药物涂层球囊治疗慢性威胁性肢体缺血患者膝下动脉病变的短期效果

目的探讨药物涂层球囊(DCB)治疗慢性威胁性肢体缺血(CLTI)患者膝下动脉病变的短期效果。方法收集2020年12月至2022年6月来自10家三甲医院的接受DCB治疗膝下动脉病变的231例CLTI患者的临床资料,共240条患肢。主要终点为免于重大不良事件(MAE)发生率,次要终点包括无截肢生存率(AFS)、免于大截肢率、生存率和免于临床驱动的靶肢体再干预(CD-TLR)率。使用Kaplan-Meier法评估治疗后6个月和1年时相关终点事件的发生率。结果231例患者的年龄为(72.3±9.73)岁,女性患者74例(32.03%)。240条患肢的329处膝下病灶接受了DCB治疗,115条(47.92%)肢体同时处理了膝上血管,无患者术中发生远端栓塞,中位随访时间为11个月。治疗后6个月时免于MAE发生率为85.90%(95%CI:81.34%~90.73%),AFS为90.14%(95%CI:86.21%~94.24%),免于大截肢率为95.80%(95%CI:93.14%~98.54%),生存率为93.82%(95%CI:90.62%~97.14%),免于CD-TLR率为94.57%(95%CI:91.48%~97.76%)。治疗后12个月时免于MAE发生率为73.95%(95%CI:67.56%~80.94%),AFS为81.26%(95%CI:75.46%~87.51%),免于大截肢率为94.92%(95%CI:91.80%~98.15%),生存率为85.4%(95%CI:79.94%~91.23%),免于CD-TLR率为90.48%(95%CI:85.96%~95.24%)。亚组分析提示是否同期干预膝上病变对研究的结果没有显著影响。结论DCB治疗CLTI患者膝下动脉病变具有良好的短期效果。

血管内皮生长因子及低氧诱导因子-1α与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的关系研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄关系。方法选取2016年9月至2018年2月华中科技大学同济医学院附属梨园医院糖尿病合并动脉狭窄病人188例,均行动脉支架植入治疗,支架植入前检测病人血清VEGFA及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清C反应蛋白(CRP),对病人追踪随访6个月,按是否发生冠脉再狭窄分为再狭窄组98例,未再狭窄组90例,比较两组病人VEGF及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清CRP水平差异,采用logistic分析糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的风险因素。采用Pearson检验分析VEGF、HIF-1α与CRP的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),分析VEGFA及HIF-1α对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的预测效能。结果再狭窄组及未再狭窄组病人血清糖化血红蛋白(HbA1c)≥7.2%、总胆固醇(TC)≥5.7 mmol/L、VEGF≥106.4 pg/mL、HIF-1α≥217.4 ng/mL、小而密低密度脂蛋白胆固醇(sLDLc)≥3.4 mmol/L、CRP≥11.6 mg/L、病变在分支动脉,支架植入长度≥3.4 cm、支架数目为2个及以上、支架直径<4.2 mm所占比例差异有统计学意义(63/98比34/90,64/98比31/90,61/98比31/90,63/98比27/90,62/98比40/90,62/98比17/90,71/98比41/90,62/98比34/90,26/98比10/90,71/98比31/90,均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,VEGF、HIF-1α、HbAH1c、CRP水平是动脉支架植入术后再狭窄的独立风险因素,支架直径是保护性因素(P<0.05)。相关分析结果显示,VEGF、HIF-1α与CRP水平呈现正相关关系(P<0.05)。VEGF、HIF-1α、CRP对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的评估效能:ROC-AUC(95%CI)分别为0.665(0.412~0.916)、0.761(0.552~0.971)、0.636(0.323~0.944)。结论糖尿病合并动脉狭窄病人血清VEGF、HIF-1α水平与支架植入术后再狭窄密切相关,检测血清VEGF、HIF-1α水平对冠脉再狭窄的发生具有较好的预测价值。

miR⁃374a⁃3p靶向Syk对ox⁃LDL诱导内皮细胞损伤及炎症反应的影响

目的探讨miR⁃374a⁃3p对氧化低密度脂蛋白(ox⁃LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤及炎症反应的影响及作用机制。方法实验分为ox⁃LDL组、对照(Con)组、miR⁃NC组、miR⁃374a⁃3p组、anti⁃miR⁃NC组、anti⁃miR⁃374a⁃3p组、ox⁃LDL+miR⁃NC组、ox⁃LDL+miR⁃374a⁃3p组、ox⁃LDL+si⁃NC组、ox⁃LDL+si⁃Syk组、ox⁃LDL+miR⁃374a⁃3p+pcDNA3.1组、ox⁃LDL+miR⁃374a⁃3p+pcDNA3.1⁃Syk组。实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)检测miR⁃374a⁃3p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)检测脾酪氨酸激酶(Syk)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素⁃6(IL⁃6)含量水平;荧光素酶报告实验检测miR⁃374a⁃3p和Syk的靶向关系。结果ox⁃LDL作用的HUVEC中miR⁃374a⁃3p低表达,Syk高表达;细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,TNF⁃α、IL⁃6含量显著升高(P<0.05)。过表达miR⁃374a⁃3p和抑制Syk表达抑制ox⁃LDL作用的HUVEC凋亡和炎症因子TNF⁃α、IL⁃6的释放。miR⁃374a⁃3p靶向调控Syk,过表达Syk逆转了miR⁃374a⁃3p对ox⁃LDL作用的HUVEC损伤及炎症因子释放的抑制作用。结论过表达miR⁃374a⁃3p可抑制HUVEC凋亡和炎症因子的释放,保护ox⁃LDL引起的HUVEC损伤及炎症反应,其机制可能与Syk有关。

siRNA介导低表达VEGF、SDF-1对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究小干扰RNA(siRNA)介导低表达基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。方法采用体外实验培养人血管内皮细胞,细胞分别经siRNA介导下调表达SDF-1、VEGF处理,随机分为空白对照组(未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照)、转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组。各组分别经相应处理。通过免疫印迹法测定细胞SDF-1和VEGF165蛋白的表达水平,用MTT实验测定人血管内皮细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果空白对照组与阴性对照组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平的比较,无显著差异(P>0.05);相比空白对照组和阴性对照组,转染SDF-1-siRNA组细胞中SDF-1蛋白的表达水平显著下调(P<0.01),VEGF165蛋白表达并无显著差异(P>0.05);相比空白对照组和阴性对照组,转染VEGF165-siRNA组SDF-1和VEGF165蛋白表达水平均显著下调(P<0.01);转染VEGF165-siRNA组SDF-1蛋白表达水平显著高于转染SDF-1-siRNA组,VEGF165蛋白表达水平显著低于SDF-1-siRNA组(P<0.01)。空白对照组与阴性对照组细胞细胞凋亡率的比较,并无显著差异(P>0.05);转染SDF-1-siRNA组、转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),转染VEGF165-siRNA组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著高于转染SDF-1-siRNA组(P<0.01)。结论SDF-1和VEGF165基因均可增强人血管内皮细胞增殖能力,阻滞细胞凋亡,从而参与糖尿病血管病变的病理过程,同时该病理过程中VEGF165具有调节SDF-1表达水平的作用。

经皮腔内血管成形术治疗糖尿病足的疗效分析

目的探究经皮腔内血管成形术在治疗糖尿病足血管病变中的疗效。方法选择2012年1月至2015年1月间108例糖尿病足患者,随机分为对照组54例和实验组54例。对照组采用常规疗法,实验组采用经皮腔内血管成形术,术后进行随访,评价指标包括主观指标(疼痛缓解程度和肢体发冷改善程度)、客观指标(踝肱指数ABI、溃疡愈合情况)、临床成功率、足背动脉直径、患肢皮温和术后1年内截肢率。结果实验组疼痛缓解程度和肢体发冷改善程度显著高于对照组(P<0.05);实验组ABI改善和溃疡愈合情况明显优于对照组(P<0.05);治疗后实验组背动脉直径、患肢皮温较对照组均有显著改善(P<0.05);实验组手术成功率较高、1年内患肢截肢率较低(P<0.05)。结论应用经皮腔内血管成形术治疗糖尿病足,手术成功率高、主客观指标均得到显著改善,长期随访截肢率低,值得推广。

极限梯度提升算法风险预测模型在全膝关节置换术后深静脉血栓中的预测性能

目的探讨极限梯度提升(XGBoost)算法风险预测模型在全膝关节置换术(TKR)术后深静脉血栓(DVT)中的预测性能。方法收集2020年1月至2021年12月华中科技大学同济医学院附属梨园医院收治的100例TKR患者,根据术后双下肢超声检查结果将患者分为DVT组(n=50)和非DVT组(n=50),分析XGBoost算法风险预测模型在TKP术后DVT中的预测性能。结果两组患者糖尿病、高脂血症、美国麻醉医师协会(ASA)分级、损伤严重程度评分(ISS)、手术时间、术中输血量、术中失血量、住院时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者性别、年龄、从受伤到手术时间、血红蛋白、冠心病、合并多发伤比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。XGBoost算法模型中重要特征得分前5项为合并多发伤、从受伤到手术时间、年龄、合并冠心病、术后1天D-二聚体。XGBoost算法模型的曲线下面积(AUC)为0.832(95%CI:0.748~0.916)。结论基于XGBoost算法模型可以预测TKR术后患者发生DVT的风险因素,包括与TKR相关的多发性损伤、从受伤到手术时间、年龄、冠心病、术后1天D-二聚体,可作为TKR术后DVT的预测指标,并且其预测性能良好。

蜂蜡麻油敷料对大鼠皮肤创面愈合的影响

目的:观察蜂蜡麻油敷料对大鼠皮肤溃疡创面愈合的影响。方法:于大鼠背部制备3个缺损性皮肤溃疡,分别设为生理盐水敷料组、凡士林敷料组、蜂蜡麻油敷料组,每2d换药1次,换药前摄像,每隔1周取标本1次,ELISA测定EGF的含量。结果:第14、21d时大鼠皮肤创面愈合率,蜂蜡麻油组与其他两组比较有显著差异(P<0.01和P<0.05);第7、14、21d麻油蜂蜡组创面EGF含量较凡士林组、生理盐水组升高,差异有统计学意义;免疫组化发现麻油蜂蜡组创面细胞中EGF表达增加,定量分析有统计学差异。结论:蜂蜡麻油敷料有促进大鼠皮肤溃疡创面愈合的作用,其机制可能是通过保持湿润和营养来实现的。

猪脱细胞真皮基质与肿瘤坏死因子-α调控毛囊角质细胞Wnt3a/β-catenin信号通路表达的实验研究

目的:探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对毛囊角质细胞Wnt3a蛋白/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路表达的影响。方法:①在小鼠背部皮肤用皮肤取样器制作8 mm全层皮肤缺损模型,用带有窗口的8 mm硅胶套环与创面皮缘缝合,分别使用纱布(纱布组)或pADM(pADM组)覆盖创面,观察创面愈合情况,并于第7、14、21天取从硅胶套环窗口处爬行的新生皮肤组织,通过免疫组化法检测皮肤组织中TNF-α、Wnt3a和β-catenin蛋白的表达水平。②在体外实验中,大鼠毛囊角质细胞分为对照组(正常培养)、pADM组、TNF-α组、TNF-α抑制剂组、TNF-α+pADM组、TNF-α抑制剂+pADM组6组,给予相应的干预措施培养48 h,免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞中Wnt3a、β-catenin蛋白表达量。结果:①体内实验结果显示,与纱布组比较,pADM组创面组织中的TNF-α、Wnt3a、β-catenin蛋白表达均上调,分别在第14、7、21天达峰值,各时间点之间差异均有统计学意义(P均<0.01)。②体外实验结果显示,与对照组相比,毛囊角质细胞中的Wnt3a和β-catenin蛋白水平在TNF-α组表达下调,在pADM组、TNF-α抑制剂组、TNF-α+pADM组、TNF-α抑制剂+pADM组表达上调。pADM组与TNF-α抑制剂组比较,Wnt3a和β-catenin蛋白水平差异有显著性(P均<0.01),在pADM组上调水平更高;TNF-α抑制剂组与TNF-α抑制剂+pADM组相比,两蛋白表达水平的差异具有显著性(P均<0.01),TNF-α抑制剂+pADM组上调水平更高。结论:pADM在体内能够上调TNF-α、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达,在体外可能具有TNF-α抑制剂样作用,并能加强TNF-α抑制剂的作用。pADM具有促进全皮层缺损创面愈合的作用,并可能通过上调毛囊角质细胞中Wnt3a/β-catenin蛋白的表达促进毛囊再生。

猪脱细胞真皮基质对不同时间小鼠创面基质细胞衍生因子-1及蛋白激酶B表达的影响

目的:探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)对全层皮肤损伤后不同时间小鼠创面基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及蛋白激酶B(AKT)表达的影响,为研究创面全层皮肤损伤愈合机制提供依据。方法:18只C57BL/6小鼠以脊柱为中线,在其左右两侧各制作一个直径为6mm的全层皮肤缺损创面,左侧以纱布覆盖(对照组),右侧以微粒状pADM覆盖(pADM组),分别于伤后1、2、3、4、6、8周取创缘处组织。免疫组化染色,检测SDF-1及AKT的蛋白表达,病理学观察两种蛋白在组织细胞中的表达。结果:在模型建立后的第1、2、3、4、6、8周各观察时间段,SDF-1及AKT两种因子的蛋白表达水平不同,差异具有显著性(F=45.719,P=0.000;F=94.905,P=0.000)。pADM组及对照组两组间的SDF-1蛋白表达在第3、8周时差异具有显著性(t3=8.559,P=0.001;t8=-7.042,P=0.002),其他时间两组间差异无显著性。AKT则在第2、3、4、6、8周时两组间的蛋白表达差异具有显著性(t2=6.097,P=0.004;t3=8.462,P=0.001;t4=-9.711,P=0.001;t6=-8.296,P=0.001;t8=-6.079;P=0.004),但第1周时两组间差异无显著性。AKT与SDF-1两种因子在pADM组中具有相似的变化趋势,均于第2周开始升高,于第3周达高峰,此时两种因子在pADM组和对照组中表达差距最大;从第3周开始下降,到第8周又出现回升。免疫组化观察显示,SDF-1及AKT在创面组织中表达,且阳性细胞主要分布在毛囊细胞周围。结论:pADM可能是通过促进SDF-1/CXCR4信号通路及下游信号因子AKT的表达而促进创面愈合或者毛囊修复。

静脉药瘾者弓形体感染及其影响因素的调查研究

目的了解静脉药瘾者弓形体感染状况及其影响因素。方法202例静脉药瘾者作为研究对象,采集血清,采用酶联免疫吸附法和聚合酶链反应观察弓形体感染和常见的血源传播病毒的感染指标。结果静脉药瘾者中弓形体检出阳性35例,总感染率17.33%,感染率与当地正常人群比较,差异具有显著意义(P<0.05),吸毒史长短和重叠艾滋病毒(HIV)感染与弓形体感染有关。结论静脉药瘾者是弓形体感染的高危人群,而长期吸毒和伴发HIV感染时,机体免疫功能受到严重破坏,对弓形体易感性增高。

莫匹罗星联合氦氖激光照射治疗新生儿脐炎的临床疗效研究

为探讨莫匹罗星联合氦氖激光照射治疗新生儿脐炎的临床疗效,本研究选取了2013至2018年新生儿脐炎患儿86例,通过对照研究,按治疗方法不同分为观察组(莫匹罗星+氦氖激光照射)与对照组(莫匹罗星)各43例,观察两组患儿新生儿脐炎愈合时间及不良反应发生情况。试验发现观察组平均愈合时间为(4. 186±0. 194) d,总有效率为100%;对照组平均愈合时间为(5. 189±0. 238) d,总有效率为86%;观察组愈合时间显著高于对照组(P <0. 05)。两组患儿在治疗期间均未发现皮肤红疹等不良事件。研究结果显示,莫匹罗星联合氦氖激光照射治疗新生儿脐炎的临床疗效确切,安全性高。

2018年糖尿病足基础及临床研究进展

糖尿病足是糖尿病的严重并发症,是与神经、血管、创面感染等多学科有关的交叉疾病。糖尿病的截肢率一直处于较高水平,因此糖尿病足的治疗是困扰临床医务工作者的一个重大问题。糖尿病足溃疡是糖尿病患者常见的慢性、难治性并发症,它的治疗往往需要多学科的共同努力[1]。本文着重阐述2018 年在糖尿病足基础及临床研究方面的新进展,以期为广大医学同仁提供借鉴帮助。

晚期糖基化终末产物降低成纤维细胞增殖和迁移能力的机制

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制.方法采集2018年1月至2018年12月华中科技大学同济医学院附属梨园医院创面修复科收治的糖尿病足患者足部创面组织和非糖尿病足患者足部正常创面组织各20例,免疫印迹法(Westernblot)检测创面组织中AGEs、波形纤维蛋白(Vimentin)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平.取包皮成纤维细胞进行原代培养并鉴定,采用0、100、300、500、1 000、2 000 μg/L的AGEs处理成纤维细胞,以300 μg/L牛血清白蛋白(BSA)为对照组,作用48 h后进行细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、小室迁移(Transwell)实验以及Western blot检测并采用t检验分析结果.结果与正常组织比较,糖尿病足组织中AGEs明显偏高(t=3.564,P< 0.05),而Vimentin的表达水平偏低(t=8.325,P<0.05),但β-catenin的表达高于正常组织(t=5.738,P<0.05).分离纯化培养的细胞形态呈梭形,细胞免疫荧光检测95%以上细胞表达Vimentin,鉴定为成纤维细胞.随着加入的AGEs浓度从100、300 μg/L增加至500、1 000μg/L时,成纤维细胞的增殖(t=4.336,PA500/BSA<0.01;t=19.562,PA1000/BSA<0.01;t=42.373,PA2000/BSA<0.01;t=5.380,PA1000/A500<0.01;t=23.726,PA2000/A1000<0.01)和迁移(t=12.117,PA300/BSA <0.01;t=14.484,PA500/BSA <0.01;t=21.940,PA1000/BSA <0.01)能力逐渐降低,呈浓度依赖性.并且,加入AGEs浓度大于300μg/L时,成纤维细胞中的Wnt3α和Wnt7α的表达明显增加,β-catenin的表达相较于对照组有明显的升高,与BSA组比较无明显升高.结论 AGEs降低成纤维细胞的增殖和迁移能力与Wnt/β-catenin信号通路有关.

采用滤纸片法检测细菌对诊断糖尿病足创面感染的意义

目的评价采用滤纸片法检测细菌对诊断糖尿病足创面感染的意义。方法选取2014年7月-2015年7月在华中科技大学同济医学院附属梨园医院住院治疗且符合人选标准的糖尿病足溃疡患者18例，按德州大学糖尿病溃疡分级系统对糖尿病足溃疡创面进行分级，比较不同分级创面对应患者一般情况。分别取创面渗出液、创面组织，采用滤纸片法和组织活检法进行创面细菌检测。以组织活检法检测结果为对照，滤纸片法为待评价方法，检验2种方法检测结果的关联性、差异性、一致性。计算滤纸片法检测细菌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。根据18例患者滤纸片法检测细菌的特异度和敏感度，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，评价滤纸片法的检测效果。对数据行单因素方差分析、Fisher确切概率法检验。针对经组织活检法检出细菌的患者，对组织活检法与滤纸片法检出细菌数进行Pearson相关分析。结果（1）德州大学糖尿病溃疡分级1、2、3级创面对应患者间年龄、糖尿病病程、创面病程、创面面积、踝肱指数、糖化Hb、空腹血糖、血小板计数、红细胞沉降率、C反应蛋白、AST、血肌酐、尿素氮差异均无统计学意义（F值为0．029-2．916，P值均大于0．05），白细胞计数、ALT差异有统计学意义（F值分别为4．688、6．833，P〈0．05或P〈0．01）。（2）组织活检法检测结果显示患者中有6例未检测出细菌；12例检测出细菌，其中10例细菌数大于1×10^5个／g，2例细菌数未达到1×10^5个／g。滤纸片法检测结果显示患者中有8例未检测出细菌；10例检测出细菌，其中7例细菌数大于1×10^5个／g，3例细菌数未达到1×10^5个／g。滤纸片法与组织活检法检测细菌同时阳性患者有7例，同时阴性患者有8例，滤纸片法阴性而组织活检法阳性患者有3例，组织活检法阴性的患者中未出现滤纸片法阳性。2种方法检测结果存在方向性关联（P=0．004），即组织活检法结果阳性，滤纸片法结果也可能是阳性；2种方法检测结果不存在明显差异（P=0．250）；2种方法检测结果一致性一般（Kappa=0．68，P=0．002）。（3）滤纸片法检测细菌的敏感度为70％、特异度为100％、阳性预测值为1．00、阴性预测值为0．73、准确度为83．3％。18例患者滤纸片法检测细菌ROC曲线下总面积为0．919（95％置信区间为0—1．000，P=0．030）。（4）组织活检法共检出13株细菌，其中鲍氏不动杆菌5株，金黄色葡萄球菌5株，铜绿假单胞菌、牛链球菌及鸟肠球菌各1株。滤纸片法共检出11株细菌，其中鲍氏不动杆菌5株，金黄色葡萄球菌3株，铜绿假单胞菌、牛链球菌及鸟肠球菌各1株。除金黄色葡萄球菌外，滤纸片法检测其余4种细菌的敏感度、特异度均为100％。滤纸片法与组织活检法检测鲍氏不动杆菌的一致性较好（Kappa：1．00，P〈0．01），检测金黄色葡萄球菌的一致性一般（Kappa=0．68，P〈0．05）。（5）滤纸片法与组织活检法检出创面细菌数总体无明显相关（r=0．257，P=0．419），其中2种方法检出德州大学糖尿病溃疡分级1、2级创面细菌数均显著相关（r值均为0．999，P值均为0．001），检出德州大学糖尿病溃疡分级3级创面细菌数无明显相关（r=-0．053，P=0．947）。结论滤纸片法检测结果在确定是否存在细菌感染方面与组织活检法检测结果具有一致性，对诊断糖尿病足创面局部感染具有重要意义。

基质金属蛋白酶-9／血管他丁／血管内皮生长因子信号轴在糖尿病足病中的研究

目的探讨基质金属蛋白酶（MMP）-9／血管他丁／血管内皮生长因子（VEGF）信号轴在糖尿病足（DF）病中的作用。方法分别采用免疫荧光染色、实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）及Western blot法检测正常人及DF患者足创面处组织中MMP-9、VEGF的mRNA和蛋白表达水平。以人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）为研究对象，分为正常对照组、高糖模型组（含25mmol／L的葡萄糖）、高糖＋抗MMP-9（5μg/ml）组以及高糖＋抗血管他丁（5μg／ml）组，分别在12、24、48h取细胞培养上清液和细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、RT-qPCR及Western blot分别检测VEGF的分泌及表达水平。结果临床样本检测结果显示，与正常人比较，MMP-9在DF患者足创面处组织中高表达（mRNA水平：P=0．000；蛋白水平：P=0．000）；而VEGF在DF患者足创面处组织中呈现显著的低表达（mRNA水平：P=0．003；蛋白水平：P=0．000）。细胞实验结果显示，在12、24、48h分别与正常组比较，高糖组细胞中VEGF分泌及mRNA和蛋白水平表达均显著降低（分泌水平：P=0．032、0．006、0．004；mRNA水平：P=0．003、0．000、0．000；蛋白水平：P=0．000、0．000、0．000）；与高糖组比较，两个处理组细胞VEGF分泌及mRNA和蛋白水平表达均显著升高（抗MMP-9组分泌水平P=0．041、0．003、0．000；mRNA水平：P=0．039、0．006、0．005；蛋白水平：P=0．089、0．042、0．037；抗血管他丁组分泌水平P=0．005、0．001、0．000；mRNA水平：P=0．004、0．001、0．000；蛋白水平：P=0．031、0．001、0．000），且呈一定的时间依赖性。结论DF患者足创面处组织中MMP-9及VEGF表达呈负相关；拈抗MMP-9及血管他丁的表达能显著促进高糖诱导下HUVECs的VEGF分泌及表达水平。

负压封闭引流技术治疗感染性糖尿病足

2012年1月至2012年12月,我科采用负压封闭引流（VSD）技术治疗部分糖尿病足患者,现报道如下.一、资料与方法1．临床资料：糖尿病足患者43例（男23例，女20例），平均年龄65岁（40～79岁）；糖尿病平均病程6年（3个月-20年）；糖尿病足平均病程60d（7d～2年）。

神经生长因子在糖尿病足创面组织中的表达

目的研究神经生长因子(NGF)及其高亲和性的酪氨酸激酶-A受体(TrkA)在糖尿病足创面组织中的表达。方法 收集糖尿病足创面组织标本作为对照组,正常人皮肤及皮下软组织标本作为正常组,采用免疫组化的方法观察神经生长因子(NGF)及其高亲和性的TrkA受体的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定NGF的含量。结果 对照组NGF含量为(66.299±10.204)pg/ml,与正常组NGF含量(35.015±4.671)pg/ml相比,差异有统计学意义(P=0.010)。结论 NGF及其高亲和性的TrkA受体在糖尿病足创面组织中表达的变化可能参与了创面的发生发展,是糖尿病足创面修复的影响因素之一。

基质细胞衍生因子-1促进毛囊角质细胞增殖的研究

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对体外培养的大鼠毛囊角质细胞增殖的影响。方法 2019年6月至2020年1月,采用免疫荧光检测大鼠毛囊角质细胞(购自中国赛百慷生物有限公司)标志物角蛋白14(K14)的表达量。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测0、5、10、25、50 μg/L浓度SDF-1作用大鼠毛囊角质细胞24 h后,10、25 μg/L浓度SDF-1作用大鼠毛囊角质细胞48 h后,及10、25 μg/L浓度SDF-1加入50 nmol/L趋化因子受体-4(CXCR4)拮抗剂普乐沙福(AMD3100)作用大鼠毛囊角质细胞24 h后毛囊角质细胞增殖;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)标记法分别检测对照组(0 μg/L SDF-1),25 μg/L SDF-1组,25 μg/L SDF-1+50 nmol/L AMD3100组作用大鼠毛囊角质细胞24 h后毛囊角质细胞增殖。组间比较采用t检验。结果细胞免疫荧光显示95%以上细胞K14染色呈阳性。CCK-8检测结果显示与0 μg/L浓度SDF-1(103.04±0.99)比较5 μg/L浓度SDF-1对细胞增殖活性无明显影响(100.67±4.59,t=0.905,P>0.05),差异无统计学意义,10、25、50 μg/L浓度SDF-1促进毛囊角质细胞增殖(111.44±4.95、124.59±2.08、125.11±0.48,t10=3.221,P10<0.05;t25=8.624,P25<0.01;t50=8.464,P50<0.01),差异有统计学意义。与浓度为25 μg/L比较,SDF-1浓度为10 μg/L促增殖作用减弱(t=5.043,P<0.01),差异有统计学意义,浓度为50 μg/L促增殖作用无明显变化(t=0.199,P>0.05),差异无统计学意义。10、25 μg/L浓度的SDF-1作用48 h(98.26±5.24、112.39±2.30)与作用24 h(111.44±4.95、124.59±2.08)比较其促增殖作用减弱(t10=3.167,P10<0.05;t25=6.816,P25<0.01),差异有统计学意义。10、25 μg/L浓度SDF-1加入50 nmol/L AMD3100作用毛囊角质细胞24 h后,毛囊角质细胞增殖明显受到抑制(84.20±1.06、98.51±0.92,t10=9.325,P10<0.01;t25=19.900,P25<0.01),差异有统计学意义。EdU检测结果进一步验证SDF-1具有促进毛囊角质细胞增殖作用(SDF-1组:38.59±0.33,对照组:22.45±2.59,t=10.700,P<0.01),AMD3100可抑制SDF-1促增殖作用(22.12±1.96,t=10.700,P<0.01),差异有统计学意义。结论 SDF-1在10~50 μg/L浓度范围内对体外培养的大鼠毛囊角质细胞有促进增殖作用,且该增殖作用能被AMD3100抑制。

甲壳素蜂蜡膏促进大鼠创面愈合的实验研究

目的通过大鼠的实验性研究,观察甲壳素蜂蜡膏促进创面愈合的效果并探讨其可能的机制。方法 16只SD大鼠背部两侧对称部位造成两个全层皮肤缺损创面。按照自身对照方法,每只大鼠背部两个创面随机分为实验组和对照组。造模后每隔2d,实验组创面应用5g甲壳素蜂蜡膏,对照组应用5mL生理盐水,观察创面的愈合面积、创面愈合率;酶联免疫吸附法测定两组创面组织标本表皮生长因子的浓度,免疫组化法观察表皮生长因子在创面组织中的表达。结果实验组第7、14、21天的创面愈合率均高于同期对照组的创面愈合率,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组第7、14、21天EGF含量分别为(51.375±33.524)pg/mL、(44.486±16.001)pg/mL、(34.292±23.740)pg/mL,均高于同期对照组EGF的浓度,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲壳素蜂蜡膏能促进创面愈合和创面组织中EGF的表达。

甲壳素麻油蜂蜡膏促进糖尿病足创面愈合的研究进展

慢性创面(包括糖尿病足溃疡)合适敷料的应用,创造良好的伤口愈合环境,是临床工作面临的课题。甲壳素、麻油、蜂蜡能有效促进体表创面的愈合,甲壳素麻油蜂蜡膏更能有效促进创面的愈合,为临床敷料的应用提供更多的选择。