高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件

研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的青霉素处理,在1 mg/mL的溶菌酶作用下,35℃处理1 h,原生质体形成率与再生率的乘积达到最大值,此时K3原生质体量为1.46×107cfu/mL。青霉菌在65℃热灭活的时间为1 h,紫外灭活时间为3 min;枯草芽孢杆菌在65℃热灭活的时间是2.5 h,紫外灭活时间为5 min。这为后续原生质体融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。

十二烷基苯磺酸钠对双小核草履虫种群数量的影响

在实验条件下,研究了十二烷基苯磺酸钠(DBS)对双小核草履虫(Parameciumaurelia)种群数量的影响.结果表明,较高浓度的DBS对双小核草履虫具有急性毒性效应,其24h-LC50为9.74mg/L;仿生活污水的DBS浓度(0.2～1.0mg/L)和0mg/L中双小核草履虫增长率之间无显著性差异(P>0.05),说明含有1.0mg/L以下浓度DBS的生活污水对双小核草履虫的种群数量增长无显著影响.

青霉产纤维素酶液态发酵的优化

利用中药粉末作为添加剂,在单因素的基础上,以CMC酶活为考察指标,进行BoxBehnken试验设计,对青霉发酵培养基进行响应面分析试验。青霉最佳发酵培养基条件为:麦芽糖3%、硫酸铵0.6%、天麻粉末3%。其优化后的CMC酶活为143.82 U/m L,而初始基本发酵培养基的CMC酶活仅为40.98 U/m L,提高了250.96%。中药天麻粉末的少量添加能大幅度地提高青霉产纤维素酶的酶活,具有较高的应用价值。

双亲灭活青霉菌与枯草芽孢杆菌原生质体融合

目的：为选育具有高纤维素酶活性且强抗逆性的新菌株,将高产纤维素酶的青霉菌Penicillium Q5与强抗逆性的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3进行原生质体融合。方法：采用双亲灭活原生质体技术对青霉菌与枯草芽孢杆菌进行原生质体融合,考察原生质体制备条件与融合中的影响因素。结果：对亲本菌株进行酶解前处理,随着酶解浓度和酶解时间的增加,原生质体的形成率随之增大,而再生率下降。对融合过程进行正交试验,结果在融合温度38℃,融合时间10 min,PEG质量浓度0.4 g/L的条件下,融合率为3.08×10-7。在172株融合子中筛选出1株R62,保留了亲本的酶活且在p H 8~10条件下有较强的抗逆性。结论：双灭活原生质体融合方法成功选育出具有抗逆性的高产纤维素酶菌株。

樟树叶纤维素液态发酵的工艺优化

为获得樟树叶纤维素液态发酵的最佳工艺条件,以KOH预处理后的樟树叶为原料,利用中药作为添加剂,在单因素的基础上,以还原糖的浓度作为考察指标,进行Box-Behnken实验设计,对樟树叶纤维素液态发酵进行响应面分析。樟树叶纤维素液态发酵的最佳培养基条件为:樟树叶粉末6%、麦麸1.6%、天麻粉末3%。优化后的还原糖浓度为2.5418mg/m L,而初始的还原糖浓度为0.7531 mg/m L,提高了3.38倍。天麻粉末少量的添加能大幅度的提高樟树叶纤维素的转化率,具有较高的应用价值,并为林木纤维废物利用提供借鉴作用。