基因治疗:过去、现在和未来

基因治疗最初的概念是将包含正常基因的DNA序列通过载体导入细胞内以矫正由于该基因缺陷所导致的疾病。由于这个概念非常直观且易于接受,而临床上众多基因缺陷导致的遗传性疾病基本无药可治,因此基因治疗产生伊始便受到了高度关注。随着20世纪七八十年代以来基因工程技术的长足发展,基因治疗从实验室研究进入了临床探索,并于1990年完成了第一个基因治疗的临床试验,进入了一个高速发展期。10年后由于美国的一项基因治疗临床试验发生了患者的意外死亡,全球的基因治疗研究明显放缓。基因治疗的重新兴起以美国食品药品管理局(FDA)批准的治疗Leber先天性黑朦的Luxturna(2017)和用于治疗脊髓性肌萎缩症(SMA)的Zolgensma(2019)上市为标志,疗效确切、价格昂贵的基因药物终于成为临床医生手中能够为以往束手无策的患者解除病痛的有力武器。而除了基因替代性基因补充疗法,针对临床不同需求的基因编辑性基因矫正疗法、基于反义寡核苷酸和小干扰RNA的基因抑制疗法、基于基因开关的基因调控疗法等多种基因治疗方法均在综合研发中。为促进我国基因治疗的发展,本研究概述了基因治疗的发展过程和近年来的发展现状,并展望了基因治疗未来的发展。

2型糖尿病HDL2b的变化特点及对预测冠心病风险的意义

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)亚组分HDL2b的变化特点及对预测冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)风险的意义。方法采用病例对照研究的方法观察41例T2DM患者及41例空腹血糖正常(normal fasting glucose,NFG)对照者,病例均来自于北京市顺义区南法信镇35～74岁自然人群,2组研究对象的年龄、性别、体质量指数(body mass index,BMI)、腰围、臀围、血压均匹配,采用微流芯片(microfluidic chip)技术测定空腹血清HDL、HDL2b、HDL2b/HDL比率,并对10年CHD发生风险(10-year CHD risk)进行评估。结果 T2DM组患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、稳态模型胰岛素敏感指数(homeostasis model for insulin resistance,HOMA-IS)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistant index,HOMA-IR)、三酰甘油(triglycerides,TG)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、10年CHD发生风险均显著高于对照组(P<0.05),HDL、HDL2b、HDL2b/HDL比率显著低于对照组(P<0.01),HDL2b与FBG、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、TG、TC、HOMA-IR、10年CHD发生风险呈负相关,HDL2b与FBG及10年CHD发生风险相关性优于HDL。结论 T2DM患者HDL2b显著降低,10年CHD发生风险显著上升,与HDL相比,HDL2b预测CHD发生风险更加敏感。

应用RNA干扰技术体外抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达

目的 给探讨脂蛋白脂肪酶基因作为动脉粥样硬化基因治疗靶点提供实验基础。方法 利用RNA干扰技术在细胞水平抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达 ,根据人脂蛋白脂肪酶基因设计靶序列短发夹RNA ,构建重组干扰质粒pSIREN DNR shRNA ,将干扰质粒与人脂蛋白脂肪酶真核表达质粒 pCDNA3 hLPL以脂质体方法共转染COS 7细胞 ,通过实时荧光定量聚合酶链反应、Westernblot和活性检测等方法判断脂蛋白脂肪酶基因抑制的效果。结果 转染干扰质粒的细胞中脂蛋白脂肪酶mRNA、蛋白表达以及酶活性均明显降低 ,抑制率可达 70 %以上。结论 所选靶序列可以有效抑制细胞中脂蛋白脂肪酶基因的表达 。

应用骨髓移植研究巨噬细胞脂蛋白脂酶对严重高甘油三酯血症小鼠脂代谢的作用

目的研究骨髓中巨噬细胞来源的脂蛋白脂酶(LPL)对遗传性极高甘油三酯血症小鼠血浆脂蛋白代谢的作用。方法将8只雌性脂蛋白脂酶基因缺陷(LPL-/-,LK)小鼠随机分为两组,用1 000 rad137Cs照射,6 h后分别尾静脉注射脂蛋白脂酶基因缺陷的雄性小鼠及野生型(WT)雄性小鼠的骨髓。骨髓移植后通过眶静脉采血收集小鼠血浆,监测血浆甘油三酯、胆固醇、血浆脂蛋白脂酶活性等指标的变化,并用快效液相色谱技术检测血浆脂蛋白的分布。结果移植后第4周,与LPL-/-→LPL-/-骨髓移植组相比,WT→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯水平降低83.2%(P<0.05,n=4),胆固醇水平降低74.4%(P<0.05,n=4)。与骨髓移植前相比,WT→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯水平降低86.2%(P<0.05,n=4),胆固醇水平降低78.8%(P<0.01,n=4),脂蛋白脂酶活性增加4.5倍(P<0.05,n=4)。LPL-/-→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯、胆固醇水平以及血浆脂蛋白脂酶活性较移植前均无明显改变。结论骨髓巨噬细胞来源的脂蛋白脂酶对脂代谢具有重要的调节作用,可有效改善遗传性极高甘油三酯血症小鼠的高脂血症。

遗传性混合型高脂血症小鼠的自发性动脉粥样硬化

目的为探讨高甘油三酯血症对动脉粥样硬化的影响,建立了脂蛋白脂肪酶和载脂蛋白E双基因缺陷的混合型高甘油三酯和高胆固醇血症动物模型。方法比较了双基因以及载脂蛋白E基因缺陷小鼠的血浆甘油三酯,总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平,并对整条主动脉和主动脉流出道进行了动脉粥样硬化病变定量检测。结果发现双基因缺陷小鼠血浆甘油三酯是载脂蛋白E基因缺陷小鼠的3.8倍(5.904±0.505比1.536±0.860g/L),血浆总胆固醇也略有增加,但高密度脂蛋白胆固醇则无明显差异。两种小鼠的主动脉全长及流出道均有明显的粥样硬化,斑块面积占全部动脉的37.2%±10.7%比44.6%±18.1%,但之间无显著差异。结论载脂蛋白E基因缺陷合并脂蛋白脂肪酶缺陷虽然可以出现血浆甘油三酯增高,但动脉粥样硬化病变并没有加重。这可能与血管壁局部脂蛋白脂肪酶的活性相应降低而对动脉粥样硬化抑制作用有关。

国人心血管相关疾病的代谢特征和发病机制的探索与应用

随着社会经济的发展,国民生活方式的变化,尤其是人口老龄化及城镇化进程的加速,居民不健康生活方式日益突出,心血管疾病危险因素对居民健康的影响越加显著.目前应对心血管疾病的相关预警体系仍不完善.心血管疾病的发生发展与机体的代谢情况密切相关,糖脂代谢、能量代谢等重要代谢途径显著影响血管功能.因此,发现新的具有生理功能的代谢产物并阐明其作用机制,能够帮助团队深入了解心血管疾病的病理过程,发现新的潜在临床诊断和干预靶点.

2019新型冠状病毒、血管紧张素转化酶2与心血管药物

2019年底,武汉出现了由新型冠状病毒(2019-nCoV)引发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。该疫情在短时间内迅速蔓延,严重威胁着公共卫生安全。目前,COVID-19尚无有效的治疗手段。血管紧张素转化酶2(ACE2)作为受体介导2019-nCoV进入细胞,是目前最有可能防治COVID-19的靶点之一。中老年人是COVID-19的易感人群,多伴有基础疾病,且大部分为心血管疾病,因此这部分人更容易发展为重症和危重症,造成严重的临床后果。ACE2是肾素-血管紧张素系统重要的组成部分,以此系统为靶点的ACE抑制剂和血管紧张素受体阻断剂等药物,是目前临床治疗高血压、心肌重构和心力衰竭等心血管疾病的最主要的药物之一。本文系统地介绍了COVID-19以及肾素-血管紧张素系统相关药物及其临床应用,并且分析了肾素-血管紧张素系统相关药物在COVID-19防治中的价值,以及并发心血管疾病的COVID-19患者用药方面需要注意的问题。