替加环素对脂多糖诱导的脓毒症的免疫调节作用

目的通过细胞学实验和动物实验来研究替加环素是否对脂多糖(LPS)诱导的炎性反应具有调控作用。方法①检测替加环素对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的增殖活性影响;②检测替加环素对LPS诱导的RAW264.7产生炎性反应的调控作用。RAW264.7细胞液中先后加入替加环素和LPS,不同时间点收集LPS组和替加环素+LPS组等各组上清液,ELISA检测细胞因子含量;③低剂量LPS诱导小鼠炎症反应及替加环素干预实验。小鼠先尾静脉注射替加环素(6.5 mg/kg)再注射LPS(15 mg/kg),ELISA检测各时间点血清细胞因子,24 h处死后取脾脏行流式检验,并记录24 h内小鼠的死亡情况。结果①替加环素对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的增殖活性有促进作用;②替加环素对LPS诱导RAW264.7产生的炎性反应有抑制作用,减少IL-6、IFN-γ、CCL5等细胞因子的分泌,增加IL-10分泌;③替加环素对LPS诱导小鼠的炎症反应也有类似的抑制作用;流式细胞仪检测发现替加环素可促进内毒素血症状态下巨噬细胞的M2极化;对小鼠死亡有一定的保护作用。结论替加环素对宿主感染LPS具有免疫调节作用,可以抑制宿主产生的过度免疫反应,对宿主具有保护作用。

猴头菇多糖结构及调节肠道菌群作用研究进展

猴头菇多糖是从食药真菌猴头菇(Hericium erinaceus)的子实体、菌丝体或发酵培养液中提取的一类活性大分子。近年来,关于猴头菇多糖通过改变肠道菌群来调节免疫、缓解炎症性肠病、影响神经系统及代谢性疾病的研究日益增多。猴头菇多糖可通过促进肠道益生菌增殖、抑制致病菌生长、增加短链脂肪酸生成、增强肠道免疫及激活特定信号通路发挥健康促进作用。这些生物活性与猴头菇多糖的结构有关。该文总结了不同来源猴头菇多糖的结构特征及对肠道菌群多样性的影响,综述了猴头菇多糖通过调节肠道菌群促进健康的积极作用及可能机制,并列举了其在多领域的应用和开发前景,为猴头菇多糖调控肠道微生物稳态的深入探索提供了理论依据,也为猴头菇多糖类益生元制剂的开发利用提供了参考。

硝羟喹啉联合美罗培南对碳青霉烯类耐药菌体外及小鼠体内药效学研究

目的探究硝羟喹啉在体外和小鼠体内提高碳青霉烯类耐药菌对美罗培南敏感性的方法。方法通过肉汤微量稀释法,测定硝羟喹啉对不同类型碳青霉烯类耐药菌(大肠埃希菌3株、肺炎克雷伯菌1株、鲍曼不动杆菌1株)和大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922的最低抑菌浓度(MIC);利用扫描电镜,观察硝羟喹啉作用后细菌形态学改变。通过肉汤微量稀释棋盘法,计算硝羟喹啉和美罗培南的部分抑菌浓度指数(FICI);建立小鼠尿路感染模型,探索硝羟喹啉和美罗培南联合治疗对碳青霉烯类耐药菌感染的体内药效。结果硝羟喹啉单药在体外对标准菌株和临床耐药菌株均有一定抗菌活性,MIC范围1~4 mg/L;硝羟喹啉作用后,细菌表面出现不同程度的损伤,且与药物浓度呈正相关;回补Ca^(2+)或Zn^(2+)均使硝羟喹啉MIC值增加;硝羟喹啉与美罗培南联用,对产NDM-1耐药大肠埃希菌的FICI为0.1875,对产KPC-2型肺炎克雷伯菌和产OXA-23型鲍曼不动杆菌的FICI为2。在小鼠尿路感染治疗中,联合用药组小鼠尿液中细菌含量降低3.076 log10 CFU/mL,抗菌药效显著优于对照组和单药治疗组(P<0.0001)。结论硝羟喹啉可通过螯合二价金属离子,抑制细菌生长,也可以在体外和小鼠体内提高产NDM-1碳青霉烯类耐药大肠埃希菌对美罗培南的敏感程度。

天竺葵属植物挥发性成分和生物活性的研究进展

天竺葵属(Pelargonium)是牻牛儿苗科(Geraniaceae)芳香植物,含有丰富的单萜及其氧化物、倍半萜和二萜等挥发性成分,具有广泛的生物活性和良好的应用前景。该文系统总结了近年来国内外报道的从天竺葵属植物提取的挥发性化合物及其在抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、缓解焦虑抑郁等方面的作用,并归纳了其在医药及食品保鲜、包装及加工技术领域的应用进展,以期为该药食两用植物资源的进一步研究和合理开发利用提供理论依据。

D-氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较

D 氨基酸氧化酶 (DAAO)在转化头孢菌素C生产 7 ACA和转化DL 氨基酸制备α 酮酸和L 氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术 ,将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3 5K上 ,再将表达质粒pPIC3 5K DAAO分别整合P .pastoris的宿主细胞KM71和GS1 1 5 ,经筛选获得阳性重组菌PDK1 3(MutS)和PD2 7(Mut+ )。重点对两种突变菌的表达条件进行了比较。结果显示 :PDK1 3(MutS)株比PD2 7(Mut+ )株消耗甲醇慢、诱导时间长 ,但对通气量要求低、表达水平高 ,摇瓶活力分别达到 2 70 0和 2 5 0 0IU L ,1 4L发酵罐内活力分别达到 1 0 1 4 0和 84 6 3IU L。初步探索了DAAO对DL 苯丙氨酸的拆分 ,结果显示基因工程菌表达的DAAO具有良好的转化DL 苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L

DL-苏氨酸的化学合成

使用化学方法制备 DL-苏氨酸 ,再拆分制备 L-苏氨酸工业化 ,以降低瓶颈氨基酸 - L -苏氨酸的价格 ,主要原料有甘氨酸、乙醛等 ,采用的路线为甘氨酸铜路线。改进了操作工艺 ,并对产品及中间体进行了初步鉴别。红外光谱中有各自的特征峰 ,产物的熔点、红外光谱与苏氨酸的文献值相符 ,证实了产物为苏氨酸。

L-苏氨酸制备方法评述

Ｌ－苏氨酸的制备方法主要有３ 种：蛋白质水解法，生物法和化学合成法，对其进行了简单介绍和评述，以供Ｌ－苏氨酸制备的选择和参考。

重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达

高密度脂蛋白 (High densityLipoprotein ,HDL)是血浆中重要的脂蛋白 ,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(ApoliproteinAⅠ ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白 ,首先尝试利用Pichiapastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段 ,将其插入到P .pastoris分泌型载体pPIC9K上 ,BglⅡ酶切线性化后电转化P .pastorisGS115 ,将获得的 10 0 0多个转化子依次在含不同G4 1 8浓度的YPD平板筛选高抗性转化子 ,得到的2 2个高抗性转化子经甲醇诱导 ,SDS PAGE检测得到 6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化 ,结果显示 :接种后培养 2 4～ 2 8h ,转入诱导阶段 ,培养基pH值在 7～ 7 5 ,菌体密度OD6 0 0 =80左右 ,以 1%甲醇诱导 96h最有利于ApoAⅠ的表达 ,表达水平达 16 0mg L。 14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当 ,均高于其它表达系统 。

D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化

目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。

DL-苏氨酸合成影响因素研究

介绍了由甘氨酸铜路线制备 DL-苏氨酸的合成方法及影响因素。实验分为两部分 :苏氨酸铜的制备和 DL-苏氨酸的制备。制备苏氨酸铜的最佳工艺条件 :反应温度为2 0～ 30℃ ,p H值为 9,乙醛与甘氨酸的物质的量比为 4∶ 1。 DL-苏氨酸制备的工艺条件 :底物的质量分数为 1 4% ,流速为 2～ 3m L/

稳定性二氧化氯应用研究——除废水中酚

通过实验，测定了在标准苯酚中用不同体积分数的二氧化氯，在不同温度、作用不同时间后的除酚效果，得出在２５℃左右，达到排污标准最佳条件为φ（ＣｌＯ２）为１／１００００，作用时间为３～４ｈ，φ（ＣｌＯ２）为１．５／１００００，２～３ｈ；在３５℃左右，相应１／１００００时为２～３ｈ；这样含酚废水不必做质量浓度上的特殊处理，可根据温度不同调整二氧化氯体积分数和作用时间。并根据此结果测定了不同φ（ＣｌＯ２）除废水中酚的实际效果。结果显示。

L-丝氨酸制备方法评述

介绍了L -丝氨酸的用途、开发前景、制备方法。L -丝氨酸的制备方法有水解蛋白质提取法、发酵法、化学合成法和酶法 ,对其作了评述。

D-氨基酸氧化酶在巴斯德毕赤酵母中的表达研究

用分子生物学方法获得了D-氨基酸氧化酶(DAAO)的表达质粒(pPIC3.5k-DAAO),用其电转化巴斯德毕赤酵母GS115获得重组菌,经筛选获得高表达菌株PD27,并对其高密度培养和诱导条件进行了优化。PD27工程菌经250ml摇瓶发酵得到的DAAO活力达到2500～2600IU/L,在14L发酵罐中的表达水平优于其它表达系统。

基因工程菌表达D-氨基酸氧化酶研究进展

用分子克隆手段获得D 氨基酸氧化酶基因后 ,对其在不同表达系统如大肠杆菌系统、酿酒酵母和克鲁维乳酸酵母、博伊丁假丝酵母。

研讨型教学实例分析——“同时给予化疗药物和基因的抗肿瘤治疗给药系统研究进展”及评析

本科专业课程采用研讨型教学更适于培养学生的学术研究能力,选择某一主题,通过查阅文献、归纳总结培养学生查阅文献、运用文献能力,是学术研究的基本要求。该文通过学生的课程论文及对论文的分析和评价,展示了研讨型教学培养学生探究式学习的效果。

不同构建策略对D-氨基酸氧化酶表达的影响及发酵调节

目的构建不含编码β-内酰胺酶编码基因的D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase,DAAO)工程菌,对不同构建策略构建的重组菌进行发酵调节研究。方法采用分子生物学手段,利用不同的策略、不同的毕赤酵母宿主菌,构建DAAO工程菌;利用微生物发酵和调节手段,对工程菌的发酵条件进行优化。结果获得了表型不同的3株重组菌(Muts的PDK13和PDGA10,Mut+的PDG27),它们的最佳生长条件基本相似,诱导表达条件却不相同,在Basalsalts培养基内,当生长时间为36h,诱导培养基起始pH为6.0、甲醇浓度为0.5%时,最有利于DAAO表达。在菌体密度相同的条件下,Mut+表型(PDG27)甲醇代谢快,诱导24h,DAAO活力达到最高;Muts型(PDK13和PDGA10)甲醇代谢慢,诱导36h,DAAO活力达最高;通气量一定时,菌体密度增加,DAAO表达量增加,菌体增加到一定程度表达量反而下降,表明通气量应随菌体密度的增大而增加。结论Muts型重组菌对通气量要求低且更有利于高密度发酵。

那西肽脂质体的制备及其体外抗乙肝病毒的研究

目的 制备那西肽脂质体并了解其体外抗乙肝病毒作用。方法 以超声法和脱氧胆酸钠法制备那西肽脂质体,同时考察其包封率和粒径大小的影响因素。以HPLC测定那西肽含量,以透射电镜观察其形态,以激光散射法测定其粒径大小,以HepG2 2. 2. 15细胞模型检测那西肽脂质体对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的抑制率。结果 采用氯仿甲醇混合液(2∶1,v/v)作溶剂的那西肽脂质体包封率高于二氧六环作溶剂的。随着那西肽与卵磷脂的重量比增大,脂质体包封率呈下降趋势。脱氧胆酸钠法中的脱氧胆酸钠可以调节脂质体粒径的大小,它与卵磷脂的重量比越大脂质体的粒径越小。添加保护剂的脂质体在-20℃放置2年后基本稳定。脂质体中那西肽质量浓度为1 25, 2 5和5 0μg·mL-1时,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别达到(46 .9±2. 6)%, (55. 4±1 .2)%, (65±3)%和(15. 1±2 .3)%, (36 .2±1.7)%, (36 .8±2. 5)%。结论 超声法或脱氧胆酸钠法可以制备那西肽脂质体;那西肽脂质体对乙肝病毒HBsAg和HBeAg抑制效果优于游离那西肽。

银芩胶囊抗流感病毒的活性

目的研究银芩胶囊在体内、外的抗流感病毒活性。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测银芩胶囊对体外模型狗肾细胞(MDCK细胞)的毒性浓度;采用细胞病变效应(CPE)观察法测定银芩胶囊体外抑制流感病毒有效浓度;流感病毒感染动物模型为昆明种小鼠,口服给予银芩胶囊剂量分别为每日1.0、0.3和0.1g/kg,分2次给予,共给药6d,通过观察流感病毒FM1感染小鼠死亡率、生命延长情况及肺病变程度指标判定其抗流感病毒作用。结果银芩胶囊在1.25mg/mL浓度下对MDCK细胞无毒性,在0.6mg/mL浓度下能有效抑制流感A3病毒CPE产生;每日口服1.0、0.3和0.1g/kg银芩胶囊,对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护率分别为40%、20%和5%,生命延长率分别为51.1%、29.1%和23.4%,减轻小鼠肺病变分别为64.3%、56.1%和34.6%。结论银芩胶囊在体内、外均有良好的抗流感病毒活性。

基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化

目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。