胞二磷胆碱钠对胰岛素诱导的低血糖脑损伤的影响

目的:探讨胞二磷胆碱钠对胰岛素诱导的低血糖脑损伤的作用。方法:用胰岛素诱导新生兔低血糖。低血糖诱导的脑损伤用HE染色评价。NSE表达测定采用免疫组织化学染色法。结果:胞二磷胆碱钠处理低血糖诱导的脑损伤可减少神经元死亡,导致NSE表达升高,增强神经元代谢功能。结论:胞二磷胆碱钠能显著提高胰岛素诱导的低血糖脑损伤神经元的存活率。

超氧化物歧化酶和过氧化氢酶抗葡萄糖缺失诱导的神经元损伤作用研究

目的探讨在葡萄糖缺失诱导的神经元损伤中,外源性超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的作用.方法用不含D-葡萄糖的培养基诱导原代培养的神经细胞损伤.细胞凋亡、活细胞/死细胞百分比用Live/Dead染色法进行检测.细胞代谢活力测定采用alarmblue染色法检测.结果外源性超氧化物歧化酶和过氧化氢酶处理能降低葡萄糖缺失诱导的神经细胞凋亡率,增强神经元的代谢活力.结论外源性超氧化物歧化酶和过氧化氢酶对葡萄糖缺失介导的细胞损伤具有保护作用.

医学留学生的分子生物学实验教学改革与实践

伴随着高等教育发展的脚步，留学生的教学已是我国医学教育发展的一个全新的、严峻的挑战课题。留学生教育的健康快速发展有助于推进高校的国际化进程，实现高校国际交流与合作的良性循环，带动高校综合竞争力和学术声望的不断提升［1］。21世纪以来，本校承担了部分发展中国家留学生的5年制医学本科教学工作，分子生物学作为医学基础课程是留学生学习的重点更是难点。

云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达

为获得阿昌族G6PDWT和G6PDG487A重组蛋白,研究G6PDG487A的结构和功能改变,从云南省德宏州梁河县杞木寨乡湾中村阿昌族聚集地的G6PD缺陷家系先证者和正常阿昌族个体全血提取RNA,经RT-巢式PCR得cDNA,将cDNA克隆至pMD18-Tsimple载体中并测序;错配碱基经定点突变修复后,目的基因亚克隆至pThioHis(A)载体,构建了阿昌族G6PD基因野生型和G487A突变型原核表达载体:pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A。用重组质粒转化E.coli Competent Cells DF213(G6PD defeciency),经IPTG诱导G6PD表达、10%SDS-PAGE电泳检测表达蛋白和紫外340nm定量测定G6PD活性的分析表明,pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A在DF213中成功表达,分子量约为59kDa。IPTG诱导0、3、6、9、和12h后,G6PD活性逐渐增高,G6PD基因WT表达的酶活性约是G487A的20-25倍。表达载体的构建以及G6PDcDNA在DF213中成功表达,为重组酶G6PDG487A的进一步研究奠定了基础。

同型半胱氨酸对小鼠糖异生作用的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症中肝脏组织葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达,探讨同型半胱氨酸对糖异生作用的影响。方法 50只小鼠随机分为高同型半胱氨酸血症(HHcy)组和正常对照组,每组25只;含1.5%的蛋氨酸饮水3个月制造高同型半胱氨酸动物模型。3个月后,各组测定空腹血糖、空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数;利用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测肝脏的G6Pase和PEPCK表达的变化。结果与正常对照组比较,HHcy组空腹血糖、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数增加(P<0.05);RT-PCR发现HHcy组肝脏的G6Pase和PEPCK的mRNA水平明显增加(P<0.05);Western blot表明HHcy组肝脏的G6Pase和PEPCK的蛋白质表达水平明显增加(P<0.05)。结论同型半胱氨酸可能通过增强糖异生作用,导致肝糖的输出增多,与胰岛素抵抗的发生有关。

线粒体基因D—loop区在胃癌中的突变及多态性研究

目的线粒体基因(mitochondrialDNA,mtDNA)的突变通常被认为与肿瘤的形成有关,本研究检测胃癌组织mtDNA D—loop区的突变及多态性,以探讨两者的相关性.方法PCR扩增和测序检查胃癌组织和相应正常组织的线粒体基因D—loop区全序列,并与线粒体文库记录的Revised Cambridge Reference Se- quence(rCRS)进行比对分析.结果15例胃肿瘤中检测出mtDNA D—loop区的162个多态性变异,其中6个(3.7%)为新发现的变异.7例(46.7%)胃癌组织发现体细胞性突变共11次,突变热点集中在HVⅠ区(27.3%)和HVⅡ区(54.5%),并且HVⅡ区较HVⅠ区更易突变。结论D—loop区的高度多态性和突变与胃癌的发生具有相关性。

p53基因在内质网应激诱导的晶状体上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨在内质网应激诱导的晶状体上皮细胞凋亡中,p53基因的作用.方法衣霉素用于诱导晶状体上皮细胞株LEC内质网应激.细胞凋亡用Hoechst染色法.基因表达测定采用RT-PCR.结果衣霉素处理导致CHOP基因表达升高,LEC细胞凋亡率和caspase-3活性增加.同时,衣霉素诱导细胞p53表达升高.通过转染的方式过表达CHOP基因可加强衣霉素诱导的LEC细胞凋亡以及p53表达升高.但是仅仅过表达CHOP基因并不能诱导LEC细胞凋亡以及p53表达升高.结论p53基因很可能在内质网应激所介导的细胞凋亡起重要作用,但p53基因不是CHOP的直接靶基因.

提高生物化学与分子生物学教学质量的思考

生物化学与分子生物学是基础医学学科中的重点和难点学科,同时也是开展医学研究的基础学科。但因其研究内容晦涩难懂,理论和技术又发展迅速,因此采取行之有效的教学措施以及合理的考核体系来提高教学质量就显得格外重要。从教师素质的自我提高,教学方法及教学手段的改进,综合性实验的开展以及科学合理考核体系的建立等方面来推行教学改革,以达到激发学生的学习兴趣,协调教与学的关系,为最终提高教学质量、培养创新性优秀医学人才而努力。

同型半胱氨酸诱导肝星状细胞激活和增殖在肝纤维化发生中的作用

目的探讨同型半胱氨酸诱导肝纤维化的机制.方法采用高甲硫氨酸喂养小鼠,制成高同型半胱氨酸血症模型;采用HE染色检测肝组织纤维化;肝星状细胞周期蛋白D1基因表达升高测定采用RT-PCR.结果高甲硫氨酸饮食造成小鼠同型半胱氨酸血症,导致诱导肝纤维化;同型半胱氨酸处理肝星状细胞,导致周期蛋白D1表达升高;同型半胱氨酸的作用可被抗氧化剂维生素E和TEMPO所抑制.结论同型半胱氨酸诱导肝纤维化作用与促进肝星状细胞激活和增殖有关,活性氧自由基参与了这一过程.

医学生物化学与分子生物学多媒体教学体会

以多媒体为主体的医学生物化学与分子生物学教学方法已成为高校课堂的主要教学模式，它具有传统教学所无法比拟的优越性，但仍需要不断完善，即坚持以学生为主体、教师为主导的原则，在教学中突出重点和难点，培养学生勤于实践的能力，同时加强教师自身修养以适应和提高现代化教育。

视黄酸对大鼠肝癌细胞γ-丁基甜菜碱双加氧酶的表达及肉碱合成的影响

为研究大鼠原发性肝癌γ-丁基甜菜碱双加氧酶(γ-BBD)的基因表达以及视黄酸对大鼠肝癌细胞γ-BBD表达的影响。研究用50mg/kg公斤体重的二乙基亚硝胺(DEN)腹腔每周注射一次的给药方案在体内诱发大鼠原发性肝癌,并通过western blotting和real-timePCR技术对大鼠原发性肝癌模型肝组织中肉碱合成关键酶γ-BBD以及维甲酸X受体γ(RXRγ)的表达水平进行了检测;在体外,本研究通过western blotting和real-timePCR检测了1μmol/L13-顺式视黄酸(13-cis-RA)处理的大鼠肝癌细胞(RH-35细胞)γ-BBD和RXRγ的表达水平,并通过流式细胞术分析了13-cis-RA处理的RH-35细胞的细胞周期。结果显示,与对照组相比,γ-BBD和RXRγ在大鼠原发性肝癌模型组织中的mRNA丰度和蛋白表达水平显著降低;但是,与对照组相比,在用视黄酸处理48h、处于明显G1期阻滞的大鼠肝癌细胞内,γ-BBD和RXRγ的mRNA丰度和蛋白表达水平显著升高。这些结果表明,γ-BBD和RXRγ在DEN诱导的原发性肝细胞癌中的表达水平明显下调,而13-cis-RA能诱导并上调大鼠肝癌细胞RXRγ和γ-BBD的表达。提示13-cis-RA对γ-BBD表达的影响可能对大鼠肝癌细胞肉碱的合成具有促进作用。

Hsp90抑制剂17-AAG通过EGFR,IGFR途径抑制乳腺癌细胞的增殖

17-AAG通过抑制Hsp90的功能而抑制多种肿瘤细胞的生长增殖,用不同浓度17-AAG作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231和BT474,用SRB法检测细胞相对存活数,计算半数抑制药物浓度IC50;并用Western blotting检测Hsp90的"顾客"蛋白EGFR,IGFR-1以及G2/M细胞周期蛋白cdc2的表达,研究17-AAG抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡的途径.结果显示,1μmol/L的17-AAG已能完全抑制MDA-MB-231和BT474细胞增殖,2种细胞的IC50分别为0.0587,0.0576μmol/L;17-AAG作用的乳腺癌细胞EGFR,IGFR-1表达明显下调,此作用呈剂量依赖性.这些研究结果表明17-AGG可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT474的生长增殖,此作用与17-AGG抑制细胞生长因子受体途径有关.