白藜芦醇改善α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动功能障碍和调节外周免疫的作用研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)A53T转基因小鼠运动功能障碍及外周免疫的影响。方法选取8月龄的A53T转基因小鼠,随机分成4组:对照组(WT)、对照治疗组(WT+RES)、模型组(PD)、模型治疗组(PD+RES)。治疗组每3 d灌胃RES,用药3个月;对照组和模型组给予等量生理盐水。通过爬杆实验、转棒实验、前脚抓力实验、四肢抱紧实验检测各组小鼠运动水平。流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)以及转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果与对照组相比,模型组运动功能评分均较低;与模型组相比,模型治疗组运动功能评价显著改善。流式结果显示,与对照组比,模型组小鼠外周T细胞占比、CD4^(+)T细胞占比、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低,CD8^(+)T细胞占比无统计学意义。与模型组相比,模型治疗组T淋巴细胞占比和CD4^(+)T细胞占比均显著升高,有统计学意义,CD4^(+)/CD8^(+)比值也升高,但差异无统计学意义。外周血血清ELISA结果显示,与对照组相比,模型组小鼠IL-6、IL-18均升高,TGF-β降低,TNF-α浓度无统计学差异。与模型组相比,模型治疗组IL-6、IL-18浓度显著下降,TGF-β有所上升,结果无统计学意义。结论RES通过调节小鼠外周免疫,减少神经炎症反应,从而显著改善A53T转基因小鼠的运动功能障碍。

人脐血血浆外泌体提取方法的比较

为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid, BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130 (高尔基标志蛋白)的表达。结果表明,与提取外泌体的“金标准”,即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多。结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异。因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法。