基于Nrf2/ARE信号通路探讨桂枝茯苓丸对糖尿病小鼠氧化应激因子及肾纤维化的机制

目的:基于核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路,研究桂枝茯苓丸对糖尿病小鼠氧化应激和肾纤维化的影响,探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型,造模成功小鼠分成模型组、二甲双胍组(250 mg·kg^(-1))、桂枝茯苓丸低、中、高剂量组(400.4、800.8、1601.6)mg·kg^(-1),每组10只,另设10只正常组小鼠,连续给药8周,记录小鼠体质量、血糖,计算肾脏指数;检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;苏木素-伊红、高碘酸-席夫、马松染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))蛋白表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织Nrf2、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、SOD1、NAD(P)H单核苷酸氧化酶1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血糖、肾脏指数、TG、TC、BUN、SCr水平升高,肾小球基底膜增厚,肾组织胶原纤维增多,SOD活性降低,MDA含量升高,FN、TGF-β_(1)、α-SMA、Keap1蛋白表达显著增加,Nrf2、SOD1、NQO1、HO-1表达显著减少(P<0.01);与模型组比较,桂枝茯苓丸及二甲双胍组血糖、肾脏指数、TG、TC、BUN、SCr水平明显降低,肾组织病理损伤有不同程度的改善,SOD活性显著增加,MDA含量明显降低,FN、TGF-β_(1)、α-SMA、Keap1表达明显减少,Nrf2、SOD1、NQO1、HO-1表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:桂枝茯苓丸能改善氧化应激、抑制肾纤维化,其机制可能与Nrf2/ARE信号通路的激活有关。