GPD1L在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的分析甘油磷酸脱氢酶1样抗原(GPD1L)在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法选用包含79例肾透明细胞癌及10例肾脏正常组织的组织芯片,使用免疫组织化学染色法(免疫组化)检测GPD1L蛋白的表达情况,并运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集包含GPD1L mRNA资料的肾透明细胞癌患者相关资料。观察组织芯片中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L蛋白的表达部位及表达强度,分析TCGA中肾脏正常组织与肾透明细胞癌组织GPD1L基因的表达水平差异。按基因芯片或TCGA中肾透明细胞癌GPD1L蛋白或mRNA表达情况分为高表达组与低表达组,分析肾透明细胞癌患者GDP1L蛋白或mRNA表达与临床特征及总体生存期(OS)的关系。应用单因素和多因素Cox比例风险回归分析肾透明细胞癌患者OS的影响因素。结果组织芯片中,GPD1L蛋白阳性染色呈棕黄色或褐色,在肾透明癌细胞与肾脏正常组织中主要表达于肾小管上皮的细胞胞质中,GPD1L蛋白在肾透明细胞癌组织表达强度低于其在正常肾脏组织中的表达强度(P<0.001),GPD1L蛋白低表达组中病理分级高和临床分期晚者比例高于高表达组(P均<0.05)。TCGA中,肾透明细胞癌组织GPD1L mRNA表达水平低于肾脏正常组织(P<0.05),GPD1L mRNA低表达组中女性、病理分级高、临床分期晚、有转移、死亡者比例均高于高表达者(P均<0.05), GPD1L mRNA低表达组OS低于高表达组(P<0.001)。Cox比例风险回归分析显示,GPD1L mRNA表达水平、年龄、肿瘤转移为肾透明细胞癌OS的影响因素(P均<0.05)。结论 GPD1L的表达与肾透明细胞癌密切相关,可考虑作为临床诊断及预后的分子标志物。

日本血吸虫感染小鼠的脾脏CD8+PD-1+T细胞的功能特性

目的研究日本血吸虫感染后小鼠脾脏CD8+PD-1+T细胞含量及功能的变化情况。方法使用日本血吸虫感染5~6周的C57BL/6小鼠,分离脾脏,制备石蜡切片,HE染色,观察组织病变情况;分离淋巴细胞并计数,运用流式细胞术检测CD8+PD-1+T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察CD8+PD-1+T细胞的CD25、CD69、CXCR5、CD40L的表达变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌情况。结果日本血吸虫感染后,小鼠体质量下降(P<0.05),而脾脏质量和体积均明显上升(P<0.01);脾脏中CD8+PD-1+T细胞的比例和绝对值数目增加(P<0.01);感染组CD8+PD-1+T细胞高表达CD69(P<0.05),而感染组CD8+PD-1+T细胞CXCR5分子表达显著下降(P<0.05);经PMA与离子霉素刺激以后,CD8+PD-1+T细胞IFN-γ分泌增加(P<0.05)。结论血吸虫感染5~6周小鼠脾脏中CD8+PD-1+T细胞为一群主要的活化细胞群可大量分泌IFN-γ,在血吸虫感染疾病发挥重要的免疫调节作用。

生物信息学分析线粒体基因在前列腺癌生化复发中的作用

目的利用生物信息学分析探讨线粒体基因在前列腺癌生化复发中的作用。方法利用TCGA及BROAD数据分析前列腺癌与生化复发相关的线粒体基因;网站VENNY、STRING、METASCAPE及软件Cytoscape分析相关基因在前列腺癌生化复发中发挥作用的相关信号通路。结果筛选出141个与前列腺癌生化复发相关的线粒体基因。其中相互作用最密切的前20个基因分别是SOD2、CS、COX4I1、ECHS1、HMGCL、PTCD3、CPT2、NDUFA9、HIBADH、ALDH6A1、PARK7、PCCA、NDUFV2、MRPL17、DAP3、ACSF3、AURKAIP1、MRPL20、MDUFA13及MRPL40。这些线粒体基因主要参与线粒体基质和线粒体膜的组成,参与有机酸、脂肪酸的代谢,调控氧化还原活动。结论线粒体基因对前列腺癌生化复发具有影响作用,可能是前列腺癌的早期诊断及靶向治疗的潜在方向。

IL-27增强TNF-α介导上调的炎症因子的表达

目的:动脉粥样硬化是慢性炎症疾病,免疫细胞及炎症因子在其发病过程中起重要调节作用。本研究在于探讨IL-27对血管内皮细胞的直接作用。方法:采用ELISA方法,研究IL-27和TNF-α对人冠状动脉内皮细胞产生炎症相关细胞因子和趋化因子的作用。结果:IL-27显著增强TNF-α介导上调的炎症相关细胞因子IL-6和趋化因子CCL5的表达。IL-6和CCL5的表达受特异性信号分子抑制剂显著抑制。结论:人冠状动脉内皮细胞诱导释放IL-6和CCL5可能受JNK,p38MAPK和NF-κB通路差异调控。这些结果为阐明IL-27与TNF-α在动脉粥样硬化血管炎症发生中的作用提供重要生物化学基础。

日本血吸虫感染的小鼠肠系膜淋巴结γδT细胞、NK细胞和NKT细胞表型的变化

日本血吸虫病是由血吸虫引起的一种慢性寄生虫病。本研究着力于探究日本血吸虫(Schistosome japonicum,S.j.)感染的C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结不同固有免疫细胞的表型变化。C57BL/6小鼠感染日本血吸虫6周,分离肠系膜淋巴结,制备单细胞悬液,检测固有免疫细胞及其表面相关分子的表达情况。结果显示肠系膜淋巴结中γδT细胞、NK细胞和NKT细胞数量明显增多(P<0.05),但只有NK细胞的百分比含量明显增加(P<0.05);γδT细胞、NK细胞和NKT细胞表面CD69表达显著增高(P<0.01),而CD25的变化均不明显(P>0.05);γδT细胞和NK细胞表面CD4增高(P<0.05);NK细胞表面NKG2A/C/E(CD94)、NKG2D(CD314)表达及NKT细胞表面NKG2D(CD314)表达降低(P<0.05)。表明日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结不同固有免疫细胞的表型变化存在显著差异。

日本血吸虫感染的小鼠肺脏组织CD69^(+)TRM细胞免疫学特性的变化

目的探究日本血吸虫感染的小鼠肺脏CD69^+组织定居记忆T细胞(TRM)的表型和功能的变化。方法使用血吸虫感染C57BL/6小鼠,6周后分离感染组及正常对照组小鼠的肺脏组织,制备石蜡切片,使用HE染色,观察肺部病变情况;制备单细胞悬液,用流式细胞术检测CD4^+和CD8^+的CD69^+TRM的含量;使用细胞表面染色方法,观察CD69^+TRM细胞表面CD103、CD62L和CD107a分子的表达情况;使用细胞内细胞因子染色法,检测CD69^+TRM细胞白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-9和IL-10的分泌情况。结果日本血吸虫感染小鼠肺脏组织出现明显肉芽肿病变;流式细胞术检测结果显示,在CD4^+T和CD8^+T细胞中,感染组CD69的表达比例均高于正常组[(19.02±2.87)%vs.(4.29±0.21)%,(7.61±1.99)%vs.(2.46±0.49)%],差异有统计学意义(P<0.05)。在CD4^+T细胞中,CD62L和CD107a分子在感染组小鼠CD69^+细胞的表达比例低于正常组[(6.41±0.47)%vs.(23.95±1.63)%,(30.19±2.70)%vs.(48.15±2.75)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。在CD8^+T细胞中,感染组小鼠CD69^+细胞表面CD103和CD62L分子的表达比例远低于正常组小鼠[(19.12±0.41)%vs.(44.79±3.64)%,(38.89±4.59)%vs.(58.69±2.12)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。在CD4^+T细胞中,感染组CD69^+T细胞相比正常组表达较高水平的IL-4[(27.25±0.88)%vs.(14.57±1.36)%],差异有统计学意义(P<0.05)。在CD8^+T细胞中,感染组CD69^+T细胞相比正常组表达较高水平的IFN-γ[(45.08±4.25)%vs.(2.75±0.07)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠肺脏组织中存在着一群表达CD69的TRM细胞,在日本血吸虫感染诱导的肺部肉芽肿病变过程中发挥了重要的作用。

GPER的激活调控自噬抑制前列腺上皮细胞增殖

目的 探讨G蛋白耦联雌激素受体(GPER)对正常前列腺上皮细胞增殖及自噬的影响。 方法 利用CCK8,观察雌二醇、G1对两种前列腺上皮细胞BPH-1及RWPE-1增殖的影响,通过Western印迹、CYTO-ID自噬检测试剂检测加入雌二醇、G1及同时加入G1及G15对前列腺上皮细胞的自噬活动的作用。 结果 加入雌二醇、G1后24 h开始,雌二醇组及G1组的吸光度(A)值均低于空白对照组(P<0.01);显示雌二醇及G1对BPH-1及RWPE-1细胞处理有抑制作用,且随时间延长,抑制效应增加。雌二醇组及G1组中的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及CytoID绿色荧光强度均较空白对照组低(P<0.01),G1+G15组较G1组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及CytoID绿色荧光强度高(P<0.05)。 结论 GPER的激活可抑制细胞的自噬及增殖。

多囊卵巢综合征和正常排卵不孕女性卵泡液中T细胞亚群比例的变化

目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)和正常排卵的不孕女性卵泡液中T细胞及其亚群的比例变化。方法选取20名经Rotterdam标准诊断为PCOS的不孕女性患者(PCOS组);36名正常排卵不孕女性(NOW)作为对照(NOW组)。采用流式细胞术检测两组患者卵泡液中CD3^+T细胞、CD4^+Th细胞、CD8^+Tc细胞和CD4^+CD25^+Treg细胞的比例。结果 PCOS组患者卵泡液中CD3^+T细胞的比例由(66.2±4.5)%下降到(54.8±5.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。在检测的3个T细胞亚群中,CD8^+Tc细胞的比例低于NOW组[(28.4±3.5)%vs.(16.8±6.2)%],差异有统计学意义(P<0.01),但CD4^+Th细胞和CD4^+CD25^+Treg细胞的比例在两组间无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCOS患者卵泡液中CD3^+T细胞和CD8^+Tc细胞的比例显著下降,提示PCOS患者体内免疫系统处于紊乱状态。

钾通道四聚结构域17在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的:利用生物信息学分析钾通道四聚结构域17(KCTD17)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及临床意义,并探究相关机制。方法:结合癌症基因图谱数据库,分析KCTD17在ccRCC肿瘤和癌旁组织中转录水平差异及其与临床病理特征相关性。通过Kaplan-Meier和Cox回归分析KCTD17表达与ccRCC总体生存期和无进展生存期的临床关系。利用通路分析KCTD17在ccRCC中参与的机制。CIBERSORT数据库分析KCTD17表达与免疫细胞浸润及免疫检查点基因的相关性。结果:KCTD17在ccRCC癌组织中表达升高(癌比癌旁组织为3.08±0.89比2.49±0.87,t=4.034,P<0.001),其表达与临床分期(Ⅲ期比Ⅰ期为3.220±0.888比2.998±0.897,t=2.298,P=0.01,Ⅲ期比Ⅱ期为3.220±0.888比2.724±1.348,t=2.539,P<0.05,Ⅳ期比Ⅰ期为3.402±0.832比2.998±0.897,t=3.755,P=0.001,Ⅳ期比Ⅱ期为3.402±0.832比2.724±1.348,t=3.371,P<0.01)、分级(G4比G1为3.678±0.67比3.237±0.454,t=3.058,P=0.007;G4比G2为3.678±0.67比2.922±0.943,t=7.572,P<0.001;G4比G3为3.678±0.67比3.102±0.920,t=5.716,P<0.001)、肿瘤分期(T3期比T1期为3.283±0.857比3.008±0.896,t=3.271,P<0.001;T3期比T2期为3.283±0.857比2.767±1.264,t=3.127,P<0.01;T4期比T1期为3.925±0.997比3.008±0.896,t=2.865,P<0.05;T4期比T2期为3.925±0.997比2.767±1.264,t=3.308,P<0.01)、淋巴结转移(转移比非转移为4.018±0.593比3.054±1.027,t=5.777,P<0.001)和远处转移(转移比非转移为3.375±0.791比3.027±0.979,t=3.408,P<0.01)显著正相关。KCTD17高表达患者总体生存率(P<0.01)和无进展生存率(P<0.001)均低于低表达患者,且KCTD17是ccRCC患者总体生存期[风险比(HR):1.408,95%可信区间(CI):1.162~1.705,P<0.001]和无进展生存期(HR:1.609,95%CI:1.308~1.980,P<0.001)的独立预测因素。通路分析显示KCTD17可能通过上皮间质转化(P<0.001)、凝血(P<0.001)、缺氧(P<0.001)、补体(P<0.001)、白细胞介素(IL)-6/酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号(P<0.005)及脂肪酸代谢(P<0.05)及肿瘤免疫微环境相关通路[免疫反应调节(P<0.001)、淋巴细胞活化正向调节(P<0.001)、B细胞受体信号调节(P<0.001)、免疫效应过程调节(P<0.001)、补体激活调节(P<0.001)、经典补体激活途径(P<0.001)和免疫球蛋白受体结合(P<0.001)]参与ccRCC发生发展及导致不良预后。KCTD17高表达组的浆细胞(高表达组比低表达组为0.029±0.020比0.026±0.025,t=1.702,P<0.05)、CD8 T细胞(高表达组比低表达组为0.116±0.102比0.085±0.082,t=3.806,P<0.001)、休眠记忆CD4 T细胞(高表达组比低表达组为0.079±0.059比0.063±0.048,t=3.357,P=0.001)、激活记忆CD4 T细胞(高表达组比低表达组为0.006±0.002比0.004±0.003,t=9.023,P<0.001)、滤泡辅助性T细胞(高表达组比低表达组为0.019±0.014比0.015±0.013,t=3.409,P<0.001)、调节性T细胞(高表达组比低表达组为0.012±0.010比0.009±0.006,t=4.191,P<0.001)、休眠NK细胞(高表达组比低表达组为0.013±0.004比0.010±0.002,t=10.930,P<0.05)、激活NK细胞(高表达组比低表达组为0.033±0.025比0.027±0.020,t=2.732,P<0.05)、M0巨噬细胞(高表达组比低表达组为0.023±0.012比0.016±0.010,t=7.297,P<0.001)、M1巨噬细胞(高表达组比低表达组为0.040±0.029比0.030±0.022,t=4.742,P<0.001)、M2巨噬细胞的浸润(高表达组比低表达组为0.207±0.100比0.155±0.082,t=6.542,P<0.001)丰度升高。KCTD17表达水平与常见免疫检查点基因PD1[相关系数(cor)=0.404,P<0.001]、TIGIT(cor=0.403,P<0.001)、CTLA4(cor=0.398,P<0.001)、LAG3(cor=0.397,P<0.001)、MIF(cor=0.169,P<0.001)显著正相关。结论:KCTD17在ccRCC中高表达并提示预后不佳,可能与肿瘤微环境免疫抑制相关。

丝氨酸-精氨酸蛋白激酶2与前列腺癌细胞周期的相关性

目的探讨丝氨酸-精氨酸蛋白激酶2(SRPK2)与前列腺癌细胞周期的相关性。方法通过皮尔森相关性分析探索癌症基因组图谱(TCGA)数据库中前列腺癌和SRPK2的相关基因集, 并进一步将SRPK2相关基因集导入蛋白质相互作用关系检索工具(STRING)蛋白互作网络在线分析网站, 通过Cytoscape软件进行可视化, 提取与SRPK2相关联蛋白子网络;将上述分析所得基因通过京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据集分析出与SRPK2潜在相关的通路, 运用基因探针富集分析(GSEA)富集分析探索SRPK2所激活和抑制的相关通路;构建SRPK2敲低的前列腺癌细胞株DU145, 分为空白载体组(DU145-KO-NC)和敲低组(DU145-KO-SRPK2), 通过细胞周期检测试剂盒、细胞增殖-毒性检测试剂盒、划痕实验、侵袭实验检测细胞的周期变化、增殖、迁移和侵袭能力, 组间比较采用独立样本t检验。结果 TCGA数据库分析结果显示有2 158个基因在表达量上与SRPK2呈正相关, 779个基因与SRPK2呈负相关;通过STRING蛋白互作网络在线分析, SRPK2与SF3B1、SRSF10、PRPF40A、PRPF4B、DDX46、BCLAF1、NUDT21、CLASRP等基因除了在表达量上存在统计学相关性, 在蛋白层面上同样存在着相互作用的关系。对2 937个与SRPK2相关的基因进行功能和通路分析, 结果显示SRPK2与细胞周期相关通路相关, 如有丝分裂纺锤(Mitotic Spindle), G2~M期检查点(G2~M Checkpoint), E2F靶点(E2F Targets), Myc-V1靶点(Myc-V1 Targets)通路。KEGG数据集表明与SRPK2潜在相关的通路有细胞周期(Cell Cycle)、核糖体(Ribosome)、线粒体自噬(Mitophagy)、凋亡(Apoptosis)等。通过进一步GSEA富集分析, 结果显示SRPK2同样在前列腺癌中激活细胞周期相关通路, 如有丝分裂纺锤体(Mitotic Spindle), G2~M期检查点(G2~M Checkpoint), E2F靶点(E2F Targets)(NES>0)。为了进一步验证SRPK2对细胞周期的影响, 成功构建SRPK2敲低的DU145细胞株, 结果提示敲低SRPK2基因后, 敲低组的S期高于空白载体组(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为27.053±0.860比33.297±0.883, t=-7.166, P<0.01), 而敲低组的增殖(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为0.085±0.002比0.344±0.042, t=10.655;P<0.01)、迁移(30 h:DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为0.929±0.066比0.690±0.057, t=6.101, P<0.01)、侵袭能力(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为81.667±4.163比42.333±7.572, t=5.750, P<0.05)低于空白载体组, 差异均具有统计学意义。结论 SRPK2可能通过促进细胞周期从而影响前列腺癌进展。

日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏调节性B细胞的检测

目的探讨日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏不同亚群调节性B细胞的含量。方法使用日本血吸虫尾蚴经腹部感染C57BL/6小鼠,5周后分离感染组及正常对照组小鼠脾细胞,制备单个细胞悬液。使用细胞表面染色的方法,通过流式细胞术检测小鼠CD19^+B细胞含量及表达免疫调节相关分子CD5、CD11b以及PD-1的B细胞亚群的含量。结果 C57BL/6小鼠感染日本血吸虫后,脾脏B细胞的百分比含量及数目明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);CD5^+和CD11b^+B细胞的含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而PD-1^+B细胞的含量变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论日本血吸虫感染能在C57BL/6小鼠体内诱导CD5^+和CD11b^+调节性B细胞产生。

C57BL/6小鼠肺组织CD103^+T细胞的免疫学特性

为了研究正常C57BL/6小鼠肺脏组织中CD103^+T细胞的数量、表型和功能等免疫学特性,本研究选取C57BL/6小鼠肺脏组织,制备冰冻切片进行免疫荧光染色,可观察到小鼠肺脏组织中CD103的表达及其分布情况;制备单细胞悬液,使用FCM检测肺CD103^+T细胞的表型特征;用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)和离子霉素刺激后,检测细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-9的分泌情况。实验结果显示,小鼠肺脏组织中CD103主要在CD8^+T淋巴细胞中表达,比例高达(51.28±10.37)%。在CD8^+CD103^+T细胞中,CD62L的表达率为(79.63±2.87)%,明显高于CD103^-T细胞(47.83±9.55)%(P<0.01);但是CD103^-T细胞比CD103^+T细胞表达更高水平的IFN-γ(P<0.01)和IL-9(P<0.05)。以上结果表明在C57BL/6小鼠肺脏组织中存在一群表型和功能独立的CD103^+T细胞。