重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流动试纸条快速检测锦鲤疱疹病毒

为建立一种快速、灵敏并适用于临床检测Ⅲ型鲤疱疹病毒(CyHV-3,KHV)的方法,实验根据KHV SphI-5基因的保守序列片段设计引物及探针,采用重组酶聚合酶扩增技术结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测KHV。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)具恒温扩增及高灵敏度特点,简化了设备要求的同时又能做到高效检测病毒,再结合侧向流动试纸条(LFD)将RPA结果快速地可视化,提高了该疾病的检测效率。结果表明,在38℃的最适反应温度下,采用RPA-AGE技术仅需10min便可检测出病原的目标片段,结合LFD方法仅需5min便可将RPA结果通过试纸条可视化呈现。研究研发的KHV RPA-LFD检测方法简单、快捷,可为实验条件有限的养殖场快速诊断需求提供技术支撑。

饲料中添加大豆异黄酮对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、体组成及抗氧化能力的影响

为研究饲料中添加大豆异黄酮对凡纳滨对虾生长、体组成及抗氧化能力的影响,以鱼粉、豆粕和花生饼为蛋白源,液体磷脂和鱼油为脂肪源,配制粗蛋白44%、粗脂肪8%的基础饲料,并在基础饲料中分别添加0 mg/kg(V1)、200 mg/kg(V2)和400 mg/kg(V3)的大豆异黄酮。3种实验饲料分别投喂初始体重0.78±0.01g的凡纳滨对虾8周。结果显示大豆异黄酮对凡纳滨对虾成活率和生长性能均未造成显著影响(P>0.05)。400 mg/kg大豆异黄酮组(V3)体组织灰分含量显著低于对照组(P<0.05)。凡纳滨对虾血清过氧化氢酶(CAT)活性随饲料大豆异黄酮的添加而升高,且V3组显著高于V1和V2组(P<0.05)。对虾肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性先升高后降低,V2组测得最高的肝胰脏SOD水平(P<0.05)。随大豆异黄酮添加,对虾肝胰腺丙二醛(MDA)含量逐渐降低,V2和V3组均显著低于对照组(P<0.05)。本实验结果表明,饲料中添加一定含量的大豆异黄酮具有改善凡纳滨对虾抗氧化能力的作用。

饲料中添加苯甲酸钠及其复配物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、体组成及抗氧化能力的影响

本研究旨在评估苯甲酸钠、甲酸钙和富马酸的混合物在水产饲料中的使用效果,在基础饲料(V1组)中分别添加0.05%(V2组)和0.10%(V3组)的苯甲酸钠,同时在0.05%苯甲酸钠基础上分别添加0.10%甲酸钙(V4组)和0.10%富马酸(V5组),配制成5种等氮(44%)等脂(8%)的试验饲料。分别投喂初始体重(0.78±0.01)g的凡纳滨对虾8周。结果显示:添加苯甲酸钠及其与甲酸钙和富马酸的复配物对凡纳滨对虾成活率、生长性能及体组成均无显著影响(P>0.05)。V2~V5组的凡纳滨对虾血清过氧化氢酶(CAT)活性分别较对照V1组升高133.67%、109.78%、379.16%和165.69%(P<0.05)。V5组肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性较对照V1组升高148.70%(P<0.05)。与对照V1组相比,饲料中添加了苯甲酸钠与甲酸钙和富马酸复配物的V4组和V5组的肝胰腺丙二醛(MDA)含量分别显著降低了36.38%和40.80%(P<0.05)。本试验结果表明,凡纳滨对虾饲料中添加苯甲酸钠与甲酸钙和富马酸的复配物对改善对虾抗氧化能力的效果优于单一添加苯甲酸钠。

栗木单宁对凡纳滨对虾生长、消化酶、血清抗氧化及肠道菌群的影响

试验研究栗木单宁对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、消化酶、血清抗氧化及肠道菌群的影响。选取360尾初始体质量约为(0.76±0.01) g的凡纳滨对虾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾。各试验组分别饲喂添加含有0、300、600和900 mg/kg栗木单宁的饵料。试验期50 d。结果表明,饵料中添加不同梯度的栗木单宁对凡纳滨对虾生长性能及消化道酶活均无显著影响(P>0.05),但TA300组凡纳滨对虾表现出较好的生长效果;与TA900组相比,TA300、TA600组虾体粗脂肪含量均显著提高(P<0.05);与对照组相比,TA600、TA900组对虾的血清碱性磷酸酶、酸性磷酸酶及过氧化氢酶活性显著降低(P<0.05);TA300组ACE指数显著高于TA600组(P<0.05);随栗木单宁添加量升高,变形菌门比例逐步降低,拟杆菌门比例逐步增加。研表明,饲料中添加300、600、900 mg/kg栗木单宁对凡纳滨对虾的生长性能和消化酶活无显著的影响,对肠道菌群的变形菌门比例有降低作用。

Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF6多克隆抗体的制备与鉴定

【目的】制备Ⅱ型鲤疱疹病毒(CyHV-2)ORF6多克隆抗体,为深入探究ORF6在CyHV-2急性感染或潜伏感染过程中的作用机制提供技术支持。【方法】利用MEGA 6.0、Adobe Illustrator CS6及BepiPred-2.0等在线软件分析CyHV-2的ORF6基因序列信息,采用PCR从CyHV-2基因组中扩增ORF6基因片段,将其连接至原核表达载体pET-28a后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和尿素洗涤纯化获得融合蛋白。以纯化的融合蛋白ORF6免疫健康Babl/c小鼠制备ORF6多克隆抗体,并通过Western blotting和间接免疫荧光技术鉴定ORF6多克隆抗体的特异性。【结果】CyHV-2的ORF6基因全长3003 bp,与CyHV-3和CyHV-1的ORF6氨基酸序列相似性均高于30.00%,其中与CyHV-3的相似性高达39.36%;其抗原表位最可能存在于第1~300位氨基酸序列中。将PCR扩增获得的ORF6基因片段连接至原核表达载体pET-28a可成功构建重组质粒pET-28a-ORF6,转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导4 h即获得融合蛋白ORF6;原核表达的融合蛋白ORF6主要以包涵体形式进行表达,其分子量为17.13 kD,经6 mol/L尿素洗涤纯化后的浓度为0.1 mg/mL。以纯化融合蛋白ORF6免疫Babl/c小鼠制备获得的ORF6多克隆抗体能特异性识别融合蛋白ORF6及CyHV-2感染的异育银鲫尾鳍细胞(GiCF);利用制备的ORF6多克隆抗体对CyHV-2感染GiCF细胞进行间接免疫荧光分析,结果在CyHV-2感染GiCF细胞周围能观察到特异性绿色荧光,而在未感染CyHV-2的GiCF细胞周围未观察到特异性绿色荧光,进一步说明ORF6多克隆抗体可特异性识别CyHV-2。【结论】制备获得的ORF6多克隆抗体能与CyHV-2感染GiCF细胞发生特异性免疫反应,即可用于鉴定CyHV-2感染,为探究ORF6蛋白功能是否与CyHV-2潜伏感染相关打下了基础。