表达鸡毒支原体TM1蛋白基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

为研制安全、有效的新型鸡毒支原体(MG)疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达MG TM1蛋白的重组病毒rLa-TM1,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为MG活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光试验表明TM1蛋白获得正确表达;经测定,重组病毒平均鸡胚致死时间(MDT)为132 h,脑内致死指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)均为0,保持了LaSota亲本株的低致病性;rLa-TM1接种鸡胚所收集尿囊液中的病毒滴度可高达每毫升109.5EID50以上,证明重组病毒保持了LaSota亲本株高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-TM1接种1周龄的雏鸡后,可以诱导显著的MG抗体反应;攻毒保护试验证明其保护率可以达90%,而对照组全部发病(10/10)。本研究表明重组病毒rLa-TM1可以作为MG重组病毒活载体疫苗的候选疫苗。

鸡传染性支气管炎M41毒株S1基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法初步建立

为获得鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株的全长S1蛋白,并以S1蛋白为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法,试验采用RT-PCR方法扩增出S1基因,将其克隆到pBluescriptⅡKS(+)载体中,酶切、测序鉴定后将S1基因导入融合表达载体pMAL-c2X中,将重组质粒转化大肠杆菌TB1,IPTG诱导后,应用SDS-PAGE及Western-blot检测蛋白表达情况。结果表明:融合蛋白得到了表达;以纯化的重组蛋白作为包被抗原,在包被量为3.2μg/孔、血清160倍稀释条件下P/N值最大,初步建立了IBV抗体间接ELISA检测方法。