基于RNA-Seq技术分析小半夏汤抑制1-PBG诱导的大鼠异食癖行为的转录组学特征

目的:采用选择性5-羟色胺3(5-HT3)受体激动剂1-phenylbiguanide(1-PBG)建立大鼠异食癖模型,通过转录组测序(RNA-Seq)技术分析小半夏汤止吐作用的转录组学特征,以进一步探讨其通过阻断5-HT3受体防治化疗性恶心呕吐(chemotherapy induced nausea and vomiting,CINV)的作用机制。方法:腹腔注射1-PBG(25 mg/kg,10 ml/kg)建立大鼠异食癖模型,给予小半夏汤灌胃(3.2 g/kg,每天分两次给予),连续灌胃3 d,每天记录大鼠高岭土摄入量。采用RNA-Seq技术检测回肠组织中差异基因表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠摄食高岭土量显著增加(P<0.01),小半夏汤3.2 g/kg组能够显著抑制模型对照组大鼠摄食高岭土(P<0.01)。转录组学测序分析结果显示,与正常对照组比较,模型对照组大鼠回肠组织中有759个基因明显上调(P<0.05),423个基因显著下调(P<0.05)。小半夏汤逆转了154个上调基因(P<0.05),这些基因主要参与白细胞跨内膜迁移、Th1和Th2细胞分化等炎症相关信号通路;逆转了92个下调基因(P<0.05),这些基因主要参与维生素消化与吸收、脂肪消化与吸收、PPAR信号通路等物质代谢相关信号通路。结论:小半夏汤可以通过阻断5-HT3受体从而发挥止吐作用。抑制炎症反应相关信号通路的激活、改善机体对营养物质的消化与吸收功能,可能是小半夏汤防治CINV的潜在作用机制。

连翘酯苷A对化疗模型小鼠胃肠动力障碍的改善作用

目的:观察连翘酯苷A对化疗小鼠胃肠动力障碍的影响,并探讨其调节胃肠动力的作用机制。方法:将60只KM小鼠随机分为正常组、模型组、甲氧氯普胺组(5 mg·kg^(-1))及连翘酯苷A低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg^(-1)),每组10只,雌雄各半。各组分别灌胃给药,灌胃容积均为10 mL·kg^(-1),每日1次,连续4 d。灌胃第1天1 h后,除正常组腹腔注射等量生理盐水外,其余各组均腹腔注射顺铂2 mg·kg^(-1),连续4 d。观察连翘酯苷A对模型小鼠胃排空和小肠推进的影响;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中胃泌素(GAS),生长抑素(SS),胃动素(MTL),血管活性肠肽(VIP)水平,检测胃窦和回肠组织中乙酰胆碱酯酶(AChE)和总一氧化氮合酶(tNOS)的活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃窦和回肠组织AChE和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠胃残留率和小肠推进率均显著升高(P<0.01),血清MTL,GAS,SS,VIP含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),回肠组织匀浆中AChE活性显著降低(P<0.01),胃窦和回肠组织中tNOS活性均明显升高(P<0.05,P<0.01),胃窦和回肠组织中AChE蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),iNOS蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,不同剂量连翘酯苷A可以不同程度地降低小鼠胃残留率和小肠推进率,升高血清MTL,GAS,SS,VIP含量,升高胃窦和回肠组织中AChE活性及蛋白表达水平,降低胃窦和回肠组织中tNOS活性和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:连翘酯苷A对顺铂所致的小鼠胃排空延缓和小肠推进亢进具有显著改善作用,其改善化疗所致胃肠功能障碍的机制与调节胃肠道AChE与NOS活性以及调节胃肠激素水平有关。

从细胞焦亡角度探讨6-姜酚、6-姜烯酚对化疗性小肠上皮细胞损伤的保护作用机制

目的:观察6-姜酚、6-姜烯酚对化疗性小肠上皮细胞(IEC-6)损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞活力,Hoechst33342/PI双染法观察细胞形态,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平,实时荧光定量PCR和Western Blot检测细胞中NF-κB/NLRP3炎症信号通路及Caspese-1/GSDMD介导的细胞焦亡相关基因和蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型对照组细胞活力显著降低(P<0.01),ROS水平升高(P<0.01),GSDMD-NT/GSDMD-FL比值和IL-1β/pro-IL-1β比值增大(P<0.05或P<0.01),p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspese-1蛋白过表达、Nlrp3、Asc、Caspase1、Gsdmd、Il18和Hmgb1基因异常表达(P<0.05)。与模型对照组相比,6-姜酚、6-姜烯酚均可显著提高化疗性损伤小肠上皮细胞活力(P<0.01),显著抑制顺铂诱导的细胞坏死和ROS的过量产生(P<0.01),明显降低GSDMD-NT/GSDMD-FL比值和IL-1β/pro-IL-1β比值(P<0.05),抑制顺铂导致的p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspese-1蛋白的过表达和Nlrp3、Asc、Caspase1、Gsdmd、Il18和Hmgb1基因的异常表达(P<0.05)。结论:6-姜酚、6-姜烯酚对化疗性小肠上皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抑制NF-κB/NLRP3/Caspese-1/GSDMD介导的细胞焦亡相关。