蓖麻RcSCP基因克隆与生物信息学分析

植物的丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidases,简称SCP)是一类属于α/β水解酶家族的蛋白酶,在许多生化途径(包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共轭、种子萌发相关蛋白质的降解过程)中起着重要作用。丝氨酸羧肽酶基因是植物的一种抗逆基因,在植物生长发育及抵抗逆境方面发挥着重要作用。蓖麻作为重要的油料作物,用途广泛。本研究利用c DNA末端快速克隆(RACE)方法克隆蓖麻Rc SCP基因的3'端、5'端片段,最后设计全长引物获得蓖麻Rc SCP全长序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,丝氨酸羧肽酶蛋白基因的c DNA完整开放阅读框序列为1 377 bp,推测它可编码458个氨基酸;蓖麻Rc SCP蛋白含有丝氨酸羧肽酶蛋白家族保守区,预测它定位于细胞质中。

蓖麻BCH基因的克隆与序列分析

β-胡萝卜素羟化酶(beta-carotene hydroxylase,BCH)是植物类胡萝卜素合成代谢中的关键酶,在植物抵抗逆境环境方面具有重要意义.利用RACE方法克隆了蓖麻BCH基因的3'端和5'端片段.最后设计全长引物获得蓖麻BCH全长序列.结果表明:蓖麻BCH基因的编码区的核苷酸数为912bp,推测编码303个氨基酸;具有典型的β-胡萝卜素羟化酶蛋白的10个保守的组氨酸位点(h);属于跨膜蛋白.蓖麻BCH蛋白与其它植物的β-胡萝卜素羟化酶蛋白有较高同源性,一致指数达73.43%.

蓖麻根的研究进展

蓖麻具有较强的抗逆性(抗旱、抗盐、抗重金属等),是土壤改良的优良作物,其根部发挥着重要的作用。蓖麻根的化学成分具有较高的药用价值,是良好的中草药。从蓖麻根的形态特征和功能、抗逆性、土壤改良以及化学成分的药用价值等方面对蓖麻根的研究进展进行了综述。

蓖麻PAL基因片段的克隆与序列分析

利用RACE(rapid-amplification of cDNA end)方法,以蓖麻叶片提取总的RNA为模板克隆了蓖麻苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineamononiar-lyase,PAL)基因片段.分析表明:该基因片段编码区为1071bp,推测编码357个氨基酸.与所选取的10种植物同类蛋白氨基酸序列进行对比,一致性在75%-81%之间,并具有PAL蛋白家族典型的结构域,把该基因命名为RcPAL1,为后续试验奠定基础.

沙葱总RNA的提取与质量分析

以沙葱种子和沙葱幼叶为材料,分别用RNAiso Plus试剂法、RNAiso Plus醋酸钠改进法、CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法4种不同的方法提取沙葱总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,沙葱不同组织总RNA提取的最优方法有所不同.采用CTAB-LiCl法能有效地提取出沙葱种子高质量、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,没有明显的蛋白和基因组DNA的污染.采用RNAiso Plus醋酸钠改进法能有效地去除沙葱幼叶中多糖的干扰,所提取的RNA条带清晰,完整性好,是沙葱幼叶总RNA提取的有效方法.

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法.[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法.[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8 ～2.0.将提取的叶片总RNA反转录成cDNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500bp处.[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究.

盐胁迫下逆向转运蛋白对植物耐盐性影响的研究进展

在高浓度Na Cl胁迫下,土壤中Na^+和Cl^-浓度过高将导致植物机体出现渗透压改变和离子中毒的现象,致使植物代谢异常。此外,盐胁迫还影响植物的Ca^(2+)和K^+等矿质元素的吸收。植物为抵御高浓度盐对自身的毒害作用,通过膜逆向转运蛋白将细胞内过多的Na^+向外排出细胞和将Na^+运入液泡区隔化。对膜逆向转运蛋白在Na^+和Cl^-的吸收、外排和离子区隔化以及膜逆向转运蛋白在植物抗盐性中的重要作用进行了综述。

蓖麻RcNHX3基因的克隆与生物信息学分析

液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(NHX)是植物抵御盐害的关键基因.本研究利用RACE方法克隆了蓖麻Rc NHX3基因的3'端和5'端片段.最后设计全长引物获得蓖麻RcNHX3全长序列,并对其进行生物信息学分析.结果表明,蓖麻液泡膜型钠氢逆向转运蛋白基因的c DNA完整的开放阅读框序列为1611bp,推测其可编码536个氨基酸;含有Na+/H+交换泵(^(50)NES^(52))是液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白重要的特征之一;存在12个跨膜结构域,属于跨膜蛋白;预测NHX3蛋白的二级结构和三级结构.

蓖麻RcNHX2基因克隆与生物信息学分析

液泡膜型钠氢逆向转运蛋白(Tonoplast Na^+/H^+antiporters,NHX)在植物耐盐方面具有重要意义。本研究利用RACE方法克隆了蓖麻Rc NHX2基因的3'端和5'端片段。最后设计全长引物获得蓖麻Rc NHX2全长序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,蓖麻液泡膜型钠氢逆向转运蛋白基因的c DNA完整的开放阅读框序列为1 626 bp,推测其可编码541个氨基酸;含有典型的液泡膜型钠氢逆向转运蛋白典型的Na^+/H^+交换泵(^(50)NES^(52))和氨氯吡嗪咪的结合位点(^(84)LFFIYLLPPI^(93));存在12个跨膜结构域,属于跨膜蛋白;预测其定位于细胞质膜和液泡膜及内质网膜。

八宝景天再生体系的构建

八宝景天是景天科景天属多年生肉质草本植物景天。以八宝景天为研究对象,构建八宝景天的再生体系。实验结果如下:以八宝景天的叶片为外植体;加入抗坏血酸的最佳浓度为100mg/L;诱导愈伤组织培养基的最佳PGR浓度配比为6-BA(1.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L),诱导芽培养基的最佳PGR浓度配比为6-BA(3.0mg/L)+NAA(0.1mg/L);八宝景天的无根苗的生根培养基为1/2MS培养基+蔗糖(30g/L)+6-BA(0mg/L)+NAA(0.1mg/L)。

植物HKT转运蛋白基因的研究进展

HKT转运蛋白是存在质膜上的一种离子运输体,是生物界普遍存在的负责Na+运输和K+-Na+同向运输的一种跨膜蛋白。HKT转运蛋白受到HKT家族基因表达调控。过量表达的HKT家族基因能够提高植物Na+转运或K+-Na+同向转运蛋白活性,使植物体内Na+再循环、降低体内Na+浓度、维持K+/Na+比值、保持细胞正常生理功能从而提高植物的耐盐性。该研究主要对HKT家族基因的发现、克隆与SOS、NHX等基因的相互作用以及其表达蛋白的结构、功能与耐盐之间的关系进行了综述,旨在了解其功能和作用机理,为植物耐盐基因工程奠定基础,获得耐盐的转基因植物。