腺病毒Smad7转染对阿霉素肾病大鼠蛋白尿的影响

目的在阿霉素(ADR)肾病大鼠模型中,探讨过表达Smad 7对肾病蛋白尿及其病理的影响。方法本实验用单次尾静脉注射建立阿霉素肾病模型,通过构建重组腺病毒介导外源性Smad 7基因,单侧肾动脉灌注转染Smad 7至靶肾脏。用荧光显微镜检测Smad 7重组腺病毒的转染效果,用邻苯三酚红比色法测定大鼠24 h尿蛋白,HE染色检测各组肾脏病理改变。结果 1用6.5 mg/kg ADR一次性尾静脉注射SD大鼠可成功构建肾病模型;4周末似微小病变型肾病。2单侧肾动脉灌注能有效将介导Smad 7的重组腺病毒转染至大鼠靶肾脏。34周末肾病重组腺病毒(Ad-Smad7)组尿蛋白(38.4±6.0)较ADR组(69.58±10.63)减少(P<0.05)。4荧光显微镜显示肾病Ad-smad7组大鼠靶肾中,Ad-Smad7主要在肾小管表达,肾小球表达少。5肾病Ad-Smad7组肾脏病理改变轻微,肾病Ad-GFP组、ADR组病理较严重,出现类似局灶节段性肾小球硬化的慢性肾脏病病理表现。结论单侧肾动脉灌注有效地使重组腺病毒介导的Smad 7转染至大鼠靶肾脏,使Smad 7在该肾过表达,可减轻肾病大鼠蛋白尿,并改善阿霉素肾病病理。

过表达Smad7对AngⅡ诱导GMC增殖的影响

目的:通过对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)转染外源性Smad 7基因,探讨Smad 7对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导GMC增殖活性的影响及可能机制。方法:分别在体外用腺病毒介导载体p Ad Track-CMVSmad 7和p Ad Track-CMV-GFP(阴性对照组)转染大鼠GMC,用RT-PCR鉴定Smad 7 m RNA过表达效率;用二甲苯基碘(DPI)阻滞活性氧(ROS)生成,DCFH-DA法检测细胞内ROS生成水平;用Western blot法鉴定Smad 7蛋白过表达效率及IκBα的蛋白表达变化;CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测GMC增殖变化。结果:(1)p Ad Track-CMV-Smad 7转染GMC后,外源性Smad 7的m RNA和蛋白水平均明显升高;(2)AngⅡ能减少IκBα的表达,DPI与过表达Smad 7均能使IκBα表达增多;(3)AngⅡ促进ROS生成,DPI能阻断AngⅡ的促ROS作用,过表达Smad 7也能抑制ROS生成,差异有统计学意义(P<0.05);⑷AngⅡ促进GMC增殖,过表达Smad 7与DPI均能明显缓解AngⅡ的促增殖作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Smad 7通过抑制ROS的产生,诱导IκBα表达增多,从而抑制肾脏炎症反应,缓解AngⅡ对GMC的促增殖效应。