益心解毒方对气虚血瘀证心衰大鼠心肌组织中血小板——内皮细胞黏附分子和血管内皮生长因子表达的影响研究

目的从血管新生的角度,探讨益心解毒方对气虚血瘀证心衰大鼠心肌保护的作用机制。方法利用左冠状动脉结扎术制备大鼠心梗后心衰动物模型,通过宏观表征判定该疾病模型的证候属性,将成模后存活大鼠随机分为8组:假手术组,模型组,益心解毒方高、中、低剂量组,中西结合组,福辛普利组和芪苈强心组。治疗4周后取梗死边缘区组织进行Western Blot及RT-PCR法检测血小板—内皮细胞黏附分子(又称CD31)和血管内皮生长因子的表达。结果 Western Blot结果显示:模型组大鼠心肌组织中CD31蛋白表达量较假手术组显著下降(P=0.004),而高剂量组(P=0.042)、低剂量组(P=0.027)和芪苈强心组(P=0.015)与模型组相比均可提高心肌组织中CD31的表达。PCR结果显示:与假手术组相比,大鼠心肌组织的血管内皮生长因子表达在模型组(P=0.047),高剂量(P=0.023),中西结合组(P=0.008)均显著升高;而低剂量组大鼠心肌组织中血管内皮生长因子的表达显著低于模型组(P=0.004)和其它治疗组(P<0.05)。结论益心解毒方对心梗所致气虚血瘀证心衰大鼠的心肌保护作用,可能是通过促进血管新生实现的,其机制可能与血管内皮生长因子有关,且具有剂量相关性。

丹七片对心肌缺血小型猪心脏结构与功能的影响

目的:探讨丹七片对慢性心肌缺血小型猪心脏结构与功能的影响。方法:缩窄环法制备小型猪心肌缺血模型,给予丹七片9 g/只·d(临床等效剂量)4周。超声心动图、大体病理观察、心肌组织石蜡切片HE和Masson染色分析心脏结构与功能的变化。结果:丹七片组动物室间隔收缩末厚度、心内膜下白色瘢痕组织的数量及大小、绿染胶原沉积面积等方面均较模型组显著改善。结论:丹七片虽不能逆转整体心功能,但具有一定的减小缺血范围、改善慢性心肌缺血与心室重构的作用。

丹七片干预心肌缺血的血浆蛋白质组学研究

目的探讨丹七片干预心肌缺血的作用机制。方法缩窄环法制备小型猪心肌缺血模型,给予丹七片每次9g/(只·天)临床等效剂量,4周。双向凝胶电泳-质谱联用法分析血浆蛋白表达谱变化。结果与模型组比较,丹七片下调蛋白点9个(丰度比值≤0.5)、上调蛋白点11个(比值≥1.5)。鉴定出的上调蛋白为载脂蛋白A1和载脂蛋白E。结论通过上调载脂蛋白A1和载脂蛋白E抑制缺血心肌过度的炎症反应,可能是丹七片干预心肌缺血的主要机制之一。

基于双向凝胶电泳-质谱技术的小型猪心肌缺血气虚血瘀证血浆特征蛋白质研究

目的采用双向凝胶电泳-质谱技术,探讨小型猪心肌缺血气虚血瘀证的特征性血浆蛋白质表达谱,筛选证候特征性生物学标志物、证候主要表征的相关蛋白质。方法心肌缺血气虚血瘀证小型猪和假手术对照组各6只。数码相机拍照并分析舌象r、g、b值,心脏超声检测左室射血分数。动物血浆采用24cm、PH3-11NL的胶条和13%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,考马斯亮蓝染色、扫描后,采用Imagemaster 2DPlatinum 6.0软件进行凝胶蛋白点检测及匹配,以实验组与对照组的vol%比值>2或<0.5作为可能的差异蛋白点。采用基质辅助激光解吸附的时间飞行质谱对差异蛋白点进行鉴定。结果与对照组相比,心肌缺血气虚血瘀证小型猪血浆中检测到18种下调蛋白,6种上调蛋白。质谱鉴定获得阳性结果的下调蛋白为动力蛋白重链6和视黄醇结合蛋白4,均与能量代谢有关。左室射血分数与差异蛋白Spot 22线性相关,值分别与Spot20、Spot 6、Spot 20呈线性相关。结论能量代谢异常可能是心肌缺血气虚血瘀证的特征性病生理进程之一。蛋白质组学研究提示的差异血浆蛋白有可能成为证候诊断的标志物,也可能作为宏观表征的有效替代指征。

益心解毒方对NOX2亚基和NOX4亚基过表达及小干扰RNA引起的心肌细胞还原型辅酶Ⅱ氧化酶活性变化的机制研究

目的观察益心解毒方含药血清对NOX2、NOX4亚基过表达和小干扰RNA(RNAi)导致的H9C2心肌细胞还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性的变化,探讨益心解毒方的作用机制。方法采用正常雄性Sprague-Dawley大鼠16只,构建针对NOX2、NOX4亚基的过表达质粒和RNAi质粒。采用转染试剂瞬时转染H9C2心肌细胞,流式细胞术检测转染率,转染24 h后分组(正常H9C2细胞组、过表达组、H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组)给予不同剂量的含药血清干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果转染NOX2亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。转染NOX4亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NOX2、NOX4亚基的过表达可以提高NADPH氧化酶活性,而RNAi表达可以沉默NOX2、NOX4亚基,从而降低NADPH氧化酶活性,益心解毒方不会直接影响NADPH氧化酶活性。实验研究表明干预和抑制NOX2、NOX4亚基的NADPH氧化酶活性调控环节,降低心肌活性氧(ROS)水平,保护心肌细胞,改善心功能,可能是益心解毒方发挥药效的重要机制。

基于文献挖掘的中医证候生物学基础初步研究

目的以中医常见证型气虚证为切入点,从生物分子网络角度探索中医证候生物学基础。方法建立神经-内分泌-免疫(NEI)相关基因数据字典及气虚证表征术语词库,并通过Genclip软件检索气虚证表征文献并挖掘气虚证特征性NEI基因,探索证候的生物活性物质。结果对挖掘出的基因数据进行分析显示,"气虚证"相关基因与内分泌、细胞信号传导、造血细胞系、免疫缺陷等相关。中医证型的内在生物学特征可以在NEI水平上进行有效的辨识。结论文献挖掘作为一种新的发现证候生物学指标的方法具有一定的可行性,建议将其扩大到其他证型的研究中,验证该方法的普适性和可靠性。

创伤较小的小鼠主动脉弓缩窄术的建立

目的探索一种对小鼠创伤较小的主动脉弓缩窄术的手术方法。方法 32只雄性昆明(KM)小鼠,随机分为假手术10只及模型(主动脉弓缩窄术)组22只;模型组动物麻醉后仰卧位固定,行气管插管接通呼吸机。右侧卧位重新固定,左侧第二肋间开胸,分离主动脉弓并用5-0真丝编织线将其套扎在26G注射器针头行缩窄操作,缩窄后退出针头,关胸。假手术组动物同期行开胸,而不进行缩窄操作,其余操作步骤与模型组相同。造模期间及造模后4周记录动物死亡情况;于术后4周对两组小鼠行心脏超声及心脏病理学检测。结果 1模型组总死亡率约为32%。2超声心动图结果:模型组主动脉弓缩窄处血流速率均大于2 400 mm/s;假手术组主动脉弓缩窄处血流速率均小于900 mm/s。与假手术组比较,模型组左室收缩末期内径(LVSD)、左心室收缩期容积(LVSV)、左心室重量(LV mass,LVM)、左心室重量指数(LV mass index,LVMI)明显增加(P<0.05);射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)显著降低(P<0.05)。3病理切片可见血管扩张及血管壁增厚表现。结论本造模方法能够成功增加心脏后负荷,诱导后负荷增加所致的心肌肥厚病理生理过程。与国内报道较多的劈开胸骨的造模方法相比,该造模方法对模型动物的损伤更小,在与心肌肥厚病理生理机制及相关药效研究中具有很大的应用价值。

慢性心力衰竭模型大鼠气虚血瘀证相关信息的评价

目的:建立慢性心力衰竭大鼠模型,并对模型大鼠气虚证和血瘀证相关信息进行客观评价。方法:采用左冠状动脉前降支高位结扎法复制大鼠心力衰竭模型,术后多个时间点,动态观察大鼠宏观体征,计算大鼠应激后呼吸频率,采集大鼠足底图像进行色度分析,同时术后在第27-30天对大鼠分别进行游泳力竭实验、旷场实验、超声心动检测、血流动力学检测。结果:模型组大鼠从术后第7天开始,各时间点模型组大鼠应激后呼吸频率较假手术大鼠均明显增加(P<0.05,P<0.01),足底R、G、B值较假手术组大鼠均降低(P<0.05,P<0.01);术后第27天模型组旷场实验总运动距离和平均运动速度明显下降(P<0.01);术后第28天模型组游泳力竭时间缩短(P<0.01);术后第29天超声心动数据和术后第30天血流动力学检测数据表明模型组大鼠心功能下降。结论:左冠状动脉前降支高位结扎法可以复制慢性心力衰竭模型,并且该模型在术后第7-28天可辨证为气虚血瘀证。

益心解毒方对气虚血瘀证心力衰竭大鼠心肌组织中NOX2和NOX4的影响

目的:从氧化应激角度探讨益心解毒方(YXJDF)对气虚血瘀证心力衰竭大鼠心肌保护的作用机制。方法:120只SPF级雌性SD大鼠按体质量分为手术组(110只)和假手术组(10只),手术组利用左冠状动脉结扎术制备大鼠心力衰竭模型,将成模后存活大鼠随机分为7组:模型组,YXJDF高、中、低剂量组,中西结合组,福辛普利组和芪苈强心组,每组10只。治疗4周后取梗死边缘区组织进行western blot及RT-PCR法检测NOX4及NOX2的表达。结果:Western blot示与假手术组相比,模型组的NOX2和NOX4的表达均明显升高(P<0.01);与模型组相比,YXJDF中剂量组可显著下调心力衰竭大鼠心肌组织中NOX2(P<0.01)及NOX4(P<0.05)的蛋白表达,较其它各治疗组更有优势;RT-PCR结果显示各治疗组均可明显下调心力衰竭大鼠心肌组织中NOX4的表达(P<0.01,P<0.05),以低剂量组下降最多。结论:YXJDF对气虚血瘀证心力衰竭大鼠的心肌保护作用,可能是通过其对损伤心肌组织内氧化应激的调控实现的。

中医医院冠心病慢性心力衰竭患者临床流行病学调查

目的通过调查中医医院基础病因为冠心病的慢性心力衰竭(CHF)患者的临床流行病学特点,为CHF患者的诊疗提供资料。方法制定慢性心力衰竭临床流行病学调查表,对全国17家中医医院的冠心病CHF患者进行病例调查。结果共有439例患者入选,以老年患者为主,男女比例为1.3∶1.0,男性患者平均年龄小于女性。合并疾病以高血压病、糖尿病、心律失常、脑血管疾病为主。诱因以过度劳累、原有疾病加重、情绪波动、感染等为主,且多由2种以上诱因导致。冠心病CHF患者中的病性证候要素出现频率最多的依次为气虚(81.5%)、血瘀(79.5%)、水饮(27.3%)、痰浊(20.0%)、阴虚(19.1%)、阳虚(18.2%),病位证候要素中以心(90.4%)为主,其次为肺(33.0%)、脾(32.6%)、肾(31.7%)、肝(15.7%)。CHF患者的证候分布中以气虚血瘀、气阴两虚证为常见。结论冠心病CHF患者的证候分布中虚证、实证多共同出现,本研究能够为冠心病CHF患者的中医诊治提供一定的流行病学依据。

中医古籍中的“心衰”及其与心力衰竭的关系

"心衰"为现代医学心力衰竭的简称,中医古籍中已经出现"心衰"二字,本文通过探讨古籍中"心衰"最早出现的年代及具体含义,比较其与现代心力衰竭的异同。从症状、体征、病史等的相似性方面对古代文献进行溯源,以期更加准确地反映古代中医学对现代疾病的认识。

益心解毒方对AngⅡ诱导的H9c2细胞NADPH氧化酶表达作用机制的研究

目的:采用H9c2心肌细胞系,研究益心解毒方含药血清抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞Nox2、Nox4型NADPH氧化酶表达的影响。方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞,同步化后进行实验,实验分为正常组、模型组、益心解毒方组、二亚苯基碘(DPI)对照组。采用乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)法测定H9c2心肌细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR法和Western-blot法测定Nox2亚基和Nox4亚基的表达量。结果:研究发现,与模型组比较,益心解毒方含药血清能抑制ROS和Nox2、Nox4亚基表达的增高,其中益心解毒方低剂量组作用最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:结合课题组前期的动物实验研究表明,益心解毒方在改善心功能、减缓心室重构等方面药效显著,而抑制NADPH氧化酶活性,降低心肌ROS水平可能是其发挥药效的重要机制。

基于五运六气学说的慢性心力衰竭患者发病与出生日期关联性分析(英文)

目的:探讨慢性心力衰竭患者发病、中医证型、证素与出生日期五运六气相同属性因子叠加效应的关联性。方法:收集17家中医院慢性心力衰竭患者相关资料,分析出生日期五运六气因子的分布,采用非参数检验分析患者与总体人群出生日期五运六气相同属性因子叠加分布的差异,采用Logistic回归分析出生日期五运六气因子与证素的关联性。结果:纳入1 013例患者,患者与总体人群出生日期的五运六气相同属性因子叠加分布无显著性差异,Logistic回归显示司天的太阳(ST5)是慢性心力衰竭患者气虚证和阴虚证的危险因素,客气的太阴(KQ2)是血瘀证的危险因素,主气的太阳(ZQ5)是水停证的危险因素。结论:慢性心力衰竭患者出生日期五运六气相同属性因子叠加效应对发病、证素的影响未显示出显著性差异,出生日期五运六气因子对疾病的影响并非如预想的那么重要。

心复康口服液对心梗后心衰大鼠心肌组织CK-MM mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察心复康口服液对心肌梗死心衰大鼠心肌组织肌型肌酸激酶同工酶(CK-MM)mRNA及CK-MM蛋白表达的影响。方法:采用结扎SD大鼠左冠状动脉前降支复制心肌梗死后心衰大鼠模型,大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Capt 0.1 g.kg-1组(Capt组)、心复康口服液组5.4 g.kg-1(XFK组),分别于术后24 h灌胃给药,给药4周末,用Real-time RT-PCR方法,Western blotting方法检测心肌细胞能量穿梭关键酶CK-MM mRNA和蛋白表达水平。结果:①与假手术组比较,模型组左心室心肌CK-MM的mRNA表达水平下调,在第4周末,统计学有显著性意义(P<0.01);与模型组比较,Capt组、XFK组心肌CK-MM mRNA、蛋白表达均上调,在第4周末,统计学有显著性意义(P<0.01)。②与Captopril组比较,XFK组心肌CK-MM mRNA表达水平在第4周末下调,统计学有显著性意义(P<0.05);XFK组心肌CK-MM蛋白表达水平在第4周末比较无显著性意义。结论:心复康口服液可上调心梗后心衰大鼠心肌细胞CK-MM mRNA的表达,促进CK-MM蛋白含量增加,达到改善CHF心肌细胞能量穿梭紊乱,重塑心梗后心衰大鼠心肌能量代谢作用。