猪流感病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从我国东北地区猪群中分离出 3株H3 N2 猪流感病毒 (SIV) ,分别命名为A/Swine/Heilongjiang/ 1/ 2 0 0 0、A/Swine/Heilogjiang/ 2 / 2 0 0 0和A/Swine/Heilogjiang/ 3/ 2 0 0 0。SIV分离株第 8代病毒液对 0 .5 %豚鼠红血球的血凝价分别为2 0 48log2 、2 0 48log2 、40 96log2 ;将其制成琼扩 (AGP)抗原与禽流感标准阳性血清均出现清晰白色沉淀线 ;与流感病毒H3 亚型标准阳性血清的血凝抑制 (HI)价分别为 8log2 、7log2 、7log2 ,但不能被鸡新城疫阳性血清抑制。这 3株SIV都为热不稳定型 ;均能凝集驴、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、人O型血红血球 ,对马、牛红血球均不凝集 ;感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间分别为 86 .4、12 9.6和 91.2小时 ;每 0 .2ml病毒液鸡胚半数感染量分别为 4.75lg、4.5lg、和 6 .0lg ;对鸡的静脉内接种致病指数和脑内接种致病指数各为 0 .5 6、0 .32、0 .5 2和 0 .77、0 .38、0 .5 2 ;对小鼠的半数致死量分别为 2 .6lg、2 .0lg和 2 .5lg ;试验感染小鼠、豚鼠和猪均可发病并出现死亡。存活动物接种后第 6天和第 14天的血清 ,其HI价均在 8log2 以上 ,而AGP均为阴性。

禽流感油乳剂灭活疫苗的研究

将6种不同亚型的禽流感病毒（AIVH2N9、H3N8、H5N1、H5N2、H7N1、H9N2）分别接种鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活，以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗接种4和8周龄SPF鸡，注苗后均无不良反应。每种亚型疫苗免疫后14天和21天攻毒保护率均达90％-100％。分别用H5N1和H9N2亚型灭活疫苗免疫8周龄SPF鸡、25和28周龄健康商品蛋鸡，免疫后7天产生免疫力，14天保护率达100％，21天后抗体达高峰，仔鸡接苗后最高血凝抑制（HI）几何平均滴度（GMT）为7.3-8.0log2，蛋鸡为8.0-10.5log2。免疫后180天，抗体效价不低于6.5log2。免疫后180天分别以AIV攻击，H5亚型疫苗组，用强毒攻击无一发病和死亡，对照鸡全部发病死亡;H9亚型疫苗组，对照鸡在攻毒后72小时停产，免疫鸡无一发病且产蛋正常，对同源攻毒的保护率达100％。

H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫产生期内T淋巴细胞表型亚类的检测与研究

采用免疫荧光法、使用流式细胞检测仪对经H9亚型禽流感病毒人工感染SPF鸡、H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫SPF鸡以及经免疫后使用H9亚型禽流感病毒攻毒后的SPF鸡外周血、脾脏、胸腺中T细胞表型亚类 (CD4 +、CD8+、TCR1+)的变化规律进行了监测 ,结果表明 ,H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫后抗原的缓慢释放可在一定程度上激发机体的细胞免疫应答 ,使免疫活性T淋巴细胞得到活化 ,免疫后鸡体外周血中CD4 +、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现出一明显升高的过程 ;同时 ,人工感染免疫鸡后 ,脾脏和胸腺TCR1+T细胞的数量上升 ,外周血CD4 +、CD8+和TCR1+T细胞的数量少量降低或维持不变 ,随后短期即恢复正常 ;而人工感染SPF对照鸡后 ,外周血CD4 +。

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒及人工感染鸡抗体的监测

本研究采用ＡＧＰ、ＨＩ等试验方法，对经Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫、免疫后攻毒以及经Ｈ９Ｎ２活毒人工感染后的ＳＰＦ鸡抗体产生、消长规律进行了测定，结果表明人工感染ＳＰＦ鸡和免疫鸡一周后，ＡＧＰ的检出率即可达到１００％；Ｈ９亚型禽流感油乳剂灭活苗自免疫后一周内即可产生ＨＩ抗体，２１－２８天达到高峰，并能对相同亚型病毒感染引发良好的免疫反应。

中药抗流感病毒研究概况

流感是一种动物及人类发病的传染性疾病,其病原属于正粘病毒科RNA病毒,由A型流感病毒属、B型流感病毒属、C型流感病毒属和类托高土病毒属组成,A型流感病毒感染人、猪、马、禽类及各种海洋哺乳动物.1997年和1999年禽流感病毒直接感染人事件发生后,禽流感作为人畜共患病得到人类的重新认识.

鸡新城疫、支气管炎、病毒性关节炎、法氏囊炎四联油乳剂灭活苗的研究

用接种新城疫病毒克隆３０株、鸡传染性支气管炎病毒Ｍ４１株、病毒性关节炎病毒Ｓ－１１３３株和鸡传染性法氏囊炎病毒Ｄ７８株的含毒鸡胚液制成四联油乳剂灭活苗，接种于３～４周龄鸡和成鸡后１０天产生免疫力，保护率达９０％以上，免疫期达５个月以上。自１９９３年用本苗在黑龙江、山东、河南、吉林、浙江、广东、天津等省市免疫接种．２６万余只鸡，获得满意效果。

3种消毒剂对H5N1和H9N2亚型禽流感病毒灭活作用

采用悬浮灭活试验,以鸡胚感染法,研究奇露、卫可、泛福露益这3种消毒剂在一系列浓度下,分别与H5N1和H9N2亚型禽流感病毒作用5,10min,对禽流感病毒的灭活作用。结果表明:1:200、1:280、1:400、1:800、1:1000浓度的卫可,1:320、1:600、1:800、1:1000浓度的泛福露益,1:200、1:400、1:600浓度的奇露对H9亚型禽流感病毒可完全灭活;1:200、1:280、1:400、1:800浓度的卫可,1:320、1:600、1:800浓度的泛福露益,1:200、1:400浓度的奇露对H5亚型禽流感病毒可完全灭活。

鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定

从患传染性法氏囊病(IBD)病鸡中分离出一株IBD病毒(IBDV)。该病毒是一株IBDV超强毒株,可使10周龄健康鸡100%发病,83.7％死亡。死亡鸡具有TBD的典型病变。

禽流感灭活疫苗的标准化研究

本文对我国禽流感灭活疫苗研制的现状、国际上标准化禽流感灭活疫苗的研究、禽流感疫苗标准化的必要性、研究和生产标准化禽流感疫苗硬件设施的需求、标准化禽流感疫苗用种毒和免疫佐剂的选择、标准化流感灭活疫苗中血凝素含量的测定、以及标准化禽流感疫苗生产中的关键技术问题等分别进行了论述,同时阐明了作者观点。

含氯复方消毒剂对禽流感病毒灭活效果的研究

采用K le in-Defors悬浮灭活试验与鸡胚感染试验方法,对含氯复方消毒剂灭活H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的效果进行了检测。结果,该含氯消毒剂在125 mg/L以上时,对两种禽流感病毒的杀灭率可达到99.99%以上。在实际应用中,推荐该消毒剂的使用浓度为有效氯167 mg/L。结论,该复方含氯消毒剂对两种禽流感病毒有很好的灭活效果。

杀毒霸对禽流感病毒、新城疫病毒的杀灭作用

采用悬浮杀灭试验 ,以鸡胚感染法 ,研究杀毒霸在 1∶30 0 0、1∶45 0 0、1∶6 0 0 0、1∶75 0 0的系列浓度下 ,与禽流感病毒、新城疫病毒分别作用 5、10分钟 ,对AIV、NDV的杀灭作用。 1∶30 0 0、1∶45 0 0、1∶6 0 0 0、1∶75 0 0的杀毒霸与AIV作用 5分钟 ,其杀灭率为 ;10 0 %、10 0 %、99.99%、99.97% ;1∶30 0 0、1∶45 0 0、1∶6 0 0 0、1∶75 0 0的杀毒霸与NDV作用 5分钟 ,其杀灭率为 :10 0 %、99.99%、99 .995 %、9.9% ;以上浓度的杀毒霸与AIV作用 10分钟 ,其杀灭率为 :10 0 %、99.99%、99.98%、99.994%、99.997% .

鸡传染性鼻炎 ELISA 方法的研究

以抗原10μg、血清1:100稀释、酶标抗体1:2500稀释作为最佳鸡传染性鼻炎 ELISA 反应浓度;以P/N≥2.1为阳性,作为判定标准,具有敏感、特异、快速的特点.ELISA 抗原在-20℃冰箱保存12个月,其抗原性无明显变化,适于大批量检疫用.

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。

两种消毒剂对流感病毒灭活效果的对比研究

采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验方法,研究“卫可”、“卫康”两种消毒剂在不同浓度下,分别与流感H5N1和H9N2亚型病毒作用 5min和 10min,对流感病毒的灭活作用。结果表明:这两种消毒剂在相同或不同的浓度范围内,对病毒的杀灭率是有区别的。尽管每种消毒剂在本身稀释浓度范围内都有较好的杀毒效果,但在应用中也应考虑其他因素的影响。因此,我们推荐使用该消毒剂的工作浓度为 100%杀灭病毒的稀释度,这将为其临床应用提供依据,对环境消毒和防止流感爆发具有参考价值。