小鼠骨髓来源树突状细胞模型的建立及功能鉴定

目的通过快速高效获取小鼠骨髓有核细胞,建立小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cell,BMDC)模型,并对BMDC进行表面特异性标志物及功能鉴定。方法利用小鼠股骨和胫骨肌肉群分布的位置特点,快速游离出C57BL/6雄性小鼠的股骨和胫骨,获取骨髓细胞,使用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant murine granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(recombinant murine interleukin-4,rmIL-4)诱导培养成BMDC。光镜下观察细胞形态,流式细胞术检测BMDC的特异标志物CD11c,进行纯度鉴定。将BMDC分为2组:对照组和LPS组(1μg/ml),采用流式细胞术检测特异性标志物CD11c、CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子,CCK-8实验检测BMDC对脾脏淋巴细胞增殖能力的影响,qRT-PCR和Western blot检测BMDC中NF-κB的表达情况,进行功能鉴定。结果诱导培养7 d,镜下观察BMDC具有树突状突起的典型形态,CD11c表达可达97.4%,表明BMDC纯度能够满足后续实验需要。流式细胞术结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中特异性标志物CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子的荧光强度和阳性率显著增强(P<0.01)。CCK-8实验结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC刺激淋巴细胞增殖的能力明显增强(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中NF-κB的表达上调(P<0.001)。Western blot结果表明,与对照组比较,LPS组BMDC内p-NF-κB的表达上调(P<0.01)。结论成功建立了简单高效的体外诱导培养的BMDC模型,为DC免疫功能的基础研究和转化应用奠定了实验基础。