疫学快速检测方法,即化学发光免疫分析法（CLEIA法）、酶联免疫分析法（ELISA法）、胶体金免疫层析法（ICA法）在检测限、检测时间等方面进行综合比较。结果表明：CLEIA法、ELISA法、ICA法对呋喃唑酮代谢物（AOZ）的检测限分别为0.01μg/L、0.02μg/L、50 ng/L,CLEIA法和ELISA法添加回收试验的变异系数范围分别为小于15.0%和小于8.0%。说明三种免疫学检测方法在不同的应用环境各具优势,CLEIA法检测灵敏度高,适用于实验室痕量残留检测;ELISA法灵敏度满足限量残留检测,适用于实验室一般项目的快速检测;ICA法所用胶体金试纸条价格低廉,操作简便,无需任何仪器,适用于野外大批量样本的阳性筛选。

一种玉米赤霉烯酮免疫磁珠分离富集试剂盒的研制

通过玉米赤霉烯酮与对苯二胺反应,制备出玉米赤霉烯酮免疫磁珠分离富集试剂盒,试剂盒对样品中玉米赤霉烯酮的捕获量为50ng/ml,与玉米赤霉烯酮结构或者功能相似的竞争药物:黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、T-2毒素、赭曲霉毒素A、展青霉素等5种药物进行特异性反应时,均无交叉反应。

氯霉素化学发光酶联免疫检测方法的建立

在常规酶联免疫法(ELISA)的基础上,用辣根过氧化物酶标记氯霉素与牛血清白蛋白偶联后免疫小鼠制得的单克隆抗体,并优化抗体工作浓度、反应时间等试验参数,建立了一种简便、快速、准确的氯霉素(CAP)残留一步式化学发光酶联免疫检测方法。结果表明:该方法最佳检测范围为20～1620 pg/mL,IC50值达59.911 pg/mL,检测限为9.3 pg/g,可检出国际规定的CAP残留标准限量值以下的残留量。与常规ELISA检测方法相比,不仅提高了检测限和灵敏度,而且反应时间缩短了60 min。采用一步式化学发光酶联免疫检测氯霉素残留,可以大幅度缩减检测时间,更符合快速检测的要求。

卡那霉素单克隆抗体制备以及化学发光免疫检测试剂盒的研制

通过卡那霉素与邻苯二甲酸酐反应,制备出卡那霉素半抗原,通过动物免疫、细胞融合,获得杂交瘤细胞株,再由杂交瘤细胞株分泌得到抗卡那霉素单克隆抗体,从而制备出能够检测牛奶和奶粉样本中卡那霉素药物的化学发光免疫检测试剂盒。试剂盒对奶粉的检测限为0.95g/kg,对牛奶的检测限为0.89g/kg,对牛奶的回收率为80.6%~105.6%,批内、批间相对标准偏差范围均<10%。卡那霉素单克隆抗体与链霉素、双氢链霉素、新霉素的交叉反应率分别为7.1%、9.0%、4.6%。试剂盒至少能够在4℃保存1年。

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的比较分析

用研发的克仑特罗化学发光酶联免疫(CLEIA)试剂盒与克仑特罗酶联免疫(ELISA)试剂盒进行检测效果比对,结果显示,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,CLEIA试剂盒方法要比ELISA试剂盒方法更节省时间;CLEIA试剂盒IC50为40.0 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为20.1 ng·L-1和90.7 ng·kg-1,而ELISA试剂盒IC50则为125.2 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为23.5 ng·L-1和99.3 ng·kg-1,CLEIA试剂盒方法的灵敏度要高于ELISA试剂盒方法的灵敏度。综合分析得知:CLEIA法比ELISA法灵敏度更高、反应时间更短。

化学发光免疫试剂盒检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留

为了快速检测猪肉中呋喃西林代谢物残留量,试验采用自主研发的以磁性微球为固定相的化学发光免疫试剂盒,并对其方法学进行评价及与高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS法）检测结果进行比较分析。结果表明：采用化学发光免疫试剂盒测定猪肉中呋喃西林代谢物的灵敏度为0.331μg/kg,精密度较好,最低检测限为0.077μg/kg,与呋喃西林原药的交叉反应率为8.9%,与其他类似物的交叉反应率均〈0.1%,平均回收率为92.7%-104.8%,与HPLC-MS/MS法检测样本的阴性和阳性结果一致。说明该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等特点,适用于现场快速检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留。

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的检测效果比较

经克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒检测效果比较。结果表明,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,采用CLEIA试剂盒方法检测比ELISA试剂盒方法更加节省时间;CLEIA试剂盒IC50为40 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为20.1 ng/L和90.7 ng/kg,而ELISA试剂盒IC50则为125.2 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为23.5 ng/L和99.3 ng/kg,CLEIA试剂盒方法检测灵敏度高于ELISA试剂盒方法。

把握导学时机 提升阅读实效

教师是课堂教学的组织者与引导者,要时刻牢记自己的身份是“主导者”而不是“主宰者”。在阅读教学中,教师要善于根据文本内容及学生的实际需要,把握导学的时机,引导学生乐学、爱学、活学、会学等,这样,才能真正做到以引导促高效,从而实现全面提升学生阅读质量的目标。那么,在阅读教学中,如何引导学生学习才能更有效呢？笔者认为,应该从以下几个方面入手。

检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫法建立

为了建立检测利巴韦林残留的化学发光酶免疫方法,对酶标抗原与磁标抗体的最佳稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的检测限、准确度和精密度进行评价。结果显示:50%抑制浓度(IC50)为2.263μg/L,线性范围是0.409~12.527μg/L;在动物组织、兽药、饲料中的检测限为2.0μg/kg,样本添加回收率为83.6%~94.7%,批内、批间相对标准偏差均<10%;对实际样本进行检测,与液相色谱-质谱/质谱法的结果无显著性差异(P>0.05)。该方法灵敏度高、操作简便,可广泛用于动物组织、兽药、饲料中利巴韦林残留量的测定。