续断的本草整理及现代研究概况

续断别名众多,基原涉及10余种植物,明代《滇南本草》首次记载川续断Dipsacus asper Wall.ex Henry作为续断药用,产地主要集中在四川、云南、湖北、贵州等;续断的品质评价主要集中在产地、药材形态。该文通过对续断的本草考证及现代文献整理,厘清古今关系,探讨影响续断品质的因素,为续断的进一步研究提供参考。

低温胁迫对川续断中川续断皂苷Ⅵ积累的影响研究

目的:探究低温胁迫对川续断皂苷Ⅵ积累的影响,为揭示海拔影响川续断质量形成的分子机制提供研究基础。方法:以二叶期川续断植株于15℃条件下进行低温处理,分别处理10、20、50 d后取样,通过HPLC检测川续断皂苷Ⅵ的含量,并以DaACT103为内参基因,实时荧光定量PCR法测定6个参与川续断皂苷Ⅵ合成的相关酶基因(DaAACT、DaMVD、DaHMGS、DaHMGR、DaSS、Daβ-AS)的相对表达量。结果:低温胁迫下川续断皂苷Ⅵ含量极显著升高,且各基因的相对表达量均较对照组极显著或显著升高;DaAACT、DaMVD、DaHMGR、DaSS、Daβ-AS基因的相对表达量与川续断皂苷Ⅵ含量达极显著正相关。结论:低温胁迫有利于川续断皂苷Ⅵ的积累,且DaAACT、DaMVD、DaHMGR、DaSS、Daβ-AS基因对川续断皂苷Ⅵ的积累作用显著。

仙茅商品规格等级标准及质量评价研究

目的:制定仙茅商品规格等级标准,为规范仙茅商品的生产、经营提供参考。方法:对各药市收集的38份仙茅长度、上部直径、中部直径、下部直径等外观指标进行测量,对各指标进行描述统计分析、主成分分析、t检验,结合市场调研及实际操作性确定分级指标,并制定仙茅商品规格等级标准;以水分、灰分、浸出物、仙茅苷含量为内在指标,分析等级间质量差异及外观性状与内在成分的相互关系。结果:通过数据分析与可操作性,选择仙茅长度、中部直径作为其商品规格等级划分的外观指标;将仙茅商品划分为选货和统货;仙茅中部直径与总灰分、浸出物、仙茅苷含量存在显著负相关关系,长度与总灰分存在显著负相关关系;统货的总灰分、仙茅苷含量显著高于选货。结论:本研究建立了以长度、中部直径为指标的仙茅商品规格等级标准,选货长度5~10 cm、直径0.65~1.20 cm,统货长度3~10 cm、直径0.40~1.20 cm。

续断商品规格等级标准及质量评价研究

通过本草考证及市场产地调研,采集不同市场及产地的续断样品进行分析,选定外观性状指标,结合生产实际,制定续断商品规格等级标准;同时分析各等级外观性状与内在成分间的相关性及质量差异。本草考证及市场产地调研发现,续断以根条粗、断面墨绿色为佳,且市场上多以统货为主;通过主成分分析、方差分析及聚类分析,结合本草考证及实际操作的可行性,筛选出长度、中部直径、皮部颜色为分级指标,划分选货和统货2个规格,其中选货划分为大选和小选2个等级。此外,续断外观性状指标与内在指标无显著相关性,浸出物与水分存在显著正相关,与总灰分呈极显著负相关;多重比较显示,水分、浸出物、川续断皂苷Ⅵ含量选货高于统货,但均未达显著差异;总灰分含量统货高于选货,亦未达显著差异。该研究制定的续断商品规格等级标准,为规范续断交易提供依据,同时为续断商品规格等级团体、行业及国家等标准的制定提供参考。

五倍子商品规格等级标准及质量评价研究

以市场收集的33份五倍子为研究对象,通过本草考证与市场调查,运用描述统计、主成分分析及聚类分析,选定分级指标,结合生产实际,制定五倍子商品规格等级标准;并以水分、灰分、没食子酸为内在指标,分析等级间质量差异及外观性状与内在成分的相互关系。本草考证与市场调研发现,五倍子以个大、完整、壁厚、色灰褐者为佳,依据性状分为角倍和肚倍;通过主成分分析、聚类分析并结合本草记载及生产实际,筛选长、直径、单个质量、500 g个数4个分级指标,划分角倍、肚倍2个规格,选货和统货2个等级;相关性分析显示,五倍子内在指标与外观性状无显著相关;多重比较显示,选货灰分含量均小于统货灰分含量,但未达显著性;没食子酸含量肚倍选货和统货均高于角倍选货和统货。该文以长、直径、单个质量、500 g个数作为外观性状指标,结合本草考证与市场调研,制定了2个规格、2个等级的五倍子商品规格等级标准,可为其行业标准或国家标准制定提供依据。

川续断Actin、Tubulin和GAPDH基因的克隆及表达稳定性分析

目的从川续断Dipsacus asper中克隆并筛选出稳定的内参基因用于实时荧光PCR(qRT-PCR)的分析校正,为今后川续断功能基因的表达分析及调控机制研究提供基础。方法从川续断转录组数据库中筛选并克隆肌动蛋白(Actin)、微管蛋白(Tubulin)、GAPDH基因家族内参基因的核心片段,以不同产地、不同组织部位和不同发育时期的川续断植株为材料,通过qRT-PCR获得各基因的表达信息,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT、RefFinder共5个内参评价软件分析各基因的表达稳定性,综合评价并筛选出最佳的川续断内参基因。结果克隆获得10个候选内参基因核心片段,分别属于Actin、Tubulin、GAPDH 3大基因家族,各家族基因序列间同源性较高;稳定性综合分析结果显示,DaACT103在不同产地及不同组织部位的表达稳定性较强且表达量相对较高,DaTUB5在不同发育时期的表达稳定性较强且表达量相对较低。结论DaACT103和DaTUB5均可作为川续断的内参基因,其中,DaACT103适用于作为具有较高表达丰度基因的内参基因;DaTUB5适用于作为表达丰度较低基因的内参基因。