基于网络药理学与分子对接探讨岭南药材三桠苦茎叶治疗类风湿性关节炎的作用特点

目的采用网络药理学与分子对接技术对三桠苦茎与叶治疗类风湿性关节炎的作用特点进行研究与比较。方法通过PubMed与中国知网收集三桠苦茎和叶的化学成分信息并于SwissADME平台进行成分筛选,使用Swiss Target Prediction平台进行靶点预测;利用DrugBank、GeneCards和OMIM数据库检索与类风湿性关节炎相关的疾病靶点并与三桠苦茎和叶的活性成分作用靶点进行映射取交集,通过Cytoscape软件构建“活性成分-有效靶点”网络;将共同靶点导入STRING数据库构建蛋白互作网络;应用Metascape数据库进行GO功能及KEGG通路富集分析;采用CB-DOCK2进行关键成分与有效靶点的分子对接研究。结果三桠苦茎中筛选得54个活性成分,与类风湿性关节炎交集靶点40个;三桠苦叶中筛选得91个活性成分,与类风湿性关节炎交集靶点102个;在三桠苦茎与叶度值大于二倍中位数的活性化合物群中,不存在共有活性成分;三桠苦茎与叶治疗类风湿性关节炎的核心靶点与关键通路出现交叉并在生物过程中呈现出多向协同作用;预测三桠苦茎干预RA的核心成分4-甲基喹诺酮、藿香黄酮醇、亚油酸等与叶干预RA的核心成分山柰酚、槲皮素、异鼠李素可能通过AKT1、EGFR与MCL1等共同靶点,作用于PPAR、类固醇激素生物合成与NF-κB等共同信号通路干预RA;在分子对接验证中,所有结合能均小于-5 kcal·mol^(-1),其中三桠苦茎中结合能小于-7 kcal·mol^(-1)的有11组,叶中有19组,分别占44%和63%。结论三桠苦茎与叶干预RA的活性成分具有明显差异但作用机制高度协同;三桠苦叶在RA的干预中可能展现出比茎更强的活性。本研究为进一步开展三桠苦入药部位研究及临床应用提供了理论基础。

难忘闺蜜情

我们到底是什么关系？邻居、玩伴、同桌、发小、闺蜜……好像这些都是。从我有记忆开始,我们就经常在一起玩,两家挨得近,经常串门。小时候总会有许多的小游戏,每次玩都会乐此不疲。像跳绳、捉迷藏、过家家等,每次都是一大群人一起玩,你跟着你的姐姐们,而我则带着弟弟妹妹们。每每想起这些,总会感慨时光易逝。

古方黄芪散调控AMPK/mTOR自噬信号通路改善肝脏脂肪变性的机制

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨古方黄芪散调节自噬减轻小鼠肝脏脂肪变性改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:通过数据库收集黄芪散主要化学成分及NAFLD相关靶点,对交集靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行体内实验验证。雄性C57BL/6J小鼠60只,适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1))、黄芪散低、高剂量组(0.5、1 g·kg^(-1),每组12只。采用高脂饮食(HFD)诱导小鼠NAFLD模型,造模的同时灌胃给药13周,每天1次。通过检测随机血糖、血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝脏中TG含量;称量肝脏湿重并计算肝指数;采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色、透射电子显微镜(TEM)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)对C57BL/6J小鼠进行动物体内药效验证和机制探讨。结果:通过网络药理学分析,结合前期研究基础,预测黄芪散可能通过AMPK/mTOR自噬信号通路改善NAFLD。体内实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠随机血糖、体质量、血清中TC、LDL-C和NEFA、肝脏湿重、肝指数和肝脏TG含量显著升高(P<0.01),小鼠肝脏增大,HE染色可见小鼠肝脏脂滴(LDs)大量空泡化,油红O染色显示肝细胞脂肪堆积,透射电镜未见明显自噬体和自噬溶酶体,微管相关蛋白1轻链3(LC3)A、LC3B、AMPKα1 mRNA表达和AMPK、磷酸化(p)-AMPK、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下调(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ、p-mTOR蛋白水平显著上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芪散低、高剂量组小鼠体质量、肝脏湿重、血清TG、NEFA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HE染色和油红O染色显示肝脏病理改变得到改善,肝脏透射电镜可见少量自噬溶酶体和自噬小体;黄芪散低剂量组肝指数显著降低(P<0.01),黄芪散高剂量组随机血糖、血清TC水平、肝脏TG含量明显降低(P<0.05);Western blot和Real-time PCR结果显示,黄芪散低、高剂量组LC3A、LC3B mRNA和LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著上调(P<0.01),p62 mRNA和p62、p-mTOR蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪散可能通过AMPK/mTOR信号通路促进自噬和恢复自噬通量,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。