真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达

目的构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达。方法提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定。Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况。划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响。结果酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05)。结论成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒。A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关。

染料木素对阿霉素诱导心脏毒性保护作用的初步研究

目的探讨染料木素(genistein,Gen)对阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的心脏毒性的保护作用及可能机制。方法将24只SD大鼠随机分为对照组(Ctrl)、染料木素组(Gen)、阿霉素诱导组(Dox)和染料木素治疗组(Gen+Dox)。除Ctrl组,其余组分别给予相应药物,用药6周。给药结束后计算大鼠心重/体重比和体长/尾长比,空腹采血检测肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量,苏木精-伊红染色观察大鼠心肌组织形态学变化,免疫组化技术检测大鼠心肌组织中Caspase-3的表达,超氧化物阴离子荧光探针(dihydroethidium,DHE)染色半定量法检测大鼠心肌细胞H9C2的荧光表达,Western blot检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各组大鼠心重/体重及体长/尾长比值略有变化,但差异无统计学意义(P>0.05)。与Ctrl组相比,Dox组血清中CK和LDH含量明显升高(P<0.01),Gen+Dox治疗组上述指标显著下降(P<0.01)。Dox组心肌组织呈片状坏死、心肌纤维增多、心肌细胞凋亡明显,而染料木素治疗后心肌细胞排列较为整齐、结构清晰、心肌纤维少量。Dox组细胞DHE荧光表达较Ctrl组显著增强,Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.05),染料木素治疗后DHE荧光表达及Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论染料木素可能通过缓解氧化应激,下调Caspase-3蛋白表达从而抑制细胞凋亡,进而对阿霉素诱导的心脏毒性发挥保护作用。