制首乌总游离蒽醌对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型肝脏、脂肪组织重量及血脂、血清NO的影响

目的观察制首乌总游离蒽醌在防治动脉粥样硬化过程中对ApoE^(-/-)小鼠肝脏、腹腔脂肪组织重量及血脂、血清NO含量的影响。方法将36只ApoE^(-/-)小鼠随机分为正常对照组、模型组、制首乌总游离蒽醌高、中、低剂量组,除正常对照组外,高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,造模时间为4周。4周后开始按浓度给药,正常对照组、模型组予生理盐水灌胃,给药时间为6周。给药结束后处死,开腹腔取肝脏称重记录,摘除腹腔其余脏器后剥离腹腔脂肪组织并称重记录。试剂盒测定各组小鼠血脂、血清NO含量。结果与模型组相比,制首乌总游离蒽醌能降低腹腔脂肪组织重量;与模型组相比,制首乌总游离蒽醌能降低血清中TG、TC含量,并能提高HDL-C含量,具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,制首乌总游离蒽醌中、高剂量组能提高血清NO含量。结论制首乌总游离蒽醌具有一定的抗动脉粥样硬化作用,该作用可能与其调节血脂、影响血清NO含量有关。

制首乌总游离蒽醌对兔颈动脉粥样硬化模型中Caspase-3,8,9 mRNA表达的影响

目的观察制首乌总游离蒽醌在防治兔颈动脉粥样硬化过程中对Caspase-3,8,9 mRNA表达的影响。方法将36只雄性新西兰大白兔随机分成6组:正常对照组、模型组、血脂康组和制首乌总游离蒽醌高、中、低剂量组。免疫损伤法结合高脂饲料喂养建立AS模型,造模周期为12周。用制首乌总游离蒽醌i.g给药4周后,耳缘静脉取血离心,检测血脂水平;麻醉动物后,取颈动脉,用RT-PCR法检测颈动脉中Caspase-3,8,9 mRNA的表达。结果与模型组比,制首乌总游离蒽醌能降低TG的含量,高剂量组P<0.05,中、低剂量组P<0.01,TC、LDL的含量高、中、低剂量组均有显著降低P<0.01,均具有统计学意义;与模型组比,制首乌总游离蒽醌能降低Caspase-3,8,9 mRNA的表达水平,高剂量组P<0.01,而中、低剂量组P<0.05,均具有统计学意义;病理切片结果显示,制首乌总游离蒽醌能延缓动脉粥样硬化斑块的形成。结论制首乌总游离蒽醌具有抑制细胞凋亡延缓动脉粥样硬化作用,该作用机制可能与其可能下调Caspase-3,8,9mRNA的表达有关。

制首乌中大黄素对泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响

目的探讨大黄素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α及IL-1β表达的影响。方法选用RAW264.7细胞株作为实验对象,ox-LDL诱导其泡沫化并分为空白组,阳性对照组,激动剂组,阻断剂组,大黄素高、中、低剂量组。采用Real-time PCR法检测NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。结果与空白组相比,大黄素各剂量组均能影响NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达(P<0.01)。结论大黄素可能通过NF-κB信号转导途径调节RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路的制首乌大黄素有效成分抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化

目的探讨制首乌有效成分大黄素在抗动脉粥样硬化(AS)方面的作用机制,以ApoE-/-小鼠为研究对象,观察大黄素对AS模型中mTOR信号通路的调控作用。方法72只成年雄性ApoE-/-小鼠随机分成6组:模型组、高、中、低剂量组、阳性对照组和大黄素中剂量+雷帕霉素(联合用药)组,每组12只。所有小鼠用高脂饲料饲养9 w,并每隔1 d腹部皮下注射脂多糖(LPS)25μg/只。成模后停止LPS注射,并随机处死1只小鼠,进行主动脉油红O染色,确定成模。从第10周起,基于高脂饮食,高、中、低剂量组分别按照40、20、10 mg/kg灌服大黄素,阳性对照组按200 mg/kg灌服血脂康,联合用药组给予20 mg/kg大黄素及腹部皮下注射雷帕霉素1 mg/kg。所有药物体积为0.5 ml,持续给药6 w后取材。检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的浓度。取小鼠主动脉近心端2 cm进行切片苏木素-伊红(HE)染色,并在显微镜下进行病理观察。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA的表达。Western印迹检测心肌组织中mTOR、p-mTOR、PI3K、AKT蛋白表达。结果给药各组TC、TG、LDL-C水平均明显降低(均P<0.05)。除低剂量组外其余给药组HDL-C水平均明显高于模型组(均P<0.05)。模型组内膜明显增厚,可见大的脂质核心,斑块纤维帽变薄并伴有破裂;高剂量组内膜稍有增厚;中剂量组内膜增厚,稍有破裂,但细胞排列整体有序;低剂量组内膜变薄,有脂质堆积,见玻璃样变形成;阳性对照组内膜增厚,斑块纤维帽较薄;联合用药组内膜稍增厚,未见脂质。与模型组比较,高、中剂量组、阳性对照组和联合用药组mTOR mRNA水平明显降低(P<0.05);高、中、低剂量组和联合用药组PI3K mRNA水平明显降低(P<0.05)。高、中剂量组、联合用药组和阳性对照组AKT mRNA水平明显降低(均P<0.05)。与模型组比较,高、中剂量组、联合用药组PI3K蛋白表达水平明显降低(P<0.05);高、中剂量组AKT蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。高、中、低剂量组、阳性对照组和联合用药组mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。高、中、低剂量组和联合用药组p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论一定剂量制首乌大黄素对ApoE-/-小鼠AS模型病变有显著影响,其机制可能与抑制mTOR信号通路有关。

制何首乌中大黄素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中JAK2/STAT3通路的影响

目的：探讨制何首乌中大黄素抗动脉粥样硬化的作用机制并对两面神激酶2（JAK2）/信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路及相关因子细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的影响。方法：雄性Apo E基因敲除（Apo E-/-）小鼠80只,随机均分为8组,分别为大黄素高、中、低剂量组、模型组、阳性药组、阴性组、正常组和大黄素中剂量＋AG490组（DA组）。除正常组,余7组用高脂饲料饲养,并皮下注射脂多糖,9周后停注。第10周开始小鼠给药,6周后处死。酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3及SOCS3的含量,苏木素-伊红（HE）染色检测胸主动脉病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测肝脏JAK2,STAT3,SOCS3 mRNA的表达。结果：与模型组比较,大黄素高、中剂量组SOCS3含量显著增加,p-JAK2,p-STAT3含量显著减少（P〈0.01）,低剂量组SOCS3含量明显增加（P〈0.05）;JAK2,STAT3无变化;各指标DA组效果不如中剂量组且两组间存在明显差异（P〈0.01）,但STAT3相对表达量中剂量组与DA组有差异（P〈0.05）;各组SOCS3 mRNA表达明显增加,JAK2,STAT3 mRNA表达明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。HE染色切片镜下观察,大黄素高、中剂量能有效延缓动脉粥样硬化斑块形成,而低剂量的效果不明显。结论：大黄素能明显作用于Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的发生发展,该作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路有关。