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题名α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立
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作者
冷允俊
刘晓蕊
李琳
王盈
杨海元
戴一凡
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机构
南京医科大学江苏省异种移植重点实验室
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出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期688-694,共7页
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基金
国家自然科学基金(81874144)。
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文摘
目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A (GLA)基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料。方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal A的催化残基位置。通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体。将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定。结果 人/猪α-Gal A的氨基酸序列一致性为81%,相似性为89%;三维结构的均方根偏差值为0.012。猪α-Gal A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸。成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型。结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal A具有高度的相似性。利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础。
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关键词
FABRY病
α-半乳糖苷酶A基因
Α-半乳糖苷酶A
CRISPR/Cas9
猪胎儿成纤维细胞
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Keywords
Fabry disease
GLA gene
α-galactosidase A
CRISPR/Cas9
porcine fetal fibroblasts
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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