PCR与DNA杂交技术在细粒棘球蚴诊断方面的实验研究

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,建立 DIG标记DNA杂交诊断技术。方法 根据细粒棘球蚴基因片段克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′- GGAATGGAGAGAAGTTAC- 3′ P2 5′- GCAACCTCCGGAACTTGC- 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经 PCR扩增获得 4 71bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用 DIG标记 DNA ,将制备成的特异性核酸探针用于细粒棘球蚴检测。结果 经对大肠杆菌、粪肠杆菌、结核分支杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行 PCR扩增和 DIG标记 DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 4 71bp特异性区带。 PCR的灵敏性为检出单个原头蚴及 10 0～ 10 fg水平的 DNA,而斑点杂交的敏感性为 2 5 0 0 fg。异源性 DNA即使提高点膜量 ,亦不出现阳性反应。结论 配以 DIG标记的 PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。

OSAHS和CHD发病率与GMP-140、D-二聚体变化的相关性

目的了解血浆GMP-140、D-二聚体在重度阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)患者和冠心病(coronary heart disease,CHD)患者体内浓度的变化,探讨OSAHS患者CHD发病率增高的机制。方法对重度OSAHS组18例、CHD组22例、OSAHS合并CHD组12例和健康对照组20例应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中GMP-140与D-二聚体浓度,应用统计学方法处理数据。结果OSAHS组、CHD组和OSAHS合并CHD组(合并组)血浆GMP-140浓度分别为(18.84±1.99)ng/ml、(18.82±1.59)ng/ml和(18.88±1.79)ng/ml,与正常对照组(12.79±1.32)ng/ml有明显差异(P<0.05);三组的D-二聚体浓度分别为(0.43±0.003)mg/L、(0.50±0.001)mg/L、(0.50±0.004)mg/L,均显著高于健康对照组(0.22±0.001)mg/L(P<0.05)。而OSAHS组、CHD组和合并组之间GMP-140浓度、D-二聚体浓度相比较无明显差异(P>0.05)。且GMP-140与D-二聚体浓度呈正相关,相关系数γ=0.69,P<0.05。结论重度OSAHS患者因乏氧体内存在血管内皮(包括冠脉内皮)损伤、血小板活化、凝血系统激活和继发性纤溶系统功能亢进,这些可能是OSAHS患者CHD的发生、发展机制。

PCR检测细粒棘球蚴及DIG标记DNA杂交诊断技术的建立

目的 :该项研究旨在探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,同时建立Digoxinum(DIG)标记DNA杂交诊断技术。方法 :根据细粒棘球蚴基因片断克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′—GGAATGGAGAGAAGTTAC— 3′,P2 5′—GCAACCTCCGGAACTTGC— 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经PCR扩增获得 471bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用DIG标记DNA ,制备成功特异性核酸探针并用于细粒棘球蚴检测。结果 :经对大肠杆菌、痢疾杆菌、结核分枝杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行PCR扩增和DIG标记DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 471bp特异性区带。PCR的灵敏性为可检出单个原头蚴及 1 0 0— 1 0fg水平的DNA ,而斑点杂交的特异性为 2 5 0 0fg。异源性DNA即使提高点膜量 ,亦不呈现阳性反应。结论 :配以DIG标记的PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。

冠心病患者血浆脂联素水平变化的探讨

目的探讨冠心病患者血浆脂联素(Adiponectin)水平的变化及与动脉粥样硬化发生的关系。方法选择冠心病(CAD)患者40例作为实验组,其中急性冠脉综合征(ACS)20例,包括急性心肌梗死(AMI)11例,不稳定性心绞痛(UA)9例,稳定性心绞痛(SAP)20例;选择排除心血管系统疾病的健康体检者20例作为对照组,分别采血测定血浆脂联素水平,比较冠心病组与对照组血浆脂联素水平有无差异。结果ACS组血浆脂联素水平低于SAP组和对照组,有显著性差异(P<0.05,P<0.001),SAP组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂联素与冠脉病变稳定性显著相关,脂联素水平可做为预测病情,诊断冠心病的一个指标。

抗HLA－Ⅰ、Ⅱ类抗原的抗体血清的筛选与特异性鉴定

抗ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原的抗体血清的筛选与特异性鉴定内蒙古自治区医院（０１００１７）冯笑梅，李克延，鲁辛辛，韩晓芳北京友谊医院李哲先，尔秀江，贾保祥自１９５８年Ｄａｕｓｓｅｔ利用接受输血病人血清鉴定第一个白细胞抗原Ｍａｃ（ＨＬＡ－Ａ２）以来，ＨＬＡ已迅...

SARS血清快速检测纸条的研制与早期鉴别诊断应用的探讨

目的:传染性非典型肺炎也称"严重急性呼吸综合征"(severe acute respiratory syndrome,SARS)血清快速检测试纸条的研制以及在SARS患者、发热及疑似SARS与健康人的早期鉴别诊断应用的探讨。方法:收集了13例SARS确诊患者、135例发热及疑似SARS患者、10例胸膜炎患者、9例肺癌患者、30例肺结核患者和50例健康人的血清(对照组),应用SDS-PAGE分别对上述患者、健康人血清进行电泳,应用离子交换层析法分离纯化SARS患者血清分子量为61 kDa的特种蛋白,Western blotting鉴定分离纯化的特种蛋白,氨基酸序列测定仪分析特种蛋白的氨基酸序列,酶化学法制备SARS血清快速试纸条。结果:分子量为61 kDa的特种蛋白仅存在于SARS患者血清中,研制的SARS血清快速检测试纸条的敏感性、特异性和准确度分别为92.31%、97.12%、97.00%。结论:在SARS早期鉴别诊断中,SARS血清快速试纸条的成功研制有较高的临床应用价值,有助于SARS的排除,值得临床推广应用。

耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性监测及分析

目的 监测葡萄球菌 (包括 MRS和 MSS株 )的耐药性 ,为临床合理选择抗生素提供依据。方法 药敏试验及耐甲氧西林葡萄球菌的检测均采用琼脂扩散法 (K- B法 ) ,操作及结果判断均按 NCCL S标准执行。结果 金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的分离率分别占 2 7.3%和 72 .7% ;MRSA和 MRSCON株的检出率分别为33.8%和 78.6 % ;MRSA株对喹诺酮类的耐药性 (2 2 %～ 5 5 % )明显低于 MRSCON株 (84 %～ 90 % ) ;除万古霉素、呋喃妥因、阿米卡星和部分青霉素类外 ,MRSA和 MRSCON株的耐药性显著高于 MSSA和 MSSCON株(P<0 .0 5 ) ;未发现 VRS株。结论 由 MRS菌株引起的严重感染首选万古霉素治疗 ,发现 MRS株实验室要根据 NCCL S的有关规定修订药敏报告 ,并且及时切断传播途径 。

克雷伯菌属的耐药性分析

目的通过147株,其中15株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和132株非产超广谱β内酰胺酶株克雷伯菌属对22种抗菌药物的耐药性分析,指导临床合理用药。方法细菌鉴定采用API系统和手工法,药敏试验和产ESBLs细菌的检测采用KB法,结果判定按NCCLS标准执行,数据统计采用上海金仕达软件。结果克雷伯菌属的检出以咽拭子和痰标本为主;产ESBLS克雷伯菌属检出率为10.2%;产ESBLs克雷伯菌属对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦耐药性最低(0～1.5%),对阿米卡星有一定的作用(耐药率40.0%);非产ESBLs克雷伯菌属对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、三代头孢、氨基糖苷类、喹诺酮类、呋喃妥因具有良好的作用(耐药率6.8%～25.0%);产ESBLs克雷伯菌属的耐药性明显高于非产ESBLs菌株(P<0.001)。结论临床应根据体外药敏试验及产ESBLS细菌检测的结果,合理选择抗菌药物。

内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎流行现状分析

目的探讨内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎病毒(HDV)感染情况以及分子流行病学特点。方法纳入2019年4月—2020年10月在国际蒙医医院就诊的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性的患者230例,根据患者情况分为乙型肝炎合并肝硬化组(n=18)和乙型肝炎组(n=212);并以HBsAg定量值250 IU/mL为界限将患者分为HBsAg<250 IU/mL组(n=104)和HBsAg≥250 IU/mL组(n=126)。采用ELISA方法进行HDV抗体的检测,抗体阳性者进一步利用实时定量PCR方法进行HDV RNA检测。并对HDV RNA阳性标本进行分型检测。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果HDV抗体检测阳性率为16.09%,抗体阳性患者中HDV RNA阳性率为91.89%。乙型肝炎合并肝硬化患者共18例,HDV抗体检测阳性率为44.44%,抗体阳性患者HDV RNA阳性率为100%。HBsAg<250 IU/mL的患者共104例,其中只有3例(2.88%)HDV抗体阳性。而HBsAg≥250 IU/mL的患者共126例,HDV抗体阳性率为26.98%。所有能测出分型的标本的基因分型均为1型。结论内蒙古自治区蒙古族聚集区HDV感染率较高,尤其是HBsAg≥250 IU/mL及肝硬化患者。需加强HBsAg阳性患者的丁型肝炎检测,及早诊断和治疗,防止肝炎进一步发展。

恶性胸腹水细胞FCM-DNA定量分析在临床诊断中的应用

目的 :用流式细胞仪对胸腹腔积液患者同一次胸腹水细胞进行DNA含量测定 ,并与胸腹水脱落细胞学检查进行对比分析。方法 :取 1 0 6 /ml细胞悬液 ,离心弃上清 ,加入荧光染料碘化丙啶液 ,用美国B -D公司的FACSCalibur型流式细胞仪进行测定 ,用FMu -5型微型玻片离心沉淀法脱落细胞学检查。结果 :流式细胞仪检测 40例恶性胸腹水细胞DNA非二倍体出现率为 90 % (36 / 40 ) ,脱落细胞学的检出率为 87 5%(35/ 40 )。结论 :两种方法联合应用检出率为 92 5% (37/ 40 ) ,显著提高良恶性胸腹水的判断率。

OLYMPUS AU 2700全自动生化分析仪性能评价

目的:对OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪进行性能的评价。方法:选用TP、ALT、GLU、BUN、TG和CHO等项目从测试速度的监测、试剂消耗估算、重复性、准确度、线性范围和对比实验等方面进行评价。结果:AU2700的精密度好,批内和批间CV均小于我国推荐的RCV,准确度高,最大相对偏差为5.6%;线性实验表明标本的稀释度与测定的浓度值呈直线相关;与BECKMANCX7分析仪的相关系数在0.950以上。结论:该生化分析仪具有分析速度快、试剂消耗率低、重复性好、准确度高、线性范围宽等特点,能适应临床生化实验室和科研需要。

蒙药对老年不稳定心绞痛血液流变学的影响

本文以蒙药古日古木·朱苏木口服,用以老年不稳定心绞痛患者30例,观察其服药前后血液流变学的变化,并设30例健康对照组。观察结果示:服药后全血粘度(ηb)、全血还原粘度(ηr)、血浆粘度(ηP)、血细胞聚集数(PAG)、循环滞留时问(MST)明显改善(P70. 01),红细胞刚性指数(IR)、红细胞变形性(TK)无差异(P>0. 05)。说明古日古木·朱苏木只能降低血粘度,改善血细胞聚集,缩短循环时间。对IR、TK的改善作用不明显。

尿液分析标准化在临床上的应用

目的 :建立尿液分析的标准化。方法 :NCCLS和CCCLS推荐方法。结果 :按标准化的要求进行尿液分析 ,以获得有临床价值的结果。结论 :尿液分析是临床最常用的化验指标之一 ,在临床诊治疾病中起着非常重要的作用 ,因此在实际工作中必须遵照标准化的操作规程进行操作 。

从人源噬菌体抗体库筛选出具有类脂A结合活性的抗类脂A Fab片段

近年来，发展起来的噬菌体呈现抗体库技术，为人源性抗体的制备提供了保证。我们采用G杆菌J内毒素类脂A蛋白为抗原免疫健康志愿者，结合噬菌体表面呈现抗体库技术，构建了人源性噬菌体Fab抗体库，用固相抗原递减法经“吸附-洗脱-扩增”3轮富集筛选获得34个阳性克隆。在噬菌体pcomb载体DNA中有重、轻链基因片段的插入，其大小为660bp，任选2个阳性克降制备可溶性表达Fab抗体重组质粒，

精、深、大、雅：语文有效教学内容的四大目标

目前语文课程＂最大问题,不是出在教学方法上,而是出在课程与教学内容上＂（洪宗礼、柳士镇、倪文锦《母语教材研究（9）》）,下面我就结合教学实践谈谈实施高效教学内容的几个想法。让教学在精要中高效起来鉴于本校85%以上的应届毕业生升入大学本科的实际,笔者将自己的语文教育定位为大学预科语文教育。

“江山”牌卷烟对小鼠免疫功能、SOD及LPO的影响

研究了"江山"牌卷烟对小鼠免疫功能、及对小鼠肝脏组织过氧化脂质(LPO)含量和超过氧化物酶(SOD)活性的影响。通过给小鼠染毒,观察"江山"牌卷烟对小鼠网状内皮系统吞噬廓清能力、对二硝基氟苯(DNFB)所致迟发型超敏反应、血清溶血素抗体的影响,采用硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化酶法测定小鼠肝脏组织中LPO含量和SOD活性。结果表明"江山"牌卷烟可明显拮抗对照卷烟对小鼠DNFB诱导迟发型超敏反应的抑制作用,提高小鼠溶血素水平,小鼠肝组织中SOD的活性明显升高,LPO含量明显降低。与对照卷烟比较,"江山"牌卷烟可能具有提高小鼠免疫功能的作用。